美司鈉液相有關分析研究方法

❶ 液體成份的檢測

需要找專業的檢測機構，外面大大小小做檢測的機構很多，但是精準度層次不齊，首先得選擇業內口碑好的公司，一些小企業很多也只是外包的，因此周期和費用也是偏差的。

❷ 葯學畢業設計(論文)開題報告

葯學畢業設計(論文)開題報告範本

課題名稱 HPLC法測定伏立諾他有關物質和含量的研究

[研究的主要目的和意義]

vorinostat (商品名Zolinza) 是Merck 公司開發的世界上第一個抑制組蛋白脫乙醯基酶( his2tone deacetylase ,HDAC) 的新型抗癌葯物,該葯於2006 年10 月6 日獲得美國FDA 批准上市,用於其他葯物治療時或治療後仍不能治癒、或惡化、或病情反復情況下的轉移性皮膚T 淋巴細胞瘤。vorinostat 化學名: N-羥基-N苯基辛二醯胺;英文名: N-hydroxy-N-phenyloctane-diamide

vorinostat 屬於組蛋白去乙醯化酶抑制劑類抗腫瘤葯物,低濃度( IC50 < 86 nmol·L - 1) 即可以有效抑制組蛋白脫乙醯酶HDAC1 、HDAC2 、HDAC3 和HDAC6 的活性,抑制組蛋白次乙醯化,因而從基因水平調控細胞周期,阻斷癌細胞基因復制,並激活其凋亡基因,達到抑制和殺滅癌細胞的效果。但vorinostat 的抗癌機制仍在深入研究之中,其具體作用機制尚不完全清楚[6 - 7 ] 。兩項臨床試驗證明了vorinostat 的安全性和有效性,其中包括107 名接受其他葯物治療後又復發的CTCL 患者。按皮膚損傷改善標准評分等級的判斷,接受Zolinza 治療的患者中30 %有所改善,療效平均持續168 d。

一些生物學數據已經證明了vorinostat 在皮膚癌，前列腺癌治療中的有效性。而且近年研究vorinostat 不僅可以單獨作為腫瘤治療葯物,還可以與其它抗癌葯物聯合用葯, 減少對正常細胞的'毒性,具有增效作用。可與轉錄調節因子(如52 雜氮22′2 脫氧胞苷、視黃酸、mRNA 轉錄抑制劑flavopiridol)[51- 53] 、凋亡受體配體(如阿黴素、長春新鹼、依託泊苷、多 烯 紫杉醇)[54- 56]、化療葯物(如抗代謝葯吉西他賓、全反式維甲酸) [57,58]以及激酶抑制劑、放射線等聯合用葯。近年來研究發現vorinostat

還可影響到有絲分裂、DNA 復制和修復以及調控非組蛋白的蛋白質乙醯化程度。但是該葯用於臨床治療癌症仍然需要解決一些問題如: 抑制劑對HDAC 酶系的選擇識別作用、選擇最佳葯用劑量、治療周期以及尋找更多可以促進這種葯抑製作用的物質等。毋庸置疑,隨著對HDACIs 抗癌機理的深入研究,vorinostat 將會有廣闊的應用前景。

伏諾立他目前在國內還沒有上市，我們准備仿製該品種，建立該葯的質量標准，用建立的標准對原料和制劑進行有關物質和主葯含量進行研究。

[採用的研究手段及文獻綜述]

根據破壞試驗的結果，結合伏立諾他合成工藝，建立伏立諾他有關物質檢查方法，並對其進行方法學驗證。

1.儀器與葯品

Waters 996光電二極體陣列檢測器，Waters Empower色譜工作站，試葯及其中間體均由南京海納醫葯科技公司提供

2. 色譜條件的建立

2.1檢測波長的選擇

取伏立諾他適量,用流動相製成每1ml含15μg的溶液,照分光光度法(中國葯典2005年版二部附錄Ⅳ A)在200～400 nm波長范圍內掃描測定

2.2系統使用性試驗

色譜柱:Diamonsil C18 ( 250 mm ×4. 6 mm, 5μm)色譜柱為分析柱;乙腈- 0.1%磷酸溶液(三乙胺調PH3.0)為流動相，不斷調節流動相比例，梯度洗脫，流速為1.0 ml ·min- 1 , 檢測波長為241nm, 柱溫30℃, 進樣量: 20μl。

根據合成工藝,伏諾立他成葯中可能引入一系列的合成中間體及原料還有雜質，取本品可能帶入的雜質、中間體分別加流動相適量溶解;另取雜質中間體及伏立諾他適量,用流動相製成適宜濃度的溶液,精密吸取雜質，中間體與吡非尼酮混合溶液各20 μl,分別進樣，考察分離度，理論塔板數，及拖尾因子，再根據具體條件進行調整，選出最適合的條件。

2.3專屬性試驗

取供試品,進行高溫、光照、酸、鹼、氧化破壞試驗。

熱降解溶液的配製:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,置140℃高溫4 h後,用流動相溶解並稀釋至刻度; 光降解溶液的配製:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,用流動相製成每1 ml含吡非尼酮0. 8 mg的溶液,置紫外燈光下48 h;

酸降解溶液的配製:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加2mol·L - 1鹽酸溶液5 ml,放置4 h,用2 mol·L - 1氫氧化鈉溶液調至中性,加流動相稀釋定容;

鹼降解溶液的配製:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加2mol·L - 1氫氧化鈉溶液放置4 h,溶液顏色變黃,另加2 mol·L - 1鹽酸溶液調至中性,加流動相稀釋定容;

氧化破壞溶液的配製:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加過氧化氫5 ml,避光放置4 h,用流動相稀釋定容。照高效液相色譜法,取上述各溶液各20μl進樣,記錄結果，進行分析 2.4線性范圍：

精密稱取伏立諾他對照品約15 mg,置50ml量瓶中,加流動相溶解並稀釋至刻度,搖勻,作為貯備液。分別精密量取貯備液1、2、3、4、5 ml置10 ml量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻。分別取溶液20μl分別注入色譜儀,記錄色譜圖,量取峰面積,由溶液濃度(C) 對峰面積(A)線性回歸。

2.5檢測限：取空白基線一段,計算其噪音峰高,再將伏立諾他樣品溶液用流動相稀釋適當濃度進樣,使其峰高為噪音峰高的3倍,記錄檢測限。

2.6精密度試驗

2.6.1 進樣精密度：取標准曲線項下高、中、低三種濃度的溶液,分別重復進樣5 次,以峰面積來考察精密度。

2.6.2中間精密度：選擇不同人員,分別測定同一批樣品的含量。

2.7重復性試驗：分別取同一批樣品, 6份,精密稱定,照樣品測定項下操作,計算含量。 2.8穩定性試驗：照標准曲線項下的方法配製高、中、低三種濃度 的溶液,分別於0、1、2、4、6、8 h測定。考察其穩定性

2.9含量測定：取本品適量,精密稱定,用流動相製成每1ml含50μg的溶液,作為供試品溶液,精密量取20μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,量取峰面積;另取經乾燥至恆重的伏立諾他對照品適量,同法測定,按外標法以峰面積計算,即得。

2.10有關物質測定：取本品適量,精密稱定,用流動相製成每1 ml含0.5mg的溶液,作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 ml,置100 ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液。精密量取對照溶液20μl,注入液相色譜儀,調節檢測靈敏度,使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10% ～25%;再精密量取供試品溶液和對照溶液各20μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰,最大單個雜質峰面積不得大於對照溶液主峰面積的1 /2 ( 0.5% ) ,各雜質峰面積總和,不得大於對照溶液主峰面積( 1% )。

參考文獻：

【1】胡 楊，陳國華，吳 燕，楊尚彥.伏諾立他的合成[J].中國醫葯工業雜志，2009，40(7)：481-482.

【2】黃小平，徐江. 組蛋白去乙醯化酶抑制劑類抗癌葯Vorinostat[J].化工中間體，2009，06：11-13.

【3】Sakajiri S, Kumagai T, Kawamata N, et al. Histone deacetylase inhibitors profoundly decrease proliferation of human lymphoid cancer cell lines [J]. Exp Hematol, 2005,33(1): 53-61.

【4】Robert A.Parise, Julianne L.Holleran, Jan H.Beumera, Suresh Ramalingama, Merrill J. Egorin. A liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometric assay for quantitation of the histone deacetylase inhibitor, vorinostat (suberoylanilide hydroxamicacid, SAHA),and its metabolites in human serum[J]. Chromatography B, 840 (2006) 108

❸ 三氟乙酸鈉液相分析方法

1、須高pH。前曾述及當pH高於8會融溶「硅膠」的骨幹造成傷害，因此 pH高於8的移動相，則不建議使用。若必須使用高 pH 移動相以增進分離效應者，須選用耐高 pH 的層析管。一般的認知，硅膠具高純度、高質量的官能基化學鍵結及完善硅醇基的終結處理，都是降低或減少被融溶，即降低對層析管材質的傷害。或是少用「磷酸鹽」因為高 pH會促進硅膠的融溶。或是有機相改用 Pyrrolidone 可防止在高 PH的融溶。即使是如此的注意使用，旦常用於高 pH 移動相，層析管壽命會受影響的。
2、須調和鹽類的濃度。移動相調和鹽類在於提供適切的 pH，若僅為 pH 需求，則些許少量即可。多數注入分析的量大約是在ng/ml至ug/ml范圍，如此即使注入了 100ul 作分析，也不過是數百 ng 的量，只要些許於 pKa 值的一個pH 變化量的鹽類即夠充分。層析管材料被鹽類充分布滿也是 Buffer 量的考慮，然而，越是更純的硅膠,越是毋須高 Buffer量的使用。這一點，可由 Figure 4，不同TFA使用量的移動相所獲得不同的圖峰型，Figure4左邊的三種層析管，使用了 0.1% TFA 之圖峰型優良。若降低為 0.01%TFA 時，有的圖峰則變得不成峰型，以上就是三氟乙酸鈉液相的分析方法。

❹ 液相色譜+質譜，對脂質組學進行分析，求助各位

色譜可作為質譜的樣品導入裝置，並對樣品進行初步分離純化，因此色譜/質譜聯用技術可對復雜體系進行分離分析。因為色譜可得到化合物的保留時間，質譜可給出化合物的分子量和結構信息，故對復雜體系或混合物中化合物的鑒別和測定非常有效。氣相色譜／質譜聯用和液相色譜／質譜聯用等已經廣泛用於葯物分析。

液相色譜/質譜聯用，主要用於分析GC/MS不能分析，或熱穩定性差，強極性和高分子量的物質，如生物樣品（葯物與其代謝產物）和生物大分子（肽、蛋白、核酸和多糖）。

簡單的說，就是利用HPLC的分離技術，將混合的東西分離成單一的物質，依次進入質譜，打成碎片，然後從物質的結構分析，可以大體判斷鍵的斷裂方式，然後通過質荷比對照相應的對照圖庫大概判斷碎片的分子結構，從而來對未知物質做定性，但是質譜並不是百分百的確定結構，要准確的確定物質結構，還要做很多其他的東西，比如核磁H譜C普等。

因質譜需要離子化，所以流動相的要求比較高，常見的鈉鹽鉀鹽都不可以用，給你個表參考

❺ 高效液相色譜儀(HPLC)檢測水中的多環芳烴的方法

高效液相色譜儀檢測水中的多環芳烴;此方法適用范圍：僅適用於水中的多環芳烴的檢測

取樣；取1000mL水樣(富集時可根據水質情況適當增減)，加入5g氯化鈉和10mL甲醇待凈化。凈化；SPE柱：WelchromCI8E(500mg/6ml)活化：10ml二氧甲烷、10ml甲醇以及10ml水上樣：將處理好的水樣加入到SPE柱洗脫：10ml正已烷分三次洗脫,收集洗脫液,60°CN濃縮近干,用乙睛定容至1ml,供HPLC分析色譜條件；試驗儀器：APS80-16PLUS高效液相色譜儀色譜柱：APS-C18(250mmx4.6mm,5μm)柱溫：20°C進樣量：20μl流速：1.0ml/min流動相：甲醇-水採用梯度洗脫：如表1所示

❻ 請問HPLC是做什麼的原理操作方法

HPLC是高效液相色譜，英文全稱是High Performance Liquid Chromatography。該方法在化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中被用來做重要的分離分析技術。

用途：高效液相色譜更適宜於分離、分析高沸點、熱穩定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質，因而廣泛應用於核酸、肽類、內酯、稠環芳烴、高聚物、葯物、人體代謝產物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除莠劑的分析等物質的分析。

原理：高效液相色譜以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析和分離。

操作方法：如下圖所示，溶劑貯器中的流動相被泵吸入，經梯度控制器按一定的梯度進行混合然後輸出，經測其壓力和流量，導入進樣閥（器）經保護柱、分離柱後到檢測器檢測，由數據處理設備處理數據或記錄儀記錄色譜圖，餾分收集器收集餾分，廢液瓶收集廢液。

(6)美司鈉液相有關分析研究方法擴展閱讀：

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上，於60年代後期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。

HPLC根據固定相和流動相的成分分為正相色譜和反向色譜。

正相色譜法

採用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用於分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。

反相色譜法

一般用非極性固定相（如C18、C8)；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用於分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個HPLC應用的80%左右。

參考資料：網路-高效液相色譜

❼ 怎樣用液相色譜分析1-2-4三氮唑鈉含量

怎樣用液相色譜分析1-2-4三氮唑鈉含量
1，首先必須去進行配製葯物溶液前處理的工作。找出該葯物的溶解性，探索出該葯物的有效溶劑，使該葯物能在該溶劑中充分溶解，這是葯物溶液配製的前處理必然途徑，也是進行高效液相色譜含量分析的首要條件。

2，然後就是根據該葯物配製溶液的前處理方法，配製好適當濃度的葯物溶液，利用該葯物溶液，在紫外-可見分光光度計上進行紫外掃描，找到該葯物的最大吸收波長，確立適合的高效液相色譜分析的檢測波長。因為它是進行高效液相色譜含量分析的基本條件

3，再是色譜柱的選擇：根據葯物的極性來選擇合適極性的色譜柱類型

4，再是流動相的確立。配製一系列的流動相，考察合適的流動相。

5，再是准確度考察。通過精密度、重復性和重現性的考察來衡量儀器的准確度

6，接著是線性關系考察。配製不同濃度的一系列溶液，進行其溶液的色譜掃描。根據所得的不同濃度下的葯物峰面積作為縱坐標（Y軸）、以溶液濃度為橫坐標（X軸）進行線性回歸，得到其線性圖，考察其線性程度，即線性相關系數R=？。考察的目的就是：為了我們在做含量分析時，選擇一個合適的濃度進行檢測，不至於你配製的待測溶液濃度范圍不在線性范圍之內，造成測量結果的錯誤。

7，再是最低檢測濃度和檢測限的考察。目的是為了考察這種方法的實用性，是否符合痕量分析的要求。

8，再是回收率考察。目的是考察方法的准確性。

9，再是穩定性考察。目的是考察試驗方法的時間性，指導我們在分析檢測時，建立合適的溶液配製到進樣的時間段，保證實驗結果的准確性。

❽ 高效液相色譜法檢測保健食品中肉鹼的含量要怎麼檢測

高效液相色譜法檢測保健食品中肉鹼的含量

1范圍

建立了高效液相色譜法測定保健食品中肉鹼含量的方法。

本法適用於以肉鹼為主要原料的保健食品中肉鹼的測定。

2原理

用0.5mmol/l鹽酸溶液超聲提取樣品中的肉鹼，用反相高效液相色譜法分離。標准樣品的保留時間是定性的，外部標准方法是定量的。

3試劑和材料

註：除非另有規定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。

3.1 試劑

3.1.1 磷酸氫二鉀（K2HPO4）。

3.1.2辛烷磺酸鈉(C8H19NaO3S)。

3.1.3 鹽酸（HCl）。

3.1.4磷酸（H3PO4）。

3.1.5硅藻土（SiO2）：化學純。

3.1.6乙腈(C2H3N)：色譜純度。

3.2 試劑配製

3.2.1鹽酸溶液（0.50 mmol/L）：吸收4.2 ml鹽酸，用水稀釋，體積為100 ml。然後取1mL上述溶液，用水稀釋，定容至1L·L~(-1)。

3.2.2緩沖液：分別稱取磷酸氫二鉀8.7g，辛烷磺酸鈉0.4325g，溶於水，稀釋至1L，用磷酸調節至pH 2.5。

3.3 標准品

肉鹼（C7H15NO3）：純度≥98%或經國家認證認可的標准物質..

3.4 標准溶液配製

3.4.1肉鹼標准儲備液（1.0 mg/ml）：肉鹼標准品25 mg（精確至0.1 mg）精密稱取25 ml容量瓶中，溶於鹽酸溶液中，定容至刻度，搖勻。

3.4.2肉鹼標准工作液：標准肉鹼標準保留液在5 mL瓶中，用鹽酸稀釋至規模化，經0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL准確吸收，得到0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、0.60 mg/mL、0.80 mg/mL、1.0mg/mL的標准工作液。

4儀器

4.1高效液相色譜法：配備紫外檢測器或二極體陣列檢測器。

4.2平衡：靈敏度為0.1mg和0.01mg

4.3 超聲波提取器。

5分析步驟

5.1 試樣制備

5.1.1 試樣處理

5.1.1.1 固體試樣

樣品粉碎混合均勻稱取0.1g~2g（精確至0.001g）（含待測組分約5mg~50mg）。將鹽酸溶液加入50ml容量瓶中，超聲提取10min，冷卻，用鹽酸溶液稀釋至刻度，混勻，過濾，計數一次濾液毫升數，收集濾液，經0.45um水相膜過濾，取連續濾液進行檢測。

5.1.1.2 軟膠囊試樣

樣品被切開、擠壓和混合，重量為0.1g≤2g(精確到0.001g)，加入相同量的硅藻土，進行均勻分散研究，並說其中一部分(精確到0.001g，約5 mg~50 mg)，被測組分用塞狀三角瓶轉移到250 ml，吸收鹽酸溶液50 ml，加入三角瓶，稱重，填充超聲萃取10 min，冷卻，與鹽酸溶液混合，在毫升中丟棄初始濾液，收集濾液，經過0.45μm的水相濾膜，取濾液進行測量。

5.1.1.3 液體試樣

精密測量：1毫升～5毫升（含約5毫克～50毫克的待測組分），35毫升鹽酸溶液加入50毫升容量瓶，超聲提取10分鍾，冷卻，用鹽酸溶液稀釋，混合，過濾，丟棄一級濾液毫升，收集濾液，通過0.45微米水相濾膜，取連續濾液進行測定。

5.1.2 稀釋

根據樣品中肉鹼的含量，將溶液中的肉鹼稀釋至0.10mg/mL~1.0mg/mL。用鹽酸溶液。

5.2 色譜參考條件

5.2.1柱：C18柱：4.6*250 mm，5微米或同性能柱。

5.2.2流動相：緩沖溶液90 10。

5.2.3流量：0.8ml/min。

5.2.4 檢測波長：210nm。

5.2.5 進樣量：20μL。

5.3 標准曲線的製作

將肉鹼標准工作液(3.4.2)分別從低濃度到高濃度注入高效液相色譜(HPLC)中，並測定相應的峰面積。以標准工作液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標准曲線

5.4待測溶液的測定

在相同的色譜條件下，將待測液（5.1.1.1，5.1.1.2，5.1.1.3，5.2.1）注入高效液相色譜法按保留時間定性測定峰面積，按標准曲線計算待測溶液中肉鹼的濃度

6 分析結果的表述

試樣中肉鹼含量按式（1）計算：

X—固體樣品中肉鹼含量為g/100g，液體樣品中肉鹼含量為g/100ml。

根據每毫升毫克標准曲線(毫克/毫升)計算待測溶液中肉鹼的濃度。

V—試樣的稀釋體積，單位為毫升（ml）；

M/L-取樣質量，以克(G)為單位；抽樣量，以毫升(毫升)為單位；

F——稀釋倍數；

100——單位轉換；

1000——單位轉換。