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熒光檢測方法金葡萄球菌的研究

發布時間:2022-09-01 11:06:33

① 求教 大腸桿菌 和 金黃色葡萄球菌 的一般的實驗室檢測方法

大腸桿菌:
大腸桿菌也是有MPN法的,方法是GB5750.12-2006,見「大腸埃希氏菌多管發酵法」,定性也可以參照。如果你只是要鑒定大腸桿菌,不考慮一定要使用國家標准方法,就用普通的辦法,分離單個菌落然後生化鑒定吧。

金黃色葡萄球菌:
這個檢測標准很多呀,比如GB4789.10-2010(定性定量都有)、GB/T18204.7-2000(定性)、GB15892-2012(定性)

② 化妝品中金黃色葡萄球菌的測定原理

原理:金黃色葡萄球菌,在甘露醇發酵試劑下被抑制,培養皿上出現透明圈。
有關化妝品中金黃色葡萄球菌樣品制備以及考核方案的設計是化妝品致病菌檢測能力驗證計劃的難點和核心內容,本研究從金黃色葡萄球菌,銅綠假單胞菌和其生物性狀相似的干擾菌的化妝品樣品製作技術和考核方案的設計入手,研究化妝品致病菌檢測能力驗證的核心技術.方法:以金黃色葡萄球菌,銅綠假單胞菌及其檢測干擾菌的樣品製作和考核評價為研究目標,從菌液制備,化妝品介質篩選,樣品制備,均勻性/穩定性試驗,考核方案設計等五方面對化妝品致病菌檢測能力驗證的關鍵技術進行了研究.結果:製作的化妝品微生物樣品均勻性和穩定性檢驗結果符合要求,試用鑒定結果符合預期結果.結論:研製出均勻性,穩定性符合能力驗證要求的化妝品致病菌檢測樣品,制定了客觀,合理的考核評價方案,為化妝品微生物檢測能力驗證提供了較有價值的借鑒和參考.

如何快速檢測冷凍食品中的金黃色葡萄球菌

不可能快速檢測的,所有的微生物檢測都需要在特定的環境下繁殖一定時間才能做出正確檢測。如果外檢的話周期是7天,有的是可以加急到4天的。你說的快速檢測指的是培養一定時間之後用熒光法或者指示盒做是可以的 。如果是給企業做的話建議到專業是檢測機構做

④ 金黃色葡萄球菌的球菌檢驗

第一,金黃色葡萄球菌的檢驗
樣品處理:無菌取25g或25mL食品樣品,放入225mL滅菌生理鹽水中均質,製成10-1稀釋液。
增菌培養:將10-1稀釋液接入7.5%NaCl肉湯或胰蛋白腖肉湯中,37°C培養24小時。
分離培養:將上述稀釋液或培養液分別劃線血平板和Baird-Parker平板,置37°C培養24~48小時。金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落,大而凸起,表面光滑,周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落為圓形,直徑2~3mm,顏色灰或黑色,周圍有一渾濁帶。
染色觀察:從平板上挑取可疑性菌落進行革蘭氏染色,金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性,顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞、莢膜,直徑0.5~1μm。
血漿凝固酶試驗:吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌試液浸液肉湯24小時培養物充分混勻,置36±1°C培養,每隔半小時觀察一次,連續觀察6小時,出現凝固,即將小試管傾斜或倒置時,內容物不流動,判為陽性。同時做陰陽性對照。耐熱核酸酶試驗:將24小時肉湯培養物沸水浴處理15min,用接種環劃線刺種於甲苯胺蘭-DNA平板,36±1°C培養24小時,在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。
第二,金黃色葡萄球菌腸毒素檢測
金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測主要有動物試驗、血清學試驗、免疫熒光試驗及酶聯免疫吸附等方法,在此就不一一贅述。

⑤ 金黃色葡萄球菌

1、采樣
採集樣品首先採取可疑的食物,其次採取病人的嘔吐物,剩餘的食品,或採取病人的糞便、血液。以及有關食品加工人員的皮膚感染性化膿創的膿汁等。、
2.國家標准檢驗方法GB4789.10-84,檢驗程序如圖5-9。
1)增菌和分離培養
將25g檢樣加於225mL滅菌生理鹽水中或吸取液體檢樣5ml於7.5%氯化鈉肉湯50ml進行增菌;同時挑取混懸液接種血平板及Bakd-Rarker氏培養基;取可疑菌落再接種血瓊脂平板做純培養。然後進行革蘭氏染色。
2)血漿凝固酶試驗
吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL於小試管中,再加入培養24小時葡萄球菌肉浸液肉湯培養物0.5mL振盪混勻,37℃溫箱或水浴內每半小時觀察一次,觀察6小時,如呈現凝塊即為陽性,同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉浸液肉湯作為對照。
血漿凝固試驗也可採用玻片法。把兔血漿滴加於載玻片的一端,然後用白金耳挑取菌落與血漿充分混勻、在載玻片另一端以生理鹽水代替血漿做陰性對照。混合舌立即觀察,若出現凝塊即為陽性。
病原性葡萄球菌多數產生血漿凝固酶,非病原性的一般不產生。因此,該法是判定葡萄球菌有無致病性的重要指標。
3.腸毒素的測定
動物試驗可用檢樣稀釋液直接作動物試驗或按以下方法將分離菌株培養制備腸毒素。
①腸毒素的制備:
腸毒素的制備有固體培養法和液體培養法。
②腸毒素測定:
注射前應先喂給幼貓少量的食物,以便觀察反應。取上清液按幼貓體重每100g 1mL的劑量腹腔注射或加大2—3倍量口服。然後仔細觀察,一般攻毒後0.5~2小時內幼貓發生嘔吐、腹瀉、體溫上升、畏寒等症狀,經4~5小時後逐漸恢復。同時實驗時用未接種菌的培養基做同樣處理的陰性對照。
4、血清學反應
可用於檢測食物、培養物或濾液等標本中的細菌或腸毒素。血清學反應不僅簡便快捷,而且能對毒素做出最後定型:
①菌體熒光抗體染色法
塗片:食品樣品接種於葡萄糖肉湯培養基,37~C培養24~48小時。用接種環取上述增菌液,塗布於載玻片上。
乾燥:每一個培養物塗布3~4個點, 37度培養箱內乾燥。
固定:將乾燥好的玻片放在克氏固定液中固定3-5分鍾,再將固定的玻片標本放入95%酒精中浸泡1分鍾,
加抗血清:然後充分乾燥,用接種環取1環熒光抗血清輕輕加於菌膜上.
反應:然後37度培養箱內作用30分鍾。
沖洗浸泡:取出作用好的玻片用0.01mol/L PH7.4 PBS液沖洗玻片上熒光血清,最後將標本放於95%酒精液中浸泡1分鍾左右取出,用熒光顯微鏡鏡檢。
有特異性明亮熒光的為陽性或者菌量在一個視野中有數個或十幾個細菌以上者為陽性。
②毒素的檢出
金黃色葡萄球菌毒素蛇檢出有免疫瓊脂擴散法、反向間接血凝法,放射免疫測定法、免疫熒光法、酶聯免疫吸附測定法、A蛋白血凝試驗、核酸探針檢測,乳膠凝集試驗等。

⑥ 金黃色葡萄球菌的檢驗過程

1、樣品制備:

稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯中,固體樣品研磨或置均質器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數檢驗,可按十進制遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。

2、增菌與分離培養:

將上述樣品勻液於36℃±1℃培養18h~24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養物,分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板,血平板36℃±1℃培養18h~24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養24h~48h。

金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上,菌落直徑為2mm~3mm,顏色呈灰色到黑色,邊緣為淡色,周圍為一混濁帶,在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度,偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落;但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或乾燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些,外觀可能粗糙並乾燥。在血平板上,形成菌落較大,圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色(有時為白色),菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。

向左轉|向右轉

⑦ 金黃色葡萄球菌的鑒別要點有哪些

1、形態染色鑒別:

革蘭陽性球菌,葡萄串狀排列。

2、菌落特徵鑒別:

在血平板上菌落中等大小、光滑濕潤、菌落呈金黃色、菌落周圍有透明溶血環。

3、鑒定試驗鑒別:

甘露醇發酵試驗陽性,血漿凝固酶試驗陽性,觸酶陽性球菌,耐熱核酸試驗酶陽性,新生黴素試驗敏感。

(7)熒光檢測方法金葡萄球菌的研究擴展閱讀:

金黃色葡萄球菌的檢驗規定:

根據 GB4789.10-2016《食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》第一法定性檢驗和第二法平板計數法進行實驗操作。

其中定性檢驗的主要步驟有檢樣處理、增菌、分離、鏡檢、腸毒素檢驗等,定量實驗主要步驟有:檢樣處理、接種、培養、計數和確認試驗等,常規的計數培養方法時間需要48 h左右。

衛生部於2012年12月21日實施的《速凍面米製品食品安全國家標准》,將金黃色葡萄球菌檢測由定性轉向定量,規定每批產品抽檢5個樣品中,至多隻能有1個樣品每克生製品中檢出的金黃色葡萄球菌含量在1000至10000個之間。

⑧ 金黃色葡萄球菌的檢測方法

1、培養特性及形態特徵①培養特性在37℃條件下,需氧與厭氧培養的血液營養瓊脂平板均長出光滑、濕潤、隆起,約1mm大小的金黃色菌落,並且有β溶血現象。②鏡檢結果顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽性球菌,排列成葡萄串狀,也有個別2個或3個球菌相連。根據菌落形態、鏡檢結果懷疑該菌為葡萄球菌。2、菌落計數報告將直接計數法試驗中的3個平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數相加,乘以血漿凝固酶試驗陽性數,除以5,在乘以稀釋倍數,即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數量。3、動物感染試驗只注生理鹽水的小白鼠沒有任何變化:接種分離菌的小白鼠在9h內死亡。將死亡的小白鼠剖檢採集病料,進行細菌分離和生化試驗,得到與原分離菌。
「金球菌」列為「極重要質量項目」
金黃色葡萄球菌因思念、三全、灣仔碼頭事件而引發標准爭議,在2011年12月21日實施的速凍食品新國標中,金黃色葡萄球菌從原來「不得檢出」變為「限量檢出」,但這一檢測標準的改變並不代表可以忽略金黃色葡萄球菌的危害性。
在市質監局徵集意見而公示的抽檢項目中查詢到,對包括速凍水餃、湯圓、包子、花捲、饅頭、南瓜餅、八寶飯等在內的速凍米麵食品,仍然計劃把金黃色葡萄球菌列入A類檢驗項目,並標注為「極重要質量項目」,同時速凍米麵食品的沙門氏菌也是A類檢驗。
產品檢出「金球菌」屬嚴重不合格
市質監局介紹,速凍面米抽檢中,金黃色葡萄球菌也是A類檢驗項目。如果食品檢驗項目中任一項或一項以上不符合規定的要求,判定為不合格;當產品存在A類項目不合格時,屬於嚴重不合格;僅有B類項目不合格,屬於一般不合格。
同時,在嬰幼兒奶粉、蛋製品中,三聚氰胺、蘇丹紅也是同樣的A類。為避免一些肉禽食品可能含瘦肉精,此次在肉禽罐頭食品中,還有專門針對瘦肉精的檢測。
速凍食品「金球菌」可限量檢出
中國現行《速凍預包裝面米食品衛生標准》(GB19295-2003)規定金黃色葡萄球菌等致病菌不得檢出。
而衛生部於2012年12月21日實施的《速凍面米製品食品安全國家標准》,將金黃色葡萄球菌檢測由定性轉向定量,規定每批產品抽檢5個樣品中,至多隻能有1個樣品每克生製品中檢出的金黃色葡萄球菌含量在1000至10000個之間。

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