高效液相色譜分析方法特點

⑴ 高效液相色譜儀的特點

1.進樣系統

一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恆定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。

2.輸液系統
該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X107Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高解析度、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質（即使僅有一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。

3.分離系統

該系統包括色譜柱、連接管和恆溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管），內徑為2～5mm，由"優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）．固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000?）和比表面積大的特點，加之其表面經過機械塗漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學法偶聯各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。因此，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素（PSA）後，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。

另外，固定相基質粒小，柱床極易達到均勻、緻密狀態，極易降低渦流擴散效應。基質粒度小，微孔淺，樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高解析度是有益的。根據柱效理論分析，基質粒度小，塔板理論數N就越大。這也進一步證明基質粒度小，會提高解析度的道理。
再者，高效液相色譜的恆溫器可使溫度從室溫調到60C，通過改善傳質速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。

檢測系統
高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。

紫外檢測器

該檢測器適用於對紫外光（或可見光）有吸收性能樣品的檢測。其特點：使用面廣（如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；靈敏度高（檢測下限為10-10g／ml）；線性范圍寬；對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

示差折光檢測器

凡具有與流動相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。目前，糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統。這一系統通用性強、操作簡單，但靈敏度低（檢測下限為10-7g／ml），流動相的變化會引起折光率的變化，因此，它既不適用於痕量分析，也不適用於梯度洗脫樣品的檢測。

熒光檢測器

凡具有熒光的物質，在一定條件下，其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用於具有熒光的有機化合物（如多環芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等）的測定，其靈敏度很高（檢測下限為10-12～10-14g／ml），痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可採用。

5.數據處理系統

該系統可對測試數據進行採集、貯存、顯示、列印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

⑵ 高效液相色譜法原理 高效液相色譜法有何特點

1、高效液相色譜法的原理是以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測。

2、高效液相色譜法有「四高一廣」的特點：

（1）高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

（2）高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鍾，有些樣品甚至在5分鍾內即可完成，一般小於1小時。

（3）高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

（4）高靈敏度：紫外檢測器可達0。01ng，進樣量在μL數量級。

（5）應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

⑶ 高效液相色譜法與氣相色譜法的有哪些異同點

一、流動相不同

液相是液體的，液相多了一個泵用來運轉。氣相的流動相是載氣，是氣體。一般情況下，液相色譜中固定相多為固體，流動相多為液體；而氣相色譜中載氣多為惰性氣體（N2、Ar等），從適用范圍來看：

液相色譜適用最廣，可用於化學分析、食品分析、環境分析、葯物分析、中草葯圖譜分析等等，根據目標分析物極性大小不同，出峰時間也就不同；而氣相色譜的分析物多為氣體或易揮發的物質，從分析物的角度來看，液相色譜應用更廣。

二、應用范圍不同

氣相色譜法：分離能力好、靈敏度高、分析速度快、操作方便等。受技術條件的限制，沸點太高的物質或熱穩定性差的物質都難於應用氣相色譜法進行分析，一般對500℃以下不易揮發或受熱易分解的物質部分可採用衍生化法或裂解法。

三、儀器構造不同

1、氣相色譜儀由載氣源、進樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數據處理系統組成。進樣部分、色譜柱和檢測器的溫度均在控制狀態。

2、高效液相色譜儀主要有：進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統組成。

(3)高效液相色譜分析方法特點擴展閱讀：

高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有「柱外效應」。

在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

⑷ 高效液相色譜原理

高效液相色譜（HPLC）的原理：以高壓下的液體為流動相，並採用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。高效液相色譜對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制，因而彌補了氣相色譜法的不足。

在目前已知的有機化合物中，可用氣相色譜分析的約佔20%，而80%則需用高效液相色譜來分析。高效液相色譜和氣相色譜在基本理論方面沒有顯著不同，它們之間的重大差別在於作為流動相的液體與氣體之間的性質的差別。

高效液相色譜法的構造

可分為「高壓輸液泵」、「色譜柱」、「進樣器」、「檢測器」、「餾分收集器」以及「數據獲取與處理系統」等部分。

高效液相色譜法有「四高一廣」的特點

①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鍾，有些樣品甚至在5分鍾內即可完成，一般小於1小時。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

⑸ 高效液相色譜法有哪些特點

1，為進行分離，可以根據樣品的組分將流動相和固定相的組合最佳化。如果熟悉液相色譜，這是非常有利的，但對初學者來說，這是困難的。 2，適用樣品范圍廣，80%的分析對象可藉此法分析。 3，可以使用高效的分離柱，易於分離復雜的多組分混合物。 4，把被分離的組分溶解在流動相中，可以全部回收之。 5，可以使用多種非破壞性高靈敏度和選擇性的檢測器，把幾種檢測器串聯起來，根據其對應特性，獲取與定性有關的重要信息。 6，只能檢測從色譜柱流出的組分。 7，由於沒有通用型高靈敏度檢測器，所以在分析未知混合物而沒有色譜峰的時候，無法確定其原因是分離條件不合適，還是檢測器沒有響應。 8，採用尺寸排斥色譜法時，從低分子到高分子的樣品全部流出，而且流出順序是從高分子量開始，故可根據保留容量推測分子量，最適於做未知樣品的組成分析。 9，測定精度好。因為注入精度比氣相色譜好，故可以用絕對工作曲線。 10，雖然示差折光檢測器為通用型檢測器，但和氣相色譜的熱導檢測器和氫火焰檢測器相比，由於化合物之間的響應不同，所以用峰面積百分數求由多種化合物組成的混合物時問題較多。 11，要限制色譜柱的使用條件（溫度、壓力、流動相等）。而且與氣相色譜相比，性能隨時間的變化較大。必須定期用標准品在標准條件下檢查色譜柱的性能。若按照不同的樣品對象，固定使用色譜柱，對色譜柱的壽命是有利的。 12，製作色譜柱需要特殊裝置和專門技能。 13，與氣相色譜法相比，由於共存物質對分離的影響小，易於制備分析樣品。 14，柱外死體積對色譜柱的性能有重大的綜合性影響，而且連接方法依儀器製造廠而異。

⑹ 高效液相色譜分析法的原理是什麼

它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內，在柱內各成分被分離後，依次進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。
高效液相色譜法（High
Performance
Liquid
Chromatography，簡稱HPLC）又叫做高壓或高速液相色譜、高分離度液相色譜或近代柱色譜,以液體為流動相，採用高壓輸液系統，是色譜法的一個重要分支。
【簡介】
它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內，在柱內各成分被分離後，依次進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。這種方法已成為化學、生化、醫學、工業、農業、環保、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術，是分析化學、生物化學和環境化學工作者手中必不可少的工具。
【主要類型】
1．吸附色譜(Absorption Chromatography)
2．分配色譜(Partition Chromatography)
3．離子色譜(Ion Chromatography)
4．體積排阻色譜(Size Exclusion Chromatography)
5．親和色譜(Affinity Chromatography)
【特點】
高效液相色譜法有「三高一廣一快」的特點：
〈1〉高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。
〈2〉高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
〈3〉高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在µL數量級。
〈4〉應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。
〈5〉分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30
min，有些樣品甚至在5 min內即可完成，一般小於1h。
此外HPLC還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。HPLC的缺點是有「柱外效應」。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。HPLC檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

⑺ 高效液相色譜法的原理是什麼

高效液相色譜法的原理是以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測。

高效液相色譜法有「四高一廣」的特點：

①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鍾，有些樣品甚至在5分鍾內即可完成，一般小於1小時。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

(7)高效液相色譜分析方法特點擴展閱讀

高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有「柱外效應」。

在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

空間排阻色譜法以凝膠(gel) 為固定相。它類似於分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數納米到數百納米。

溶質在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進行分離，而是按分子大小進行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質的流動力學體積或分子大小有關。試樣進入色譜柱後，隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。

在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻，因此就直接通過柱子，首先在色譜圖上出現，一些很小的分子可以進入所有膠孔並滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值最大，在色譜圖上最後出現。

⑻ 高效液相色譜法檢測特點_百泰派克平台

應用范圍廣：70%以上的有機化合物可用高效液相色譜法分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差的化合物；
分離效率高：可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍；
分離速度快：通常分析一個樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成；
靈敏度高：紫外檢測器靈敏度可達0.01ng；
能同時分離多種物質：一根柱子能同時分離的成份可達100種；
樣品量少、容易回收：進樣量在μL數量級，而且樣品經過色譜柱後不會被破壞，可以收集單一組分或做制備。

⑼ 高效液相色譜法有"四高一廣"的特點有哪些

高效液相色譜法有"四高一廣"的特點：
高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須用色譜泵對流動相加高壓。
高速：分析速度快、流動相流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鍾，有些樣品甚至在5分鍾內即可完成，一般小於1小時。
高效：分離效能高。可選擇不同的固定相和流動相搭配以達到最佳分離效果，高效液相色譜比氣相色譜的分離效能高出許多倍。
高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。
應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。

⑽ 高壓液相色譜的特點

1．高壓：液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～3.5萬KPa。
2. 高速：流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少於 1h 。
3. 高效：近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。
4.高靈敏度：高效液相色譜已廣泛採用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升。
5.適應范圍寬：氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優點，但是受技術條件的限制，沸點太高的物質或熱穩定性差的物質都難於應用氣相色譜法進行分析。而高效液相色譜法，只要求試樣能製成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發性的限制。對於高沸點、熱穩定性差、相對分子量大（大於 400 以上）的有機物（這些物質幾乎佔有機物總數的 75% ～ 80% ）原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析。 據統計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約佔20%，而能用液相色譜分析的約佔70～80%。
高效液相色譜按其固定相的性質可分為高效凝膠色譜、疏水性高效液相色譜、反相高效液相色譜、高效離子交換液相色譜、高效親和液相色譜以及高效聚焦液相色譜等類型。用不同類型的高效液相色譜分離或分析各種化合物的原理基本上與相對應的普通液相層析的原理相似。其不同之處是高效液相色譜靈敏、快速、解析度高、重復性好，且須在色譜儀中進行。