rna檢測有什麼方法

㈠ 小分子RNA的檢測方法

實時熒光定量PCR技術是1996年由美國Applied biosystems公司推出在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。該技術在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，使每一個循環變得「可見」，最後通過Ct值和標准曲線對樣品中的DNA (或cDNA) 的起始濃度進行定量的方法。實時熒光定量PCR是目前確定樣品中DNA (或cDNA)拷貝數最敏感、最准確的方法。
目前市場上miRNA qPCR檢測方法主要有以下兩種：1. 兩步法； 2.三步加尾法。兩種方法的主要差別在於qPCR之前的cDNA制備過程（如圖）。其中兩步法是通過獨特設計的莖環結構引物進行反轉錄將miRNA反轉錄成cDNA。而三步法則是給miRNA序列加polyA尾，之後再利用反轉錄過程將miRNA反轉錄成cDNA並加上獨特設計的尾部序列。

兩步法的優勢在於特異性很高，但是最新的研究報道顯示在編輯過程中，miRNA 的3』序列的多樣化現象(Heterogeneity)，這種現象的發生使得目前市場上qPCR兩步檢測法的准確性受到影響（如圖）。而三步法則不受這一現象的影響，而且隨著科學家們的不斷摸索創新，三步法的特異性如今已經可以和兩步法媲美。更重要的是低廉的價格也是三步檢測法越來越受到廣大研發人員喜愛的重要原因。

㈡ 如何測量RNA的純度和含量

RNA膠（凝膠成像）檢測。例如：原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。在膠上就有三條明顯大小不一的條帶。

凝膠遷移分析。可以用來研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：結合了蛋白的RNA在凝膠中的遷移速率更慢，因而可以區分出結合蛋白與未結合蛋白的RNA條帶。RNA-seq即轉錄組測序技術，把mRNA，smallRNA等用高通量測序技術把RNA的序列測出來。反映出RNA的表達水平。

RNA純度：RNA在純化過程中容易受到DNA、蛋白質及有機溶劑的影響，這些殘存物將會影響以後的操作。光譜分析(NANODROP)利用物質對不同波長光的吸收度的不同，可以鑒別出溶液純度及濃度。

組成結構

RNA和DNA一樣，也是由各種核苷酸通過3′，5′-磷酸二酯鍵連接構成的多核苷酸鏈，但與DNA有一系列差異。

在化學組成方面，RNA含核糖而不含脫氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是，每個tNA分子含有一個胸腺嘧啶，這是在RNA鏈合成後由尿嘧啶甲基化生的，此外，前面已提到，少數DNA含有少量核糖，但這些個別的例外並不能以此否定兩類核酸組成上的差異。

以上內容參考：網路-核糖核酸

㈢ 鑒定RNA的品質通常有幾種方法,怎樣鑒定

電泳檢測吧，28S、18S（真核）或者23S、16S（原核）條帶清晰，無明顯拖尾就表示RNA無明顯降解，品質較好，反之則發生降解。有條件可以用2100生物分析儀檢測，本質上還是電泳檢測，但速度快，一次可以檢測12個樣品，峰圖與膠圖結合容易判斷，而且可以定量，比Nanodrop定量准確

㈣ 如何檢測RNA提取成功或如何檢測RNA的完整性

檢測RNA的完整性的方法：

1. 完整的總RNA在進行變性凝膠電泳時會產生清晰的28S和18S rRNA條帶（真核樣品）。28S rRNA條帶的強度應當大致為18S rRNA條帶的兩倍。這種2:1的比率（28S：18S）是判斷RNA完整性的一個很好的指標。

2. 使用變性凝膠電泳來評估RNA完整性的一個缺陷是觀察所需的RNA樣品量。通常情況下，需要在變性凝膠中上樣至少200 ng的RNA才能在EtBr染色下進行觀察。而在某些RNA制備實驗中，如從穿刺活檢樣品或激光捕獲顯微切割樣品中提取RNA，得率是非常低的。這種情況下，或許就不可能在進行表達譜分析實驗前取出200ng的RNA來評估其完整性。其它的核酸染料，比如Moleculor Probes (Eugene, OR) 的SYBR® Gold及SYBR Green II RNA染料，相比傳統的瓊脂糖凝膠電泳EtBr染色方法可以顯著提高靈敏度。通過使用300nm的透射光源（6 x 15瓦的燈泡）及特殊的濾光片，SYBR Gold RNA凝膠染色可以檢測到低至1ng的RNA，而SYBR Green II則可以檢測到2ng，從而可以使用更少的樣品來進行RNA完整性分析。

3. 目前有一種快速簡單的方法可以替代傳統的凝膠分析方法，這種方法可以同時對RNA樣品進行定量及質量評估。Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies)是第一款商業化的提供RNA樣品狀態細節信息的微流體儀器。當與RNA 6000 LabChip®（Caliper Technologies Corporation所擁有的一個注冊商標）結合使用時，每次進行分析最低僅需1µl濃度為10 ng/µl 的樣品。除了評估RNA完整性，這台自動化系統同樣可以提供樣品RNA濃度及純度（如mRNA制備中的rRNA污染）的評估。在過去，檢測濃度及純度需要使用部分RNA樣品（通過A260分光光度法），而評估完整性則需要另外使用部分樣品。通過使用LabChip®系統，可以僅使用一份5ng的樣品來同時對濃度、完整性及純度進行分析。分析數據可以顯示為類凝膠圖像、電泳峰圖及表格形式等。
   

㈤ 如何測量RNA濃度

1、超微量分光光度計測260nm吸收值計算。

可以定量溶於緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。

2、也可以用RNA膠（凝膠成像）檢測。例如：原核生物的核糖體所含的rRNA有5S、16S及23S三種。在膠上就有三條明顯大小不一的條帶。凝膠遷移分析。可以用來研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：結合了蛋白的RNA在凝膠中的遷移速率更慢，因而可以區分出結合蛋白與未結合蛋白的RNA條帶。

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1、RNA的功能是：

（1）具有肽醯轉移酶的活性。

（2）為tRNA提供結合位點。

（3）在蛋白質合成起始時，參與同mRNA選擇性的結合，在肽鏈的延伸中與mRNA結合。

2、原核生物的rRNA分三類：5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。

真核生物的rRNA分四類：5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。

S為大分子物質在超速離心沉降中的一個物理學單位，可間接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖體均由大、小兩種亞基組成。

3、凝膠成像對DNA或RNA膠 進行切膠、拍照、觀察、分析的實驗室類儀器，凝膠成像系統可以應用於分子量計算、密度掃描、密度定量、PCR定量等生物工程常規研究。

㈥ 用什麼方法檢測產品是否含有DNA 和rna

DNA和RNA作為遺傳物質，本身都有自己的特性，用於檢測的方法也有很多，如下：

首先我們要知道：

DNA：為雙鏈結構，由A 、C 、G、T組成，鏈有外顯子和內含子區域，物質性質中A260/A280在1.8左右，在260nm出有最大吸收峰。

tRNA的二級和高級結構

1、抽提試劑盒分別抽提：將產品分成兩份，其中一份用來抽提DNA，此樣本加入RNA 酶，另一份用來抽提RNA，此樣本加入Dnase I，由此抽提出來的核酸進行瓊脂糖凝膠電泳或者aligent 4200/2100儀器檢測，考慮到DNA和RNA可能會降解，只有樣本完好時，才能輕易地辨別出來。

2、qPCR技術：如1中所示，用1中的樣本進行qPCR驗證，設計引物時DNA樣本跨外顯子區域，或者是單獨設計內含子區，加標准品對照，RNA正常設計即可，由此得出的結果可以根據擴增長度和兩個結果進行判定。

以上為兩個最基本的方法，操作簡單，成本可控，兩個結合起來結果准確，當然還有一些其他的方法，並設計對照試驗，採用控制變數法進行研究。

㈦ 如何檢測RNA的穩定性

檢測RNA的穩定性的方法是：放線菌素D可在數分鍾內被細胞吸收，並優先嵌入到富含GC的DNA序列中，形成穩定的復合物，抑制所有真核RNA聚合酶的轉錄進程。

利用放線菌素D處理不同時間長度後，檢測目標RNA的分子水平，推算目標RNA的半衰期，評估其穩定性。此實驗是研究RNA分子轉錄後調控的常用方法之一。

主要信息：

RNA分子結構之所以能夠穩定，其原因就是鹼基配對造成了能量的降低。 因此，最小自由能演算法認為，自由能趨向最小 的時候為RNA真實的二級結構。

絕大多數RNA為單鏈分子，單鏈可自身折迭形成發夾樣結構而有局部雙螺旋結構的特徵，這是各種RAN空間結構的共同特徵。

RNA局部雙螺旋結構中鹼基互補配對規律是A對U和G對C。由於RNA分子內部不能全面形成鹼基配對，故其鹼基克分子比A不等於U，G不等於C，不存在DNA鹼基比例的Chargaff規律。

㈧ RNA的提取及鑒定可以用哪些方法

傳統方法，可以用氛氯仿抽提，現在有很多的試劑盒，過柱子即可。鑒定方法，可以電泳檢測，測OD值，或是用安捷倫檢測，做qPCR也可以