液相色譜提高分析速度的方法

① 與普通的色譜法相比高效液相色譜法是如何提高分離速度的

提高分離速度是由於對流動相加壓，使流動相流速加快。提高分離度是由於採用粒徑小的固定相，使柱效提高。

② 如何提高液相的分離度

這個需要試一下。
首先，如果兩個物質在液相上的保留時間非常接近，可以調整有機相比例。如果減少有機相，兩個峰可能會被拉開。也可以考慮設置梯度方法，會讓峰型跑得比較好，然後讓兩個物質分開。
然後，也可以考慮調整水相溶液的pH值，這個要看物質的酸鹼度。如果兩個都是中性物質，那麼調整pH值意義就不打了。

如果都不行，只能考慮更換色譜柱。比如反相色譜柱，C18可以更換成C8柱，苯基柱，然後看看情況。

③ 在液相色譜中，為了提高分離效率，縮短分析時間，應採用什麼裝置

柱溫箱，我這幾天溫度提高，保留時間提前了5分鍾左右
還有可以加大流速，也可以縮短分離時間

④ 第二十章：高效液相色譜法

與經典色譜比較優點：

與氣相色譜比較：

按固定相聚集狀態：液液色譜法、液固色譜法

按分離機制：分配、吸附、離子交換、分子排阻四類基本機制

其他分離機制：親和色譜法、手性色譜法、膠束色譜法、電色譜法、生物色譜法

目前最常用固定相是化學鍵和相，稱為化學鍵和色譜法

鍵合相：通過化學反應將有機基團鍵合在載體表面構成的固定相

正相NP、反相RP

採用氰基、氨基等作為固定相，非極性或弱極性溶劑為流動相。

分離極性至中等極性分子行化合物

分離機制一般認為是分配，也有認為是吸附如形成氫鍵的

一般規律：劑型強的組分容量因子k大，後出。流動相極性增強洗脫能力增強

十八烷基硅烷、辛烷基硅烷等，有時也用弱極性或中等極性

流動相以水作為基礎溶劑再加一定量極性調整劑

分離機制有爭論，多種理論模型

影響組分保留行為的主要因素：

分離非極性至中等極性組分

離子對色譜法（IPC）分正相和反相，正相已經少用。

反相離子對色譜法（RP-IPC）是把離子對試劑加入到含水流動相中，使被分析組分離子在流動相中與離子對試劑的反離子生成不帶電荷的中性離子，使組分k增加，用於分離可離子化或離子型化合物

用於生物鹼類、兒茶酚胺類、有機酸類、維生素類、抗生素類葯物分析

離子色譜法：將離子交換色譜與電導檢測器相結合分析各種離子的方法

可以分析無機和有機陰陽離子，氨基酸、糖類、DNA和RNA的降解產物

分為抑制型（雙柱型）、非抑制型（單柱型）

對於X ^- 離子：

雙柱型使用兩根離子交換柱，一根為分離柱，填有低交換容量的陰離子交換劑，另一根為抑制住，填有高交換容量的陽離子交換劑，兩者串聯。進入分離柱的組分X ^- 按正常離子交換色譜分離，在進入抑制柱，除去組分中的OH ^- 從而使本底電導率降低，利於較大電導率HX的檢測。

非抑制型可使用更低交換容量的固定相，濃度很低、電導率很低的流動相，這樣本底電導率低，試樣離子被洗脫後可直接被電導檢測器檢測

利用手性固定相（CSP）、手性流動相添加劑（CMPA）分離分析手性化合物的對映異構體的色譜方法。還有間接法（加入手性試劑使一對對映體轉變為非對映體用常規方法分離）。

環糊精（CD）也是一種手性選擇劑，分離機制主要是由於分子內熟睡空腔的動銷和多手性中心的作用，如果對映體能被空腔緊密包絡，而且與CD分子外沿的仲醇基作用，則被固定相保留，兩對映體與CD作用程度不同從而分離。

親和色譜法（AC）利用或模擬生物分子之間的專一性作用，從復雜試樣中分離和分析能產生轉移性親和作用的物質的一種色譜方法。選擇性最高。

要求：顆粒細且均勻、傳質快、機械強度高、耐高壓，化學穩定性好

液固：全多空硅膠、高庚子多空微球

應用最多的是化學鍵和相

要求：化學穩定性好；適宜溶解度；與檢測器相適應；純度高；粘度低

使用前經微孔濾膜過濾，除去固體顆粒，還要脫氣處理

分離方程式：

選擇合適的溶劑強度使組分k在最佳范圍內，選擇合適種類的溶劑改善選擇性使α增大獲得良好分離度R>1.5

在化學鍵和色譜中溶劑洗脫能力即溶劑強度直接與它的極性相關。

溶劑極性用溶劑極性參數表示 ，用以表示正相色譜中洗脫能力

反相鍵合相色譜溶劑強度用另一強度因子S表示

混合溶劑可以用P或S的加權平均表示

HPLC速率理論方程：

盡可能減小柱外死體積

（349頁圖）

高效液相色譜儀一般由高壓輸液系統、進樣系統、色譜柱分離系統、檢測系統和數據處理系統組成

分類：

要求：靈敏度高、雜訊低、線性范圍寬、重復性好、適用范圍廣

紫外檢測器UVD：不破壞樣品，只能檢測有紫外吸收物質、對流動相有限制

熒光檢測器FD：靈敏度更高，只適用於產生熒光物質，體內葯物分析常用

電化學檢測器ECD：極譜、庫侖、安培、電導。電導用於離子檢測，安培應用廣泛，靈敏度高適用於痕量組分分析，凡是具有氧化還原活性的都能進行檢測

蒸發光散射檢測器ELSD：適用於揮發性低於流動相的組分，用於糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、三醯甘油及甾體；對各種物質幾乎有相同響應；但是靈敏度低，流動相必須是揮發性不能含有緩沖鹽。

儀器自動化：

採集和分析色譜數據：

中心計算機控制系統：

超高效液相色譜法UPLC：藉助於HPLC理論及原理，利用小顆粒固定相，非常低的系統體積及快速檢測手段等技術，使分離度、分析速度、檢測靈敏度及色譜峰容量大大提高，從而全面提升了液相色譜的分離分析效能。

操作條件比較（355表）

優點：分析速度快；分離效能高；靈敏度高——小顆粒技術和整體化儀器設計

van Deemter方程，可以發現固定相粒度越小，分離度越大。同時粒度越小，最佳流動相線速度越大，並有更寬優化范圍，因此降低粒度可以提高分析速度。但是會增加系統柱壓差，受到固定相機械強度和色譜儀系統耐壓性限制

常用外標和內標，少用歸一化。對葯品中雜質含量測定常用主成分自身對照法

主成分對照法分為不加校正因子和加校正因子兩種：

注意進行色譜系統適用性試驗：理論塔板數、分離度、拖尾因子和重復性

⑤ 如何提高液相色譜分離度

液相色譜法中分離度的提高的幾種方法:
1.改變有機改性劑的種類和比例
2.改變流動相的pH值
3.減小流速
4.降低柱溫
5.減少進樣量
6選擇粒徑小的色譜柱
7.選擇較長的色譜柱.

⑥ 提高液相色譜中柱效的有效途徑有哪些

提高液相色譜中柱效的有效途徑有：減小填料粒徑，增加色譜柱長，使用盡量大小均一、外型規則的填料，使用合適的流速，使用合適的流動相組成，使用合適的固定相。

高效液相色譜的工作方式：

在柱層析中，溶劑在重力作用下滴入裝有吸附劑的色譜柱中。高效液相色譜是一種改進的柱色譜。在高達400個大氣壓的高壓下，泵輸送溶劑通過色譜柱。柱吸附劑或固定相通常是由固體顆粒（如二氧化硅或聚合物）製成的顆粒材料。

與柱色譜相比，利用泵輸送，不僅可以快速分析，而且可以使用更小的顆粒作為柱填料。粒子越小，其表面積更大，通過固定相與流動相及樣品組分之間的相互作用，可以更好地實現混合物中各組分分離。流動相通常是溶劑（如水、乙腈、甲醇）的混合物。

混合物的組分由於與吸收劑顆粒的相互作用的程度不同而彼此分離，在此過程中不同組分的洗脫速率不同，從而導致組分流出色譜柱時分離。與柱色譜相比，高效液相色譜自動化程度高，靈敏度高。

(6)液相色譜提高分析速度的方法擴展閱讀：

液相色譜系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數；

在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式列印出來效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。

⑦ 在液相色譜中，提高柱效的途徑有哪些其中最有效的途徑是什麼

(1)降低移動相的流速，但會使分析時間延長。

(2)減少固定相的量，但色譜柱中樣品的負載量也隨之減小。

(3)減小固定相的顆粒度，但不能過分，過分後色譜柱的滲透率也會減小。

(4)選用低粘度的移動相，以利於快速傳質，但卻不利於多組份分析。

(5)適當提高柱溫，可降低移動相的粘度，但柱效和分離度也隨之降低。

(6)盡量減小停滯移動相的體積，但卻加快了移動相的流速。

式中tR為色譜峰的保留時間;σ2是以時間為單位測量色譜峰的偏差;a是和峰高(從測峰寬的基線量起)有關的常數,ωb是峰寬,表示由色譜峰頂點與色譜峰兩側拐點處做切線與峰底基線相交兩點間的距離。

⑧ 在液相色譜中,提高柱效能的途徑有哪些

轉載：《分析測試網路網》
提高液相色譜中柱效的有效途徑有哪些?
問題
1.能否根據理論塔板數來判斷分離的可能性?為什麼?
2.色譜定量分析中為什麼要用校正因子?在什麼情況下可以不用?
3.什麼叫梯度洗脫?它與氣相色譜中程序升溫有何異同?
4.提高液相色譜中柱效的有效途徑有哪些?
5.應用原子吸收光譜法進行定量分析的依據是什麼?進行定量分析有哪些方法?
答：
相同點：都是通過逐漸改變分析條件,在保證物質分離度的前提下,讓難流出的物質加速流出,以提高分析效率的方法；不同點,程序升溫只能從低柱溫逐步升高,只能改變升溫的速率,而梯度洗脫可以使用多種溶劑,採用復雜的比例變化來達到滿意的分離效果,更靈活 4,應該是：減小填料粒徑,增加色譜柱長,使用盡量大小均一、外型規則的填料,使用合適的流速,使用合適的流動相組成,使用合適的固定相.1,不能依靠理論塔板數來判斷分離的可能,理論塔板數描述的是液相色譜柱柱效,塔板數越高,說明色譜柱的分離性能越好（一個寬泛的概念）,但具體到某些物質能否互相分離,應該用分離度來描述,兩個物質的分離度大於1.5,說明能互相分離,否則就不能,這個跟理論塔板數毫無關系
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⑨ 高效液相色譜中怎樣改善條件達到分離度要求

（1）選擇合適的流動相，使其流經色譜柱時，受到的阻力減小，從而能迅速通過色譜柱，且必須對載液加高壓。

（2）可選擇合適的固定相和流動相以達到最佳分離效果。高效液相色的分離效果比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

（3）定時清洗柱子。高效液相色譜的柱子可反復使用：用一根柱子可分離不同化合物。但是要定時清洗柱子從而分離度。

(9)液相色譜提高分析速度的方法擴展閱讀

高效液相色譜法的特點：

高效液相色譜法有「四高一廣」的特點：

（1）高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

（2）高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鍾，有些樣品甚至在5分鍾內即可完成，一般小於1小時。

（3）高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

（4）高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

（5）應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

（6）柱子可反復使用：用一根柱子可分離不同化合物

（7）樣品量少、容易回收：樣品經過色譜柱後不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

參考資料來源

網路-高效液相色譜

網路-分離度

⑩ 在液相色譜分析中，優化分離度最方便有效的手段是什麼

要改善的條件很多，介紹幾種供參考 1、色譜柱，色譜柱使用時間長了，柱效會降低，會影響到分離度的，改善方法是更換新的色譜柱。如果已經是新的色譜柱了，分離度還不好，那可以採用更長一些的色譜柱，也會增加分離度。