薄層色譜分析方法

1. 色譜分離技術中，薄層色譜的基本操作過程及注意事項

薄層色譜操作注意事項

影響薄層色譜分析的因素有很多，比如樣品處理方法、薄層板制備技巧、點樣方法、展開劑的遴選、溫濕度的掌控等等很多方面，在這里對其操作要點作一下簡單介紹:

1鋪制薄層板：鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發後，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據經驗來定，與空氣濕度有關，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板塗層的厚度，進一步影響上樣量。塗層薄，點樣易過載；塗層厚，顯色不那麼明顯。通常，板的質量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配製和展開系統的飽和。
2點樣：盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹乾或放入乾燥器里晾乾。

薄層色譜用於定量時，點樣是最主要的誤差來源。

供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點樣的同時，樣品在原點就可是成環形展開，原點直徑的擴散促進了這種展開，Kaiser稱之為「上樣環形色譜效應」。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環。這種效應對隨後的先行展開造成很不利的影響。
供試液的溶劑在原點的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點吸收大氣中的水分（特別在高濕度環境）對色譜的影響也不可低估。因此點樣時的同步乾燥或繼後乾燥以除去原點殘存的溶劑是需要的。但應盡可能避免高溫加熱，如用吹風筒加熱，樣品變為固態後，部分或全部強烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進了硅膠的有催化作用的活性表面故態化學反應，導致樣品的變性（尤其熱不穩定物質），至少移動相在展開時對這部分樣品的溶解速度比移動速度慢得多而形成拖尾（斑點拖尾的原因之一）。

2. 薄層色譜法的主要顯色定位方法有哪些

1、在日光下觀察，劃出有色物質的斑點位置。

2、在紫外燈（254nm或365nm）下觀察有無暗斑或熒光斑點並記錄其顏色、位置及強弱。能發熒光的物質或少數有紫外吸收的物質可用此法檢出。

3、熒光薄層板檢測，熒光薄層板是在硅膠中摻入了少量熒光物質製成的板。在254nm紫外燈下，整個薄層板呈黃綠色熒光，被測物質由於熒光猝滅作用而呈現暗斑。

4、既無色又無紫外吸收的物質，可採用顯色劑顯色。

(2)薄層色譜分析方法擴展閱讀

薄層色譜方法要求硅膠粉末的粒度分布窄、平均粒徑約15微米，薄層厚度為250微米左右，支持物一般為玻璃板，也可採用其他適用的物質。

將欲分析的樣品溶液以點狀或線狀加至薄層板上。然後將它插到 一個動相的液體(展開劑)中，使動相向上移動達到色譜分離的目的。

通常把流動相極性小而固定相極性大的體系稱為正相薄層色譜法；反之，則把流動相極性大而固定相極性小的體系稱為反相薄層色譜法。

與其它色譜方法相比具備如下優點：

①展開時間短，一般只需十至幾十分鍾。

②操作簡單，所用儀器設備也簡單，分離效果好。

③顯色劑多樣化，選擇性鑒定能力強。

3. 薄層色譜法的原理是什麼

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。

薄層層析可根據作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。

吸附是表面的一個重要性質。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質或溶解於其中的溶質在此表面上的密集現象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發生吸附現象。

(3)薄層色譜分析方法擴展閱讀：

薄層色譜法的應用：

1、葯物和葯物代謝

薄層色譜法在合成葯物和天然葯物中的應用很廣。有些文獻和內容偏重於合成葯物、化合物及其代謝產物，有文獻為在中草葯分析中的應用。

每一類葯物，例如磺胺、巴比妥、苯駢噻嗪、甾體激素、抗菌素、生物鹼、強心甙、黃酮、揮發油和萜等，都包括幾種或十幾種化學結構和性質非常相似的化合物，可以在上述文獻中找出一、二種全盤的展開劑，一次即能把每一類的多種化合物很好地分開。葯物代謝產物的樣品一般先經預處理後用薄層分析，應用也很廣，但有時因含量甚微，不用採用氣相和高效液相色譜法靈敏。

2、化學和化工

化工和化學方面的有機原料和產品都可用薄層色譜法分析。例如含各種功能基的有機物，石油產品，塑料單體，橡膠裂解產物，油漆原料，合成洗滌劑等，內容非常廣泛。

3、醫學和臨床

薄層色譜法的應用還滲透到醫學和臨床中去，例如它是一種快速的診斷方法可用於妊娠的早期診斷。方法是基於在孕婦的尿中能檢出比未媳婦婦女的尿中含更多的孕二醇，把兩者的尿提取後點在薄層上比較，即可作出判斷。這一方法可不用動物而在2~3小時內化驗出結果。

4、毒物分析和法醫化學

如前所述，經典的毒物分析有許多缺點，毒物分析和法醫化學採用薄層色譜法等新的手段，對麻醉葯、巴比妥、印度大麻、鴉片生物鹼等均可分析。

4. 薄層色譜分析步驟及注意事項

主要步驟：製版，殿堂，展開，斑點定位
注意事項：1,點樣量不宜過多，否則會產生拖尾而分離不好。
2,展開劑不要加的太多，起始線切勿浸入展開劑中。

5. 薄層色譜法的原理

薄層色譜法的原理：薄層色譜法利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。
薄層色譜法（TLC）系將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開後，根據比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比，用以進行葯品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，也用於跟蹤反應進程。

6. 薄層層析分離原理

薄層層祈法又稱「薄層色譜分析法」。把吸附劑和支持劑均勻塗布在玻璃或塑料板上形成薄層後進行色層分離的分析方法。將檢材中不同種類的化合物分離後，根據分離的各組分的Rf值或熒光特性可確定各組分的種類。根據斑點的面積，配合薄層掃描儀可測定各組分含量。樣品用量少，分析速度較快，設備簡單。分離過程中對混合物的各種成分沒有改變，分離後可將不易確認的組分轉移進行其他檢驗，可做為一種處理不同種類的大量樣品時迅速篩選的方法。司法鑒定中，主要用於檢驗各種高分子有機化合物，如有機溶劑中墨水、染料、油漆、土壤中提取出的有機成分以及油脂、生物鹼、樹脂、人造纖維、有機炸葯、有機物等。

7. 什麼是薄層色譜法

優點：操作、顯色比較方便，薄層色譜法斑點集中，薄層板耐腐蝕。
紙色譜法
點：操作、顯色比較方便，以紙為支持劑，沒有薄層色譜法鋪層的麻煩；缺點：不能用腐蝕性顯色劑，分離效果不如薄層色譜法斑點集中。
氣相色譜法
優點：高效能、高選擇性、高靈敏度、用量少、分析速度快、並可制備高純物質。
液相色譜法
優點：高效能、高選擇性、高靈敏度、用量少、分析速度快、並可制備高純物質。

8. 什麼叫薄層色譜法原理是什麼！！急！！

一、薄層色譜法

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。

二、薄層色譜法的基本原理

例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數的不同，使混合物得以分離。當溶劑沿著吸附劑移動時，帶著樣品中的各組分一起移動，同時發生連續吸附與解吸作用以及反復分配作用。

由於各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點。如作為標準的化合物在層析薄板上一起展開，則可以根據這些已知化合物的Rf值（後面介紹Rf值）對各斑點的組分進行鑒定，同時也可以進一步採用某些方法加以定量。

(8)薄層色譜分析方法擴展閱讀：

薄層色譜法（TLC）薄層色譜具有選用范圍廣，重現性好等優點，常用於中葯各種成分的鑒別。

用固定波長對薄層展開的各斑點作薄層掃描圖譜比目測的層析圖譜更為客觀准確，因而具有更好的指紋鑒別意義。但由於受薄層板的質量和開放式層析系統等外界因素的影響，易引起一定的實驗誤差。

薄層色譜法與紙層析和紙層析比較TLC快速、分離效率高、靈敏度高、顯色方法多樣、圖像易保存。

9. 薄層色譜法的介紹

薄層色譜法（TLC），系將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開後，根據比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比，用以進行葯品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，也用於跟蹤反應進程。

10. 薄層色譜法工作原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。

薄層層析可根據作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。

吸附是表面的一個重要性質。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質或溶解於其中的溶質在此表面上的密集現象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發生吸附現象。

物質分子之所以能在固體表面停留，這是因為固體表面的分子(離子或原子)和固體內部分子所受的吸引力不相等。在固體內部，分子之間相互作用的力是對稱的，其力場互相抵消。

(10)薄層色譜分析方法擴展閱讀：

一、薄層色譜的特點：

靈敏度及解析度高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預處理簡單、設備簡單。

由於這些特點，薄層色譜在實際工作中的應用十分廣泛。由於通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中，薄層掃描儀是最為重要的，因此對它進行略詳的介紹。

薄層掃描儀的基本結構及主要功能基本是相同的，每台儀器都包括光源、分光器、檢測器、數據處理及信號輸出幾個部分。

二、優點

它保持了操作方便、設備簡單、顯色容易等特點，同時展開速率快，一般僅需15～20分鍾；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍。

它既適用於只有0．01μg的樣品分離，又能分離大於500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。薄層層析的缺點是對生物高分子的分離效果不甚理想。