多糖提取方法研究進展

㈠ 植物多糖的最佳提取方法是什麼

植物活性多糖的提取方法有多種,在水提醇沉的基礎上,常採用酶解、微波、超聲波,膜處理和CO<2>超臨界萃取等方法進行輔助提取或精製.最常用的還是水提醇沉法.
舉例: 蒽酮比色法，具體步驟
一、儀器、試劑和材料

1.儀器：電子天平，超聲波清洗器，電熱恆溫水浴鍋，抽濾設備，分光光度計，容量瓶，刻度吸管等

2.試劑：

(1)葡萄糖標准液：l00 µg/mL

(2)濃硫酸

(3)蒽酮試劑：0.2 g蒽酮溶於100 mL濃 H2SO4中。當日配製使用。

3.材料：甜高粱，甘草

二.操作步驟

1.葡萄糖標准曲線的製作

取7支大試管，按下表數據配製一系列不同濃度的葡萄糖溶液：

管號
1
2
3
4
5
6
7

葡萄糖標准液（mL）
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8

蒸餾水（mL）
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2

葡萄糖含量（µg）
0
10
20
30
40
60
80

在每支試管中立即加入蒽酮試劑4.0mL，迅速浸於冰水浴中冷卻，各管加完後一起浸於沸水浴中，管口加蓋，以防蒸發。自水浴沸騰起計時，准確煮沸l0 min，取出，用冰浴冷卻至室溫，在620 nm波長下以第一管為空白，迅速測其餘各管吸光值。以標准葡萄糖含量（µg）為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪出標准曲線。

2.植物樣品中可溶性糖的提取：將樣品粉碎，105 ºC烘乾至恆重，精確稱取1~5 g，置於50mL三角瓶中，加沸水25mL，加蓋，超聲提取10 min，冷卻後過濾（抽濾），殘渣用沸蒸餾水反復洗滌並過濾（抽濾），濾液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。

3.稀釋：吸取提取液2mL，置於另一50mL容量瓶中，以蒸餾水定容，搖勻。

4.測定：吸取1 mL已稀釋的提取液於試管中，加入4.0 mL蒽酮試劑，平行三份；空白管以等量蒸餾水替代提取液。以下操作同標准曲線製作。根據A620平均值在標准曲線上查出葡萄糖的含量（µg）。

三、結果處理：

C × V總 × D

樣品含糖量（%）= ————————————— × 100%

W × V測 × 106

其中：C——在標准曲線上查出的糖含量（µg），

V總——提取液總體積（mL），

V測——測定時取用體積（mL），

D——稀釋倍數，

W——樣品重量（g），

106——樣品重量單位由g換算成µg的倍數

㈡ 玉米須多糖提取理論與應用價+值、經濟與社+會效益

摘要 過GC和GC-MS鑒定出玉米須易揮發物質中含有36種化

㈢ 多糖類的提取方法

一、提取與純化動植物中存在的多糖或微生物胞內多糖，因其細胞或組織外大多有脂質包圍，要使多糖釋放出來，第一步就是去除表面脂質，常用醇或醚迴流脫脂。第二步將脫脂後的殘渣以水為主體的溶液提取取多糖 （即冷水，熱水，熱或冷的0.1-1.0mol/L NaOH，熱或冷的1%醋酸或1%苯酚等），這樣提取得到的多糖提取液含有許多雜質，主要是無機鹽，低分子量的有機物質及高分子量的蛋白質、木質素等。第三步則要除去這些雜質，對於無機鹽及低分子量的有機物質可用透析法、離子交換樹脂或凝膠過濾法除去；對於大分子雜質可用酶消化 （如蛋白酶．木質素酶） ，乙醇或丙酮等溶劑沉澱法或金屬絡合物法。多糖提取液中除去蛋白質是一個很重要的步驟，常用的方法有Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法，後者較為劇烈，對於含呋喃糖殘基的多糖由於連接鍵不穩定，所以不宜使用。但該法效率較高，操作簡便，植物來源的多糖常採用該法。上述三種方法均不適合於糖肽，因為糖肽也會像蛋白質那樣沉澱出來。除去蛋白質後，應再透析一次，選用不同規格的超濾膜和透析袋進行超濾和透析，可以將不同分子大小的多糖進行分離和純化，該法在除去小分子物質十分實用，同時能滿足大生產的需要。具有廣闊的應用前景。至此，得到的提取液基本上是沒有蛋白質與小分子雜質的多糖混合物。一般來講，通過上述方法所得到的是多糖的混合物，如果要得到單一的多糖，還必須對該混合物進行純化。柱層析在多糖的純化較為常用，常分為兩類：一是只有分子篩作用的凝膠柱層析， 它根據多糖分子的大小和形狀不同而達到分離目的，常用的凝膠有葡聚糖凝膠及瓊脂糖凝膠，以及性能更佳的Sephacryl等。洗脫劑為各種濃度的鹽溶液及緩沖液，其離子強度不應低於0.02mol/L。二是離子交換層析，它不僅根據分子量的不同，同時也具有分子篩的作用，常用的交換劑有DEAE-纖維素、DEAE-葡聚糖和 DEAE-瓊脂糖等，此法適合於分離各種酸性，中性多糖和粘多糖。多糖的純化還可用其他方法，如制備性高效液相層析、制備性區帶電泳，親和層析等，這些方法有時對制備一些小量純品供分析用是很有用處的。

㈣ 金針菇多糖的提取方法

金針菇[Flammulina velutip (Fr)Sing-],
擔子菌目金錢菌屬,又名冬菇,朴菰,金菇等,其子
實體含蛋白31.2 ,脂肪5.8 及維生素B ,B.,
C,PP(生物素),含1O余種氨基酸,已廣泛的應用
到食品,調味品行業中,其提取物(主要成分為多
糖,糖蛋白,蛋白聚糖,朴菰素等)對小白鼠肉瘤
180的抑制率達81.1 "-100 ,對艾氏腹水癌的
抑制率達80 [1],具有很好的葯用價值L2 ].多糖
的提取,目前主要有水提醇析法,膜分離法,微波
法等" ],而超聲法提取報道甚少.筆者對金針菇
多糖的提取工藝及條件進行了研究,並利用超聲
波對金針菇多糖的提取進行了探討.
1材料與方法
1.1實驗材料
市售質優金針菇鮮品.
1.2試劑和儀器
試劑:CHCl3, 一C'H90H,C2H50H,HC1,
H2SO.,NaOH,C H50H等純度均為A.R.
儀器:722一光柵分光光度計,上海第三分析儀
器廠生產;TDL一40B離心機,上海安亭科學儀器
廠生產;PHS一2c型精密酸度計,上海精科雷磁生
產;HS一250D超聲波儀(27 kHz,250 w),寧波儀
器三廠生產;,DT一100單盤分析天平,北京光學
儀器廠生產.
1.3 多糖總量測定
採用苯酚一硫酸法 ,以葡萄糖為標准品.
製作標准曲線:准確稱取25 mg葡萄糖於
250 mL容量瓶中加水至刻度線,搖勻,然後分別
吸取0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL於6支乾燥
試管中,各以水補至2.0 mL然後緩慢地加入6
的苯酚液1.0 mL及5.0 mL濃H2SO.,靜置1O
min,搖勻,室溫放置20 rain,於490 nm測其吸收
值,以2.0 mL蒸餾水為空白液,實驗測定結果列
入表1.
表1葡萄糖標准曲線的測定
以濃度對吸收度回歸得方程:
A=0.008 395+7.144 7C;
此式r=0.999 2.其中A為吸光度,C為濃度.
1.4流程工藝
原料一烘乾一稱重一勻漿一調配一熱水抽提
一離心分離一濾液醇析一復溶一去除雜蛋白一真
空濃縮一乾燥一產品.
2結果與討論
2.1金針菇多糖提取條件的確定
影響金針菇多糖提取得率的因素很多,如料
液比,時間,次數,酸度,溫度等,針對這些因素,確
定浸提時間,採用四因子三水平正交法確立多糖
提取最佳條件,因素位級見表2. '
表2因素位級表
根據因素位級表分9組實驗,每組取30 g金
針菇子實體干品進行正交實驗,浸提時間為每次
90 rain,結果見表3.
從極差結果來看,初步得出影響多糖提取得
率因素大小分別是A>B>C>D.5號樣提取條
件最好,即A:B.C:D.多糖得率為0.833%,且提
取次數對多糖得率影響不大,故在工業化實際生
產中,擬推薦方案為A:B.C:D.,這樣既縮短生產
周期,又減少能耗,降低生產成本.
2.2多糖粗品的製取及純化
取一定量的浸提液加無水乙醇至乙醇濃度分
別為55 ,65 ,75 ,85 ,放置一段時間後,離
心分離,收集沉澱,並烘乾,即得多糖粗品.結果表
明,乙醇濃度為75 時,醇析效果最好.將多糖粗
品按樣品與氯仿一正丁醇之比為1:0.25,氯仿與
正丁醇之比為1;0.2復溶,用Sevage法 ]反復
除去其中的蛋白質,然後真空乾燥,即可製得純的
多糖產品. 表3金針菇多糖提取正交結果
實驗號 A B C D 多糖得率/
2.3超聲波法提取金針菇多糖的研究
由2.1得知的A:B.C:D.方案為最佳方案,
因此採用在A:B.C:條件下將調配好的樣品放在
超聲儀中浸提,在不同時間確立超聲波法提取多
糖的最佳條件,結果見表4.
表4金針菇多糖提取結果
由實驗結果及分析可以看出,加水量為2O
倍,溫度為9O℃,pH值為8的調配液放在超聲儀
中提取20 rain時,多糖提取率可達1.250 .

㈤ 求實驗室胡蘿卜多糖提取方案，要具體的條件步驟

植物多糖的分離純化
一、植物多糖的提取
1 溶劑提取法
1．1 水提法
水對植物組織的穿透力強，提取效率高，在生產上使用安全、經濟。用水作溶劑來提取多糖時，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取採用熱水浸提法，該法所得多糖提取液可直接或離心除去小溶物；或者利用多糖不溶於高濃度乙醇的性質，沉澱提純多糖；但

由於不同性質或不同相對分子質量的多糖沉澱所需乙醇濃度不同，它也可以用於樣品中不同多糖組分的分級分離；還可按多糖不同性質在粗分階段利用混合溶劑提取法對植物中不同的多糖進行分離；其中，以乙醇沉澱最為普遍。但以根莖為主的植物體,細胞壁多糖含量高,熱水直接提取率不高。此時為破壞細胞壁,增加多糖的溶出，有兩種處理方法:一為酶解,二為弱鹼溶解。
1．2酸鹼提法
有些多糖適合用稀酸提取，並且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中佔有優勢，目前報道的並不多。而且即使有優勢，在操作上還應嚴格控制酸度，因為酸性條件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂。有些多糖在鹼液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。採用的稀鹼多位為0．1mol／L氫氧化鈉、氫氧化鉀，為防止多糖降解，常通以氮氣或加入硼氫化鈉或硼氫化鉀。同樣，鹼提優勢也是因多糖類的不同而異。與酸提類似，鹼提中鹼的濃度也應得到有效控制，因為有些多糖在鹼性較強時會水解。另外，稀酸、稀鹼提取液應迅速中和或迅速透析，濃縮與醇析而獲得多糖沉澱。
1．4 生物酶提取法
酶技術是近年來廣泛應用到有效成份提取中的一項生物技術，在多糖的提取過程中，使用酶可降低提取條件，在比較溫和的條件中分解植物組織，加速多糖的釋放或提取。此外，使用酶還可分解提取液中澱粉、果膠、蛋白質等的產物，常用的酶有蛋白酶，纖維素酶，果膠酶等。
1．5 超聲提取法
超聲波是一種高頻率的機械波，其主要原理是利用超聲波產生的「空化作用」對細胞膜的破壞，有利用植物有效成分的釋放，而且超聲波能形成強大的沖擊波或高速射流，有效地減小、消除與水相之間的阻滯層，加大了傳質效率，有助於溶質的擴散。另外，超聲波的熱效應使水溫基

本在57℃，對原料有水浴作用。超聲波提取與傳統的提取方法相比，有提取效率高、時間短、耗能低等優點。超聲提取的影響因素有：超聲時間、超聲頻率（一般低頻中提取效率高，但也有例外）、料液比和溫度等。
1．6 微波提取
微波是頻率介於300MHz和300GHz之間的非電離電磁波，微波提取的原理是微射線輻射於溶劑並透過細胞壁到達細胞內部，由於溶劑及細胞液吸收微波能 細胞內部溫度升高，壓力增大，當壓力超過細胞壁的承受能力時，細胞壁破裂，位於細胞內部的有效成份從細胞中釋放出來，傳遞轉移到溶劑周圍被溶劑溶解。微波技術應用於植物細胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力強、選擇性高、加熱效率高等特點。影響微波浸提的主要因素為浸提時間、樣品和提取溶劑的含水量，溶劑的介電常數和電導率（介電常數和電導率的溶劑對微波的吸收較好）、微波功率等。

但是由於微波泄漏對操作者影響很大，因而對設備的要求較高，這對微波的研究及應用帶來了一定的困難。
二、植物多糖的分離純化
在多糖提取物中，常會有無機鹽、蛋白質、色素及小分子物質等雜質，必須分別除去．一般是先脫除非多糖組分，再對多糖組分進行分級．

2．1 除蛋白
除蛋白質時一般選擇能使蛋白質沉澱而不使多糖沉澱的試劑來處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時間短，溫度低，避免多糖降解。Sevage法（氯仿：戊醇/丁醇=4：1）和三氟三氯乙烷法在避免降解上有較好效果但要達到除盡游離蛋白質的目的仍需反復處理。

如能加入蛋白質水解酶，使蛋白質大分子進行一定程度的降解，再用Sevage法處理，一般效果更好。為了避免使用有機溶劑也可採用反復凍融的方法除蛋白，將多糖液濃縮後，一20℃室溫反復凍融7～8次，離心除去蛋白質。另外，蛋白質在等電點時溶解度最小，用氫氧化鈣飽和液調pH10～pH11可除去偏鹼性的蛋白質，然後再用硫酸調pH5～pH6，可除去偏酸性的蛋白質。凍融和等電點沉澱除蛋白質操作簡單，但多糖液里往往有低濃度的蛋白質殘留，應與其它方法結合使用。
2．2 脫色
植物多糖提取物中含有酚類化合物而使其顏色較深，可用吸附劑(纖維素、硅藻土、活性炭等)、離子交換柱(DEAE一纖維素)、氧化劑(H2O2)等脫除。活性炭比表面積大，吸附能力強，在進行當歸多糖的提取時只向多糖液中加入了0．1％左右的活性炭，煮沸後濾過即完成了

脫色操作。此法成本低廉，適合工業化生產。
2．3 除小分子雜質
小分子雜質如低聚寡糖的殘留往往影響多糖的生物活性，需要進一步脫除，提高純度。傳統的方法是透析法，該法操作簡單、技術成熟，但周期長，往往需要2一3天，常溫下操作有可能造成多糖的霉變，必要時需加入少量防腐劑或需在低溫條件下進行。隨著膜分離技術的發展，纖維濾器透析法已經發展起來了，它利用不同孔徑的膜使大小不同的分子分級，這種方式可縮短生產周期，而且條件溫和，無疑是多糖脫除雜質的一條新途徑。
2．4 多糖的分級純化
採用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分級的方法可達到純化的目的．可按溶解性不同進行分級、按分子大小和形狀分級(如分級沉澱、超濾、分子篩、層析等)，也可按分子所帶基團的性質分級．
2．4．1按溶解性不同分離
2.4.1.1分步沉澱法
分步沉澱法是根據不同多糖在不同濃度低級醇、酮中具有不同溶解度的性質，從小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮進行分步沉澱．
2.4.1.2 鹽析法
鹽析法是根據不同多糖在不同鹽濃度中溶解度不同而將其分離的一種方法。常用的鹽析劑有氯化鈉、氯化鉀、硫酸銨等，其中以硫酸銨最佳。
2.4.2 按電離性質不同分離
2.4.2.1季胺鹽沉澱法
季胺氫氧化物是一類乳化劑，能與酸性多糖形成不溶性化合物季銨絡合物，此絡合物在低離子強度的水溶液中不溶解而產生沉澱。若提高多糖

液pH值或加入硼砂緩沖液，也可使中性多糖沉澱分離。常用季銨鹽有十六烷基三甲基季銨鹽的溴化物及其氫氧化物和十六烷基吡啶。
2．4．3 柱層析法
2.4.3.1凝膠柱層析法
凝膠柱層析法常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose)，以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑，從而使不同大小的多糖分子得到分離純化，但不適宜粘多糖的分離。
2.4.3.2纖維素陰離子交換劑柱層析法
纖維素陰離子交換劑柱層析法常用的交換劑為DEAE一纖維素和ECTEOLA一纖維素，分類硼砂型和鹼型兩種，洗脫劑可用不同濃度鹼溶液、硼砂溶液、鹽溶液，其優點可吸附雜質、純化多糖，並適用於分離各種酸性、中性多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙參多糖、太子參多糖等。
2.4.3.3 活性炭柱層析法
活性炭吸附量大、效率高，是分離水溶性物質的常用吸附劑。柱層析時活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀釋劑，以增加溶液的流速。糖溶液上柱後先用水洗脫無機鹽、單糖等再依次增加乙醇濃度進行洗脫。
2.4.3.4 離子交換柱層析和普通凝膠柱層析聯用法
有些植物的多糖成分復雜， 除中性多糖外，還含有糖醛酸等，因此往往兩種不同性質的色譜柱聯用才能得到單一多糖組分。
2.4.3.5 三種層析柱聯用
採用離子交換葡聚糖凝膠柱、丙烯葡聚糖凝膠柱和葡聚糖凝膠柱三者聯用，即先進行DEAE—SephadexA柱層析，用蒸餾水洗脫。水洗組分進一步

用SephacrylS柱層析，得到主要組分再用SephadexG一100柱層析，有時會有較高的得率。
三、多糖的純度鑒定
經過分級純化的多糖在測定結構前須進行純度鑒定．而且多糖的純度不能用通常化合物的純度標准來衡量，因為即便是多糖純品，其微觀也並不均一，僅代表相似鏈長的多糖分子的平均分布，通常所謂的多糖純品也只是一定相對分子質量范圍的多糖的均一組分．目前常用於多糖純度

的鑒定方法有：高效液相、 凝膠層析法、電泳法、色譜法、旋光度法等．
四、常見問題
多糖制備過程中蛋白質的脫除是目前分離純化多糖的難點。Sevag法需要消耗大量的有機溶劑，且操作煩瑣；三氟三氯乙烷的沸點較低(bp56℃

，)易揮發，不宜大量應用；三氯乙酸可引起多糖的降解，從而影響其生理活性；酶價格昂貴，不適合工業化生產。可以借鑒其它蛋白質脫除的方法，例如用天然澄清劑能簡化提取工藝，提高多糖純度。 脫色也是多糖提取純化過程中面臨的一個難題。活性炭會吸附多糖而造成多糖的損失。

㈥ 實驗室多糖的提取方法請問有幾種和具體步驟

提取率要看你具體的提取條件了，即使都是用水提法，不同的條件、不同的原料，得到的提取率也不一樣，找篇文章給你參考吧。

枸杞多糖水提工藝的優選
植飛 鄭衛平 陳平 何梅仙
(1．武漢工業學院制葯教研室，武漢430023；2．中國葯科大學，南京210000)
摘要：目的：確定枸杞多糖最佳提取條件。方法：分別以多糖得率及多糖含量為考察指標，以正交實驗法確定枸杞多糖的最佳提取工藝。結果：枸杞多糖的最佳提取工藝為：取枸杞葯材，第一次加水l0倍，以後每次加水8倍量，共冷浸3次；每次冷浸1 h；每小時攪拌10 min。結論：本法為枸杞多糖水提工藝的確定提供實驗依據。

㈦ 超聲波法提取多糖的實驗步驟

摘要：對超聲波輔助熱水提取法從麥冬中提取多糖的工藝進行了研究，旨在更大層次上提取麥冬超聲波法提取多糖的實驗步驟中多糖，首先通過單因素實驗分析了幾個主要因素：液料比,提取時間,提取溫度，超聲波時間對提取率的影響。在單因素的基礎上，通過正交實驗對復合法提取麥冬多糖的工藝研究條件進行了優化，實驗表明，最佳提取工藝條件為：料液比1:20，提取時間15min，提取溫度80，超聲波時間15min，對於麥冬多糖的降血糖的研究表明，麥冬多糖對正常的小鼠有降低血糖的作用。
關鍵詞：麥冬多糖
提取率
單因素
正交實驗
蒽酮-硫酸比色法
降血糖

㈧ 粗多糖提純的方法有哪些

西安市天園生物制劑廠
大豆粗多糖：是從大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的總稱，大豆中的寡糖屬於а-半乳糖苷類，包括棉籽糖、水蘇糖和Vabascose.

（1）、促進雙歧桿菌的增殖：人體雖然不能直接利用粗多糖，但是粗多糖可被腸內細菌利用，並且能促進雙歧桿菌的增殖。雙歧桿菌是一種厭氧革蘭氏陽性細菌，是維護和保持腸道菌群平衡的一個極為重要的因素，也是判斷腸內外環境是否正常的一個可靠依據。
（2）、抑制病原菌：大豆粗多糖能促進雙歧桿菌的增殖，從而抑制有害細菌如產生梭狀芽孢桿菌的生長。雙歧桿菌能發酵粗多糖產生短鏈脂肪酸和一些抗菌素物質，從而可抑制外源致病菌和腸內固有腐敗細菌的生長繁殖。
（3）、防止便秘、腹脹，促進消化，調節胃腸功能：腸道內的雙歧桿菌發酵粗多糖產生大量的短鏈脂肪酸（主要是醋酸和乳酸），能刺激腸道蠕動，從而促進消化，防止便秘的產生。
（4）、增強免疫功能：如果人較長期的食用無細菌食物，腸道就會因為缺少刺激而使其產生抗體的能力下降，從而容易誘發疾病。食用粗多糖，促進雙歧桿菌的增殖，將對腸道免疫細胞產生刺激，提高其產生抗體的能力從而起到防治疾病的效果。

㈨ 多糖的提取有哪些方法

植物活性多糖的提取方法有多種,在水提醇沉的基礎上,常採用酶解、微波、超聲波,膜處理和CO超臨界萃取等方法進行輔助提取或精製.最常用的還是水提醇沉法.