⑴ 列舉3種研究基因在體內表達方式的試驗方法
目的比較不同途徑遞送質粒DNA至Balb/c小鼠體內所誘導的報告基因表達效果。方法將編碼熒光素酶(luc+)蛋白的重組質粒(pGL-3-CMV)或空載體質粒pGL-3-basic以肌肉注射或電脈沖方法將10μg或100μg上述質粒注入小鼠股四頭肌,基因槍法以三槍接種質粒於小鼠腹部(2μg質粒DNA/4.5Mpa/槍)。於質粒注入後24~144h,檢測小鼠體內的熒光素酶活性。結果肌肉注射10μg的小鼠未檢測到熒光素酶的表達;肌肉注射100μg、電脈沖法遞送10μg和100μg質粒的小鼠,接種後48h體內熒光素酶活性達到峰值,遞送100μg的小鼠體內表達量明顯高於10μg的小鼠。基因槍免疫小鼠在接種24h達到峰值。結論電脈沖和基因槍介導的基因遞送方式基因表達水平遠遠高於傳統注射方法,是基因疫苗免疫遞送的可靠方法
⑵ 基因表達譜分析方法
表達譜案例分析
肺癌組織的表達譜分析：選取 2 個肺癌病人（ 5T 和 10T）的組織提取總 RNA，進 行分析。
實驗目的：為了檢測兩個病人中表達差異較大的基因， 以便找出兩個病人症狀差 異的原因，並進行下一步相關的研究。
1、 數據質量的概述
通過嚴格的質量標准篩選後， 通過率達到 80%，最終得到 500 萬左右的 Tag標簽。
2、 標簽的初步分析統計
兩個樣品中有 95%的 Tag重復頻度超過 1，73%以上的 Tag重復頻度超過 50。
3、 表達譜測序飽和度分析
通過對表達譜測序飽和度的分析，通常在表達譜 Tag數目達到 200 萬時，測序 Tag接近飽和。因此，通過 Solexa 測序，僅需要 1次試驗，就可以得到足夠後 續進行表達分析的數據。
4、 樣品重復性。
5、 Tag 標簽的注釋（含 cDNA，預測基因， EST，線粒體基因組，基因組等）
本案例中，人的 2 萬 7 千個基因中有 50~60%都被 Tag所覆蓋。即一般的基因的 表達量差異被檢測出來。 為了提高 Tag同基因關聯的可信度， 我們僅僅選取了在 基因序列中唯一定位的 Tag。這部分唯一定位的 Tag佔全部 Tag數目的 50%左右。
另外，除去上述用於基因表達量統計的唯一定位 Tag，有大約 20%的 Tag 被定位 到了基因組的未注釋區域， 其中大約有 10萬個 Tag在基因組上的位置是唯 一的。 利用這些數據我們找到了許多新的轉錄本和調控區域。 同時發現了若干潛在的兩 個樣品間顯著差異的區域。為後續的實驗提供了可靠的研究目標。
6、 參考 Tag標簽的統計分析
下表顯示的人的參考 Tag 的統計信息，我們可以看到 96.53%的基因都擁有 Tag。 說明 Tag-based 新一代測序技術的方法進行表達譜分析的可行性
7、 基因表達量的分布統計
8、 樣本間表達差異基因的相關分析
通過對表達差異基因的統計和分析，我們可以選取樣品間表達存在差異的基因， 反饋給用戶； 此外一些已經報道可能相關的基因， 是這一部分研究的重點， 通過 表達差異，我們可以推測出相關基因可能發生的變化。針對此例，圖 3-3 中 2 個基因是已經報道的在 10T樣品中高表達的基因。
9、 樣本間表達差異基因的信號通路相關分析
對差異表達基因進行功能分析和信號通路分析。 結合樣本性狀差異， 鑒定與性狀 關聯的候選基因，以便通過進一步實驗驗證。
10、 根據 Tag距離 3』端的位置對 tag 和基因數目進行的統計分析
⑶ 檢測基因表達的方法有哪些
基因工程第四步中包括導入檢測，轉錄檢測和翻譯檢測，方法分別是dna分子雜交技術、分子雜交技術、抗原-抗體雜交技術。有的還可在個體水平是進行檢測，如抗性檢測等
⑷ 基因表達的檢測方法有哪些
老兄。我掃個盲哈。檢測基因表達的方法主要有：表達譜，全轉錄組的信息，目前最流行平台包括47，000個轉錄本，檢測全基因組的表達變化。簡單的經典的方法有Northern Blot,常用的有反轉錄PCR，定量分析表達的變化qRT-PCR這些都是檢測單一轉錄子的方法。
⑸ 研究基因表達的方法
真核基因表達研究方法與應用
1、基因敲除技術 (Gene Knockout)
注意事項：
（1）、有合適的胚胎幹細胞（embryonic stem cells）；
（2）、有已知的單拷貝基因位點；
（3）、用線性載體或不能自我復制的載體。
2.蛋白質相互作用（Pull-down assay）Science, 289:1550-1554 (2000)
NFkB基因表達後導致細胞炎症，而NFkB基因的活化受炎症誘發因子的刺激。IKKα、IKKβ及NEMO（NFkB-essential modifier）抑制NFkB基因的表達。
3、導彈葯物--葯物導向治療
腫瘤或癌細胞表面通常過量表達某些特徵性蛋白質（如人乳腺癌細胞表面的28 kD 蛋白），可作為腫瘤導向治療的作用靶。將抗體的某些部分與外毒素相連接，就可以把毒素直接送到病變細胞表面，有效地殺死病變細胞，保護健康細胞。
⑹ 常用於研究基因表達的分子生物學技術
首先，基因表達是基因轉錄和翻譯的過程，大多數基因表達都經歷「轉錄→翻譯→蛋白質」的過程，因此研究基因表達就是檢測mRNA和蛋白質。DNA印跡，是通過雜交檢測DNA的缺失、插入的方法；RNA印跡和反轉錄PCR分別通過雜交、逆轉錄和PCR檢測mRNA的方法；Weasten印跡，是通過雜交蛋白質的方法。
所以常用的基因表達分子生物學技術有：RNA印跡和反轉錄PCR，Weasten印跡。
⑺ 檢測基因表達水平差異的方法有哪些
基因的表達是dna-rna-蛋白,期間有轉錄水平調控、轉錄後調控、翻譯後調控等多種調控機制影響該基因的表達.
所以蛋白水平高低的原因就可能是多方面的.蛋白表達多,可能是mrna多,也可能mrna變化不大,而是翻譯多了；蛋白表達少,原因亦然.
從2個水平檢測一個基因的表達,可以更全面地了解該基因在該組織某個時期或某種條件下的變化受到什麼水平的調控.
所謂基因表達,就是從dna到mrna再到蛋白的一個過程,基因表達水平一般是通過該基因轉錄的mrna的多少來衡量的.
每個基因轉錄產生的mrna的量,是受到時空等多種因素調控的,個體在不同的生長發育階段,或者不同的組織水平,基因轉錄出mrna的量都是不一樣的.
例如,當某種植物長期生長在高鹽的環境里,該植物體內與抗鹽相關的基因的表達量就會增加,以適應這種高鹽環境,是植物能夠生存下來,這時植物抗鹽相關的基因表達水平就相對高
檢測基因表達的方法：
轉錄水平檢測：rt-pcr，real-time pcr，northern blot
翻譯水平檢測：western blot
還有直接檢測，如報告基因、融合熒光蛋白等。
rt-pcr是反轉錄pcr，是半定量方式。real-time pcr可以精確定量。 二者不同。後者為了區別於rt-pcr，一般不縮寫。
各位觀眾老爺們大家好!我是吆五，打算從今以後不定期分享一些生物類的專業知識。
一方面供自己學習積累，另一方面也希望對大家有所幫助。
生物是很枯燥的呢
⑻ 列舉兩種研究基因表達模式的方法並簡述其原理
1、經典的半定量RT-PCR和實時熒光定量RT-PCR。提取總RNA，通過光度計和電泳法檢測質量並定量，採用反轉錄試劑盒進行反轉錄。對於半定量RT-PCR，採用內標基因（如25SRNA）引物對各樣品進行普通PCR擴增和電泳，證明反轉錄成功，並通過調整加入的總cDNA第一鏈的量，使各樣品間內標擴增條帶亮度達到一致。然後以此總cDNA第一鏈的模板量進行目標基因的普通PCR擴增，電泳後通過條帶有無和亮度強弱來比較各樣品間（器官組織間、發育階段間、誘導時間間等）目標基因表達的水平的差異性或變化動態。對於實時熒光定量RT-PCR，反轉錄完成後，通過內標基因或其它基因的擴增證明反轉錄成功，然後直接對內標基因和目標基因進行實時熒光定量PCR擴增，通過儀器自動檢測Ct值來比較各樣品間目標基因表達水平的差異性或動態變化。
2、晶元雜交法和SAGE法。將各樣品的總RNA反轉錄得到的總cDNA進一步合成為雙鏈總cDNA，用適當的酶切處理，得到小片段，然後與晶元雜交，電腦對不同樣品間相同基因的雜交信號強度進行疊加處理，自動分析出各樣品間各基因表達水平的表達差異性或變化動態。SAGE (serial analysis of gene expression)是基因表達系列分析，將各樣品總cDNA採用適當酶切，得到短片段，然後互相連接成800bp左右的串聯體，然後測序，然後採用電腦自動統計各基因被測序到的次數，以此表示各樣品內各基因表達的豐度，然後比較各樣品間各基因表達水平的差異性或動態變化。
⑼ 基因表達的方式有哪些
基因表達概念：就是基因轉錄和翻譯的過程。
基因表達的方式有（1）組成性表達也稱基本表達：有些基因產物對生命全過程都是必需或不可少的。這類基因在一個生物個體的幾乎所有細胞中持續表達，不易受環境條件的影響，稱基本表達，更簡單來說，管家基因的表達稱為基本表達。
（2）誘導：有一些基因對環境信號應答時被激活基因表達產物增加，這種基因表達方式稱為誘導。
（3）阻遏：有一些基因對環境信號應答時被抑制，基因表達產物水平降低，這種基因表達方式稱為阻遏。
⑽ 基因有哪些表達方式
基因表達調控分為很多水平：
1.dna和染色體水平：基因丟失、基因修飾、基因重排、基因擴增、染色體結構變化。
2.轉錄水平調控(主要調控方式）：轉錄起始、延伸、終止均有影響。原核生物藉助於操縱子，真核生物通過順式作用元件和反式作用因子相互作用進行調控。
3.轉錄後水平調控：主要指真核生物原初轉錄產物經過加工成為成熟的mrna，包括加帽、加尾、甲基化修飾等。
4.翻譯水平調控：對mrna穩定性的調控、反義rna對翻譯水平的調控等。
5.翻譯後水平調控：蛋白質的剪切、化學修飾（磷酸化、乙醯化、糖基化等）、轉運等。
6.mrna降解的調控。