測膽固醇一般用什麼方法

1. 血清膽固醇試驗(mmol/l)採取什麼醫學檢驗方法

用無水乙醇提取血清中的膽固醇，同時沉澱蛋白質，向提取液中加入硫磷鐵顯色劑，膽固醇與濃硫酸及三價鐵作用，生成穩定的紫紅色化合物。與同樣處理的標准樣進行比色，求得其含量。

2. 血清總膽固醇測定用什麼實驗方法

總膽固醇的測定方法目前已超過200種，可分為化學試劑比色法、酶分析法、熒光法、氣相和高效液相色譜法等五大類。由於氣相和高效液相色譜法條件高，臨床實驗室最常用的是化學試劑法和酶法。 化學試劑法一般包括抽提、皂化、純化、顯色比色四個階段。化學法測定總膽固醇的比色原理主要分三類：①與醋酐-硫酸試劑產生藍綠色。膽固醇酯和膽固醇在與醋酐-硫酸反應時呈色深淺不同，因此用這種方法測定結果偏高。②與高鐵-硫酸試劑產生紫紅色。高鐵-硫酸比色法靈敏度高，顯色穩定，測定精密度好，是臨床檢驗膽固醇推薦方法。但干擾因素多。③膽固醇與鄰苯二甲醛-硫酸試劑產生穩定的紫紅色。鄰苯二甲醛-硫酸比色法不需要對膽固醇進行抽提而直接進行測定。 生物幫上面有這方面的詳細介紹， http://www.bio.com/ 生物問答

3. 雞蛋蛋黃中膽固醇怎麼測定 需要具體步驟 。

我在網上只是看到這么多。不知對你有沒有幫助了。 近年來，隨著人們生活水平的不斷提高，人們對膳食組成中膽固醇的含量越來越引起重視。膽固醇可在膽道中沉積形成膽石，在血管中的沉積是動脈粥樣硬化的重要原因之一。鑒於膽固醇對人體的影響，人們不斷地採取各種各樣的措施來減少食物中的膽固醇含量，這就要求分析工作者建立一種快速、簡便而又重現性好的測定膽固醇的方法。雞蛋是自然界中營養最為豐富的食品之一，但是蛋黃中的高膽固醇也引起人們的高度關注。目前膽固醇的測定一般都要求萃取總脂質、移去溶劑、在鹼性介質中熱皂化、萃取出非皂化物質、洗滌及濃縮等 ［1，2］ ，這些步驟費時、費力又費材料，並因其繁瑣的操作預處理，大大增加了實驗結果的可變性，本文採用2.0mol/L的KOH-乙醇溶液直接皂化，石油醚萃取，以乙腈-甲醇-異丙醇（10∶80∶10）作流動相、C 18 反相色譜柱分離，UV208nm檢測，高效液相色譜法測定，簡化了操作步驟，降低了操作強度，減少了試劑使用，並且大大節約了分析時間，整個分析過程僅需1.5h。本方法用於實際樣品的測定，結果滿意。 1 材料與方法 1.1 儀器與試劑 Agilent1100高效液相色譜儀，紫外檢測器G1314A，Agilent1100化學工作站，甲醇、乙腈、異丙醇（均為HPLC級），膽固醇（進口分裝），石油醚（重蒸餾，30℃～60℃），無水乙醇、氫氧化鉀、氯化鈉（均為AR）。膽固醇標准溶液（1.0mg/ml）:准確稱取膽固醇100mg於100ml容量瓶中，用少量甲醇溶解後，用甲醇稀至刻度。 1.2 色譜條件 分析柱為μBondapak C 18TM （30cm×3.9mm），流動相為乙腈-甲醇-異丙醇（10∶80∶10），流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，紫外檢測波長208nm。 1.3 樣品處理及測定 准確稱取充分混勻的雞蛋約0.20g於50ml具塞比色管中，加入2.0mol/L的KOH-乙醇液5.0ml，振盪混勻，置65℃水浴中皂化30min（每隔5min振搖1次）後取出，經流水冷卻，加入飽和氯化鈉溶液2.0ml後再加入石油醚20.0ml，旋渦混勻後離心分離，吸取上清液10.0ml於10ml刻度比色管中，通氮氣吹乾，再用1.0ml甲醇溶解殘渣，過0.45μm濾膜後，吸取10.0μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，外標法定量。 1.4 標准曲線繪制 用膽固醇標准貯備液配成0.050、0.010、0.200、0.400、0.600mg/ml的膽固醇標准使用液，分別取10.0μl進行色譜測定，以峰面積（A）為縱坐標，膽固醇濃度為橫坐標（C，mg/ml）繪制標准曲線，得線性方程為A=556.13C+8.003，r=0.9993。 2 結果與討論 2.1 皂化條件試驗與萃取條件的選擇 見馬建明等報道 ［3］。 2.2 分析波長的選擇 選擇較高靈敏度的檢測波長可以提高分析數據的精密度，同時也可以降低檢出限。筆者對以流動相為溶劑的膽固醇標准液進行了掃描，結果發現膽固醇在205nm處具有最大吸收峰，考慮到紫外區的影響，本方法選用208nm為檢測波長。 2.3 流動相的選擇 本文試驗了甲醇-水（95∶5） ［4］ 、乙腈-異丙醇（4∶1） ［5］ 及乙腈-甲醇-異丙醇（10∶80∶10，V/V） ［6］ 進行分離，結果發現使用甲醇-水（95∶5，V/V）進行分離，雞蛋中有些雜質依然干擾測定，如果使用乙腈-異丙醇（4∶1）進行分離，膽固醇的保留時間過長，採用乙腈-甲醇-異丙醇（10∶80∶10，V/V）進行分離，干擾少，分離速度快，重復性、精密度好，色譜圖見圖1。本文選用乙腈-甲醇-異丙醇（10∶8.0∶10，V/V）為流動相。時間為7.806min 圖1 樣品色譜圖 2.4 線性范圍及方法的最低檢出限 按分析步驟配製一系列膽固醇的標准溶液，在本實驗條件下，膽固醇濃度從0～1.0mg/ml范圍，標准曲線呈良好的線性關系。最低檢出限為0.005mg/ml，若取樣1.0g，雞蛋中膽固醇的最低檢出濃度為0.5mg/100g。 2.5 准確度與精密度試驗 在0.20g雞蛋樣品中分別加入0.15、0.30、0.45mg的膽固醇標准，與樣品處理方法相同操作，測得的回收率見表1。由表1可知，本方法的測定結果是可靠的，其平均回收率為92.1%，不同濃度的測定結果的相對標准偏差均小於5%。 表1 准確度試驗 （略） 2.6 雞蛋測定 對從市場上采購的10份不同產地的雞蛋樣品用本法進行了測定，結果膽固醇含量分別在（180～545）mg/100g之間。 參考文獻
希望採納

4. 食品中膽固醇如何測定

食物中膽固醇的測定方法主要有氣相色譜法和比色法。色譜法必須具備氣相色譜儀，此儀器價格昂貴，故在國內不易普及，因此選用經濟、簡便、實用的比色法進行食物中膽固醇的測定。

比色法

1.原理
固醇類化合物與酸試劑作用，可脫水，發生聚合反應並產生強的顏色反應。

2.適用范圍
此方法適用於動物性食物中膽固醇的測定。

3.儀器
（1）實驗室常用設備
（2）分光光度計
（3）電熱恆溫水浴

4.試劑
所有試劑，如未註明規格，均指分析純，所有實驗用水，均為蒸餾水。
（1）石油醚
（2）無水乙醇
（3）濃硫酸
（4）冰乙酸(優級純）
（5）磷酸
（6）膽固醇標准（美國Sigma公司）
標准儲備液：准確稱取膽固醇100mg，（膽固醇標准開啟後放在乾燥器內）溶於冰乙酸中，並定溶至100ml。其濃度為1g/L。可保存2個月。
標准工作液：取標准儲備液10ml，用冰乙酸定溶至100ml。其濃度為0.1g/L。此液用時臨時配製。
（7）鐵礬顯色液：
儲備液：溶解4.463克硫酸鐵銨〔FeNH4（SO4）2·12H2O〕於100ml 85%磷酸中貯於乾燥器內，此溶液在室溫中穩定。
* 鐵礬儲備液須在實驗前兩周配製，因硫酸鐵銨不易溶解，每天要進行短時間的振搖待溶質完全溶於磷酸後再定溶到體積。
工作液：吸取儲備液10ml用濃硫酸稀釋到100ml。貯於乾燥器內。
（8）氫氧化鉀50%溶液：溶解50g氫氧化鉀於水中，定溶至100ml。
（9）氯化鈉5%溶液：溶解5克氯化鈉於水中，定溶至100ml。
（10）純氮（99.99%）

5.操作步驟

5.1樣品脂肪的提取與測定：根據食物種類分別用索氏提取法、研磨法和羅高氏法提取脂肪，並計算出每100克食物中脂肪含量。

5.2樣品膽固醇的測定：准確稱取提取的油脂3-4滴（約含膽固醇300-500μg） 取樣量可按樣品中膽固醇的濃度增減。置於25ml試管內，加入4ml無水乙醇，0.5ml50%氫氧化鉀，在65℃恆溫水浴中皂化1小時。皂化時每隔20-30分鍾振搖一次使皂化完全。皂化完畢，取出試管，冷卻。加入3ml 5%氯化鈉、10ml石油醚，蓋緊玻璃塞，振搖2分鍾，靜置分層（一般需1小時以上）。

取上層石油醚2ml，置於10ml具玻璃塞的試管內，在65℃恆溫水浴中用氮氣吹乾，加入4ml冰乙酸，2ml鐵礬顯色液，混勻，放置15分鍾後560-575nm下比色。
5.3標准曲線：准確吸取膽固醇工作液0；0.5；1.0；1.5；2.0ml分別置於10ml試管內，在各管內加入冰乙酸，使總體積達4ml。沿管壁加2ml鐵礬顯色液，混勻，在15-90分鍾內，560-575nm下比色。

6.分析結果
樣品中膽固醇含量（mg/100g）=C×V/V'×1/W×F/1000
式中
C=測得的光密度值在膽固醇標准曲線上顯示的膽固醇量（μg）
V=石油醚總體積（ml）
V'=取出的石油醚體積（ml）
W=稱取油脂重量（g）
F=樣品的脂肪含量（g/100g）
1/1000=折算成每100克食物中膽固醇的毫克數。

7.注意事項
同一實驗室同時或連續兩次測定結果之差不得超過平均值的10%。

5. 測定血清膽固醇的決定性方法是

正確答案:A
解析：考查膽固醇的測定方法，測定血清膽固醇的決定性方法是ID-MS法
。

6. 總膽固醇的計算方法

公式的具體內容為：低密度脂蛋白膽固醇（mg/dl）=總膽固醇-高密度脂蛋白膽固醇-甘油三酯/5，其中「甘油三酯/5」指的是極低密度脂蛋白膽固醇的含量。

由於直接測量低密度脂蛋白膽固醇的含量的成本過高，而總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和甘油三酯這三者的檢測更為經濟實惠、簡便可行，所以該公式是根據總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和甘油三酯的水平推算低密度脂蛋白膽固醇的水平，其中默認甘油三酯和極低密度脂蛋白膽固醇的比例固定為5:1。

但臨床實踐證實，該方法在低密度脂蛋白膽固醇水平較低或是甘油三酯水平較高時容易產生較大誤差，檢測結果不夠准確，常常低於真實水平。並且由於進食會影響極低密度脂蛋白膽固醇的代謝過程，代謝相關的酶的活性會發生變化，因此為了提高結果的准確性，要根據Friedewald公式法估算低密度脂蛋白膽固醇水平應要求在患者在空腹的情況下抽血。

(6)測膽固醇一般用什麼方法擴展閱讀：

總膽固醇的測定在常規的檢查中主要是以生化檢查為主，生化檢查內部包括血脂的測定，也包括總膽固醇的測定，建議患者可以在清晨空腹的狀態下體檢，一般是抽靜脈血來檢查就可以了。

膽固醇的正常指數是在3.5至6.1mmol/l之間，最為完美的指數是5.2mmol/l左右，甘油三酯則是最好在1.7mmol/l左右。如果是檢查發現體內總膽固醇水平升高了，要建議在生活中盡可能地減少膽固醇含量高的食物的攝入，比如說雞蛋黃，動物內臟等等。

7. 測膽固醇的實驗題1.舉例說明膽固醇測定的其它方法。 2.實驗中樣品皂化的作用是什麼

一、膽固醇測定的方法包括：直接皂化比色法、氧化酶法、氣相色譜法、高效液相色譜法。本實驗使用的是直接皂化比色法。
1.直接皂化比色法：當固醇類化合物與酸作用時，可脫水並發生聚合反應，產生顏色物質。因此可先對食品樣品進行皂化和提取，用硫磷鐵試劑作為顯色劑，測定食品中膽固醇的含量。步驟：①抽提；②皂化；③毛地黃皂苷沉澱純化；④顯色比色四個階段。
2.氧化酶法：血清中的膽固醇酯(CE)被膽固醇酯水解酶(CEH)水解成游離膽固醇(Chol)，後者被膽固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—膽甾烯酮，並產生過氧化氫，再經過氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林與酚(三者合稱PAP)，生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應)。醌亞胺的最大吸收在500nm左右，吸光度與標本中總膽固醇呈正比。步驟：在樣品的冰乙酸提取液中加磷硫鐵試劑，膽固醇與試劑反應產生紫紅色化合物，顏色的深淺與膽固醇的量成正比，可用分光光度計在波長560nm•處測定。
 3.氣相色譜法：取樣時，由於氣相色譜儀進樣少，應嚴格控制樣品質量。由於內標物5-α-膽甾烷不被皂化，可先加入與樣品混勻。利用皂化反應RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使樣品中的主要成分油脂通過遇苛性鹼水解成用來製造肥皂脂肪酸鈉或鉀和甘油，而非皂化物膽固醇和內標物仍穩定存在。利用皂化的水解產物（脂肪酸鈉或鉀和甘油）易溶於水而膽固醇和內標物不溶於水的特點進行萃取，得到溶有膽固醇和內標物的石油醚溶液。棄去的的水相經兩次石油醚提取後基本回收殘留在水相中的膽固醇和內標物。得到的石油醚溶液進行吹乾後可取1μL進行氣相色譜法檢測。
4.高效液相色譜法：提要樣品中膽甾醇用適當有機溶劑提取，得到膽甾醇和脂類物質的混合物，經皂化後除去脂類干擾物，再用適當的有機溶劑提取膽甾醇，以高效液相色譜儀測定 。
二、實驗中樣品皂化的作用是：
利用皂化反應RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使樣品中的主要成分油脂通過遇苛性鹼水解成用來製造肥皂脂肪酸鈉或鉀和甘油，而非皂化物膽固醇和內標物仍穩定存在。利用皂化的水解產物（脂肪酸鈉或鉀和甘油）易溶於水而膽固醇和內標物不溶於水的特點進行萃取，從而去除其他脂類干擾物，減少干擾，提高測試精度。

8. 膽固醇測定及游離膽固醇測定方法

（一）膽固醇概況

1.存在形式：血漿膽固醇包括膽固醇酯和游離膽固醇兩種，前者約佔70%，後者佔30%。

2.來源：食物、體內合成。（提供內源性膽固醇的90%）

肝臟是合成膽固醇的主要器官，合成的原料是乙醯CoA,合成的關鍵酶是HMGCoA還原酶，臨床治療所用的他汀類葯物主要是抑制該關鍵酶。

血漿和組織中所含膽固醇經常處於交換狀態，其交換率因不同組織而異，由於醫學.育網收集整理膽固醇不斷進、出血液，所以血漿膽固醇不僅反映膽固醇攝取與合成的情況，還反映攜帶膽固醇的各種脂蛋白的合成速度，以及影響脂蛋白代謝的受體的情況。

血漿膽固醇主要存在LDL中，其次為HDL和VLDL，CM中含量最少。

3.主要功能：

①是所有細胞膜和亞細胞器膜上的重要組成成分；

②是膽汁酸的唯一前體；

③是所有類固醇激素（性激素、腎上腺皮質激素）的前體等。

④是維生素D合成的前體。

（二）檢測

1.方法：

化學法曾於很長一段時間用於常規檢查，醫學.育網收集整理一般包括：①抽提；②皂化；②毛地黃皂苷沉澱純化；④顯色比色四個階段。其操作復雜，干擾因素多，現多已不用，代表性的方法是省去③步驟的Abell-Kendall法，現作為標准參考方法予以利用。現臨床應用膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶及過氧化物酶的方法，快速准確，標本用量小，可完全在自動生化分析儀上操做，適於大批量標本的檢查。

膽固醇酯首先在膽固醇酯酶的催化下水解成游離膽固醇，膽固醇在膽固醇氧化酶的催化下生成過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的催化下以Trinder反應顯色測定。

2.參考值：

TC水平因生活條件（飲食、運動等）而異，隨年齡上升。

中青年男性略高於女性，老年女性高於男性。

我國血脂異常防治建議：

以≤5.17mmol／L（200mg／dl）為合適水平；

5.20～5.66mmol／L（201mg／dl～219mg／dl）為臨界范圍（或邊緣升高）；

≥5.69mmol／L（220mg／dl）為升高。

（三）臨床意義：

1.膽固醇升高：

膽固醇是動脈粥樣硬化的重要危險因素之一。

膽固醇升高容易引起動脈粥樣硬化性心、腦血管疾病如冠心病、心肌梗死，腦卒中等。

膽固醇為一個診斷指標來說，它既不夠特異，也不夠敏感，所以不能作為診斷指標，只能作為評價動脈粥樣硬化的危險因素，而最常用做動脈粥樣硬化的預防、發病估計、治療觀察等的參考指標。

膽固醇升高可見於各種高脂蛋白血症、梗阻性黃疸、腎病綜合征、甲狀腺功能低下、慢性腎功能衰竭、糖尿病等時。

此外，吸煙、飲酒、緊張、血液濃縮等也都可使血液膽固醇升高。

妊娠末三個月時，可能明顯升高，產後恢復原有水平。

2.膽固醇降低：

可見於各種脂蛋白缺陷狀態、肝硬化、惡性腫瘤、營養吸收不良、巨細胞性貧血等。

女性月經期也可降低。

9. 從蛋黃中提取膽固醇有哪幾種方法

膽固醇的
1 主題內容與適用范圍
本標准規定了用分光光度計測定各類動物性食品中膽固醇的方法。
本標准適用於各類動物性食品中膽固醇的測定。
2 原理
當固醇類化合物與酸作用時，可脫水並發生聚合反應，產生顏色物質。 因此可先
對食品樣品進行提取和皂化，用硫酸鐵銨試劑作為顯色劑，測定食品膽固醇的含量。
3 試劑
全部試劑除註明外均為分析純，試驗用水為蒸餾水。
3.1 石油醚。
3.2 無水乙醇。

10. chodpap法是什麼方法

chodpap法是血清總膽固醇測定方法。

膽固醇氧化酶法chodpap法已由中華醫學會檢驗分會推薦為常規測定方法。chodpap法的測量原理是血清中的膽固醇約1/3為游離膽固醇，2/3為與脂肪酸結合的膽固醇酯。膽固醇酯被膽固醇酯水解酶水解成游離膽固醇，後者被膽固醇氧化酶氧化成膽甾烯酮並產生過氧化氫，再經過氧化物酶催化，使4-氨基安替比林與酚反應，生成紅色醌亞胺色素。

chodpap法的注意事項：

用血量：指測量血脂所用的血量，一般在15微升左右，用血多少會影響病人的痛感，另外血也是很珍貴的。但是血量是保證檢測准確的重要因素。

測量時間：從發生反應到得出結果所用的時間，一般在1min之間，測量快慢會影響檢測的效率。

測量范圍：膽固醇2.59-10.3mmol/L，甘油三酯：0.57-5.65 mmol/L。

血高密度膽固醇：0.65-2.20 mmol/L。

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