1、凱氏定氮法
凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽,然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨,隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收,再以標准鹽酸滴定,就可計算出樣品中的氮量。
由於蛋白質含氮量比較恆定,可由其氮量計算蛋白質含量,故此法是經典的蛋白質定量方法。
優點:可用於所有食品的蛋白質分析中;操作相對比較簡單;實驗費用較低;結果准確,是一種測定蛋白質的經典方法;用改進方法(微量凱氏定氮法)可測定樣品中微量的蛋白質。
缺點:凱氏定氮法只是一個氧化還原反應,把低價氮氧化並轉為氨鹽來測定,而不能把高價氮還原為氮鹽的形式,所以不可以測出物質中所有價態的氮含量。
2、雙縮脲法
雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。
當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。
優點:測定速度較快,干擾物質少,不同蛋白質產生的顏色深淺相近。
缺點:①靈敏度差; ② 三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等會干擾該反應。
3、酚試劑法
取6支試管分別標號,前5支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,不加標准蛋白溶液,在室溫下放置30分鍾,以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照,於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。
優點:靈敏度高,對水溶性蛋白質含量的測定很有效。
缺點:①費時,要精確控制操作時間;②酚法試劑的配製比較繁瑣。
4、紫外吸收法
大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收,這是由於蛋白質中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用於測定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。
取9支試管分別標號,前8支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,1號試管不加標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,而不加標准蛋白溶液,每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致,將液體混合均勻,在280nm波長處進行比色,記錄吸光度值。
優點:簡便、靈敏、快速,不消耗樣品,測定後能回收。
缺點:①測定蛋白質含量的准確度較差,專一性差; ②干擾物質多,若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物質,會出現較大的干擾。
5、考馬斯亮藍法
考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後,其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。
在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恆定的情況下,當溶液中的蛋白質濃度不同時,就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式,而且這種轉變有一定的數量關系。
一般情況,當溶液中的蛋白質濃度增加時,顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加,因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。
優點:靈敏度高,測定快速、簡便,干擾物質少,不受酚類、游離氨基酸和緩沖劑、絡合劑的影響,適合大量樣品的測定。
缺點:由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此用於不同蛋白質測定時有較大的偏差。
⑵ 蛋白質的營養成分能用什麼方法判別出來
1:用雙縮脲試劑檢測,呈現紫色就有蛋白質:
2:雙縮脲試劑是由雙縮脲試劑A和雙縮脲試劑B兩種試劑組成.
3:雙縮脲試劑A的成分是氫氧化鈉的質量分數為0.1 g/mL的水溶液;
4:雙縮脲試劑B的成分是硫酸銅的質量分數為0.01 g/mL的水溶液.:
5:雙縮脲試劑可以驗證蛋白質的存在.
具體方法是:
1:先將雙縮脲試劑A加入組織樣液,搖盪均勻(必須營造鹼性環境),在加入雙縮脲試劑B,搖盪均勻.:
2:如果組織里含有蛋白質,那麼會看到溶液變成紫色.具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應.
3:蛋白質的肽鍵在鹼性溶液中能與Cu2+絡合成紫紅色的化合物.顏色深淺與蛋白質濃度成正比.:
4:雙縮脲(NH2CONHCONH2)是兩個分子脲經180℃左右加熱,放出一個分子氨後得到的產物.:
5:雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲,因蛋白質中也有-CONH-基也可用於檢驗蛋白質,與蛋白質接觸後的顏色呈紫色
希望我的回答對你有幫助!
⑶ 鑒別蛋白質的最簡便方法
在其中滴加硝酸銀是否有白色沉澱生成。
⑷ 一般採用什麼方法檢驗蛋白質即鑒定
一般用雙縮脲試劑鑒定,雙縮脲試劑可以和蛋白質發生紫色反應。
⑸ 我們可以用什麼辦法檢測食物中是否含有蛋白質
日常簡單方法可以用燒灼,因為蛋白質燒灼了以後有一股特殊的味道,就比如說頭發燒著了以後的味道就是蛋白燃燒的味道。
⑹ 鑒別蛋白質的方法
先用雙向電泳,分離目的蛋白,然後打質譜,通過打出來前面幾個氨基酸序列,到蛋白質資料庫和蛋白組資料庫上比對,就能知道是什麼目的蛋白了。如果是新發現蛋白,可以比對est資料庫,得到該基因序列,然後再克隆出來。
⑺ 如何動手檢測食物中的蛋白質、脂肪、澱粉,並寫出簡單的檢測方法(任選兩種物質)
蛋白質專業檢測法是把它配成溶液,加入雙縮脲試劑後有紫色沉澱。不專業的是加硝酸加熱,會變黃的。家裡檢測就可以滴碘酒,變棕黃色。
澱粉,加碘酒或碘水就好啦,會變藍色的。
脂肪的專業檢測是用蘇丹3染液染色,然後在顯微鏡下就可以看到被染成橘紅色的脂肪滴。一般檢測可以在吸水性較好的紙上輕按一下,會有油印子的。
⑻ 鑒定蛋白質有哪些方法
蛋白質含量的測定:
1 凱氏定氮法
根據氮在蛋白質分子中含量恆定(平均佔16%),因此測定出樣品中氮的含量後,即可求出樣品中蛋白質含量。
2 雙縮脲法
3 福林-酚試劑法
福林-酚試劑包括兩種試劑:鹼性銅試劑,磷鉬酸及磷鎢酸的混合試劑。鹼性銅試劑與蛋白質產生雙縮脲反應。這種被作用的蛋白質中的酚基(酪氨酸),在鹼性條件下易將磷鉬酸和磷鎢酸還原成藍色的鉬藍和鎢藍,所生成藍色的深淺,與蛋白質的含量成正比。在650nm和660nm波長下測定光吸收值,即可測定蛋白質含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸,色氨酸在280nm處左右具有最大吸收。由於在各種蛋白質中這幾種氨基酸含量差別不大,所以280nm的吸收值與濃度呈正相關。可用於蛋白質濃度的測定。
⑼ 蛋白質用什麼試劑檢測 謝謝!
蛋白質用雙縮脲試劑檢測。
雙縮脲試劑是一個用於鑒定蛋白質的分析化學試劑。它是一個鹼性的含銅試液,呈藍色,由0.1g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。會遇到蛋白質顯紫色。
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲,由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在鹼性溶液中發生雙縮脲反應。當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,絡合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。
雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅,而氫氧化鉀僅僅是為了提供鹼性環境,因此它可被其他鹼,如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀,會延長試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護反應生成的絡離子不被析出變為沉澱,從而使試劑失效。
(9)用什麼方法能看到蛋白質擴展閱讀
注意事項
在使用雙縮脲試劑時候,必須注意,必須是先加0.1 g/mL氫氧化鈉溶液,再加0.01 g/mL硫酸銅的水溶液。若先加入硫酸銅溶液,再加入氫氧化鈉溶液,則無法充分製造鹼性環境,此時CuSO4會與NaOH發生復分解反應,生成藍色氫氧化銅沉澱,導致現象不清,無法較好地達到實驗目的。
配置方法
雙縮脲試劑A是質量分數為0.1 g/mL的NaOH水溶液;
雙縮脲試劑B是質量分數為0.01 g/mL的CuSO4水溶液。
先在待測液中加入雙縮脲試劑A 3mL,振盪均勻(營造鹼性環境),再加入1~2滴雙縮脲試劑B,振盪均勻。如果待測液里含有蛋白質,那麼會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。
蛋白質的肽鍵在鹼性溶液中能與Cu2+絡合成紫色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。
參考資料來源:網路-雙縮脲試劑
⑽ 如何鑒定蛋白質
鑒定蛋白質可以用雙縮脲試劑。
雙縮脲(NH2CONHCONH2)由兩個分子脲經180℃左右加熱,放出一個分子氨後得到的產物,在強鹼性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物,雙縮脲反應產生的紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。
優點:雙縮脲法測定蛋白質的測定范圍是1~10mg蛋白質,操作簡單、快捷。既適合手工操作,又適合自動化分析,重復性好、線性關系好, 雙縮脲試劑可以長期保存( 若貯存瓶中有黑色沉澱出現,則需要重新配製)。
缺點:靈敏度差,測定范圍窄,樣品需要量大,不同的蛋白質產生顏色的深淺相近,因此它常用於需要快速,但並不需要十分精確的蛋白質測定。 干擾測定的物質包括有:在性質上是氨基酸或肽的緩沖液,如TrIs緩沖液,因為它們產生陽性呈色反應,銅離子也容易被還原,有時出現紅色沉澱。
蛋白質的作用:
人體內的一些生理活性物質如胺類、神經遞質、多肽類激素、抗體、酶、核蛋白以及細胞膜上、血液中起「載體」作用的蛋白都離不開蛋白質,它對調節生理功能,維持新陳代謝起著極其重要的作用。人體運動系統中肌肉的成分以及肌肉在收縮、作功、完成動作過程中的代謝無不與蛋白質有關,離開了蛋白質,體育鍛煉就無從談起。
在生物學中,蛋白質被解釋為是由氨基酸借肽鍵聯接起來形成的多肽,然後由多肽連接起來形成的物質。通俗易懂些說,它就是構成人體組織器官的支架和主要物質。蛋白質缺乏:成年人:肌肉消瘦、肌體免疫力下降、貧血,嚴重者將產生水腫。
未成年人:生長發育停滯、貧血、智力發育差,視覺差。蛋白質過量:蛋白質在體內不能貯存,多了肌體無法吸收,過量攝入蛋白質,將會因代謝障礙產生蛋白質中毒甚至於死亡。
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