氨基衍生分析方法

『壹』 什麼是氨基酸的衍生化

氨基酸衍生化是氨基酸通過一系列反應化合而成的物質,例如氨基酸的聯合脫氨基作用合成氨基酸衍生物,也就是說氨基酸衍生物的前身是氨基酸, 例如腎上腺素就是氨基酸衍生物

『貳』 氨基酸分析法的方法分類

本法系根據氨基酸與異硫氰酸苯酯（PITC）反應，生成有紫外響應的氨基酸衍生物苯氨基硫甲醯氨基酸（PTC-氨基酸），PTC-氨基酸經反相高效液相色譜分離後用紫外檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性濃度范圍為0.025～1.25µmol/ml。
試劑 （1）流動相A 0.1mol/L醋酸鈉溶液(取無水醋酸鈉8.2g，加水900ml溶解，用冰醋酸調pH至6.5，然後加水至1000 ml)-乙腈(93:7)。
（2）流動相B 乙腈－水（8：2）。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×250mm， 5μm）；流速為每分鍾1.0ml；柱溫為40℃；檢測波長為254nm。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 0 100 0 14 85 15 29 66 34 30 0 100 37 0 100 37.1 100 0 45 100 0 測定法 精密量取氨基酸對照品溶液200μl，置一2ml塑料離心管中，精密加入1mol/L三乙胺乙腈溶液100μl，混勻，精密加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液100μl，混勻，室溫放置1小時，加0.8ml正己烷，劇烈振搖，放置10min，精密取下層溶液2μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液200μl，自「置一2ml塑料離心管中」起同法測定。 本法系根據氨基酸與6－氨基喹啉－N－羥基琥珀醯亞氨基氨基甲酸酯（AQC）反應，生成有紫外與熒光響應的不對稱尿素衍生物（AQC-氨基酸），AQC-氨基酸經反相高效液相色譜後用紫外或熒光檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性濃度范圍為2.5～200nmol/ml。
試劑 （1）流動相A 取醋酸銨10.8g或無水醋酸鈉11.5g，加水900ml溶解，用磷酸調pH至5.0，然後加水至1000 ml。
（2）流動相B 乙腈－水（3：2）。
（3）0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 8.8) 取硼酸12.36g，加水400ml溶解，用40%氫氧化鈉溶液調pH至8.8，然後加水稀釋至500ml。
(4) AQC溶液 取AQC適量，加乙腈溶解並稀釋製成每1ml中含1mg的溶液。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用新試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×250mm， 5μm）；流速為每分鍾1.4ml；柱溫為37℃；檢測波長為248nm。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 0 88 12 14 88 12 29 80 20 30 59 41 37 59 41 37.1 88 12 45 88 12 測定法 精密量取對照品溶液10μl，置一直徑為0.4cm、高度為5cm的小試管中，精密加入0. 4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 8.8) 70μl，在渦旋混勻器上混勻，精密加入AQC溶液20μl，混勻，精密量取5μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液10μl，自「置一直徑為0.4cm」起同法測定。 本法系根據一級氨基酸，在巰基試劑存在下，首先與鄰苯二醛（OPA）反應，生成OPA-氨基酸；反應完畢後，加入9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC），剩餘的二級氨基酸與FMOC繼續反應，生成FMOC-氨基酸，兩次反應生成的氨基酸衍生物經反相高效液相色譜分離後用紫外或熒光檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性濃度范圍為0.025～2.5µmol/ml。
試劑 （1）流動相A 稱取醋酸鈉7.5g，加水4000ml溶解，加三乙胺800μl，四氫呋喃24ml，混勻，用2%醋酸調pH至7.2。
（2）流動相B 稱取醋酸鈉10.88g，加水800ml溶解，用2%醋酸調pH至7.2，加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混勻。
（3）0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 10.4) 取硼酸24.73g，加水800ml溶解，用40%氫氧化鈉溶液調pH至10.4，然後加水稀釋至1000ml。
（4）OPA溶液 取 OPA 80mg，加0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 10.4) 7ml，加乙腈1ml， 3-巰基丙酸125μl ，混勻 。
（5）FMOC溶液 取FMOC 40mg , 加乙腈8ml溶解。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×150mm， 5μm）；柱溫為40℃；檢測波長為338nm（一級氨基酸），262nm（二級氨基酸）。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度及流速如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 流速（ml/min） 0.0 100 0 1.0 17.0 50 50 1.0 45.0 0 100 1.0 45.1 0 100 1.5 50.0 0 100 1.5 50.1 100 0 1.0 53 100 0 1.0 測定法 精密量取對照品溶液50μl，置一1.5ml塑料離心管中， 精密加入0. 4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 10.2) 250μl，混勻，精密加OPA衍生劑50μl，混勻，放置30秒，精密加入FMOC衍生劑50μl，混勻，精密量取4μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液50μl，自「置一1.5ml塑料離心管中」起同法測定。
附註：1、由於OPA-氨基酸不穩定，因此衍生後應立即進行分離測定。
2、本方法的衍生過程也可由自動進樣器完成。 本法系根據氨基酸與2,4-二硝基氟苯（DNFB）反應，生成有紫外響應的二硝基苯-氨基酸（DNP-氨基酸），DNP-氨基酸經反相高效液相色譜分離後採用紫外檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性響應范圍為30～140 pmol。本法所用的2，4－二硝基氟苯屬易爆、劇毒物質，有強致癌性，且該法對色譜柱要求較高，易損壞色譜柱，衍生試劑水解生成的2，4-二硝基苯易干擾絲氨酸的測定。除另有規定外，一般不宜採用本法。
試劑 （1）流動相A） 0.05mol/L醋酸鈉溶液(取 4.1g無水醋酸鈉，加水800ml溶解，加二甲基甲醯胺10ml，用稀醋酸調pH至6.4，用水稀釋至1000 ml)。
（2）流動相B 流動相A-乙腈（1：1）。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用新試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×250mm， 5μm）；流速為每分鍾1.0ml；柱溫為40℃；檢測波長為360nm。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 0 75 25 6 75 25 6.1 65 35 11 59 41 14 59 41 14.1 50 50 22 45 55 32 10 90 37 10 90 39 75 25 50 75 25 測定法 精密量取氨基酸對照品溶液2ml，置一50ml量瓶中，加0.5mol/L碳酸氫鈉溶液2ml，2，4-二硝基氟苯衍生化試劑（量取2，4－二硝基氟苯1ml ，用乙腈稀釋至100ml）1ml，混勻，在60℃水浴中反應 1小時，取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液2ml，自「置一50ml量瓶中」起同法測定。 本法系根據氨基酸經陽離子交換色譜柱分離後，與茚三酮反應，一級氨基酸生成在570nm處具有最大吸收的紫色化合物，二級氨基酸（如脯氨酸）生成在440nm具有最大吸收的黃色化合物，分別在570nm和440nm下檢測上述反應產物，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性響應范圍為20～500 pmol。
試劑 （1）流動相A 取無水檸檬酸鈉1.7g，鹽酸1.5ml，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至3.0。
（2）流動相B 取無水檸檬酸鈉1.7g，鹽酸0.7ml，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至4.3。
（3）流動相C 取氯化鈉5g，無水檸檬酸鈉1.9g，苯酚0.1g，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至6.0。
（4） 色譜柱再生溶液 取氫氧化鈉0.8g，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至13。
（5）柱後衍生試劑 取茚三酮18g，茚氮蘭0.7g，加76.7%二甲基亞碸－0.7二水合醋酸鋰－0.1%醋酸溶液900ml使溶解，在氮氣下混合至少3小時。
（6）樣品緩沖液 2%無水檸檬酸鈉-1%鹽酸-0.5%硫代二乙醇－0.1%苯甲酸溶液。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用新試驗 用磺化苯乙烯－二乙烯苯共聚物為填充劑（4.0×120mm， 7.5μm）；流動相流速為每小時14.0ml；柱後衍生試劑得流速為每分鍾7ml，反應器溫度為135℃；檢測波長為440nm(一級氨基酸)，570nm（二級氨基酸）。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下：開始時用流動相A平衡色譜柱，在25分鍾流動相的組成變為100%流動相B，在37分鍾，流動相組成變為100%流動相C，在75min，最後一個氨基酸被洗脫後，用色譜柱再生溶液再生色譜柱1分鍾。柱溫程序如下：開始時柱溫48℃，11.5分鍾後，以每分鍾3℃的速率升至65℃，約35分鍾後，以每分鍾3℃的速率升至77℃，最後在約52分鍾後，以每分鍾3℃的速率降至77℃。
測定法 精密量取氨基酸對照品溶液適量，注入氨基酸分析儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液適量，同法測定。
附註：不同品牌的氨基酸分析儀，應根據儀器的要求，對流動相、色譜柱再生溶液、衍生試劑、緩沖液和洗脫梯度作適當調整。

『叄』 用高效液相色譜法測定氨基酸時為什麼要進行氨基酸的衍生

建立一種准確、快速柱前衍生高效液相色譜法測定腦卒中患者血清 中18種游離氨基酸的方法,為臨床治療腦卒中提供依據.方法：利用高效液相色譜二極體陣列檢測法對AQC衍生的氨基酸產物進行分離.採用thermo C18(250mm×4.6mm,5μm)色譜柱,PH 5.09的乙酸銨溶液和60％的乙腈水溶液為流動相,檢測波長248nm,利用梯度洗脫的方式測定血清中1 8種氨基酸.結果：谷氨醯胺在0.0125-2mmol/L濃度范圍內,胱氨酸在0.00625-0.25mmol/L濃度范圍內,其餘16種氨基酸在 0.0 125-0.5mmol/L濃度范圍內線性關系良好.R2為0.9907-0.9999,RSD為1-4％.結論：利用此方法可以檢測缺血性腦卒中患者血 清中游離氨基酸,測定結果准確可靠,方法簡單易行.

『肆』 氨基酸的定量分析 甲醛滴定法

1、化學分析法——甲醛滴定法
甲醛滴定法用於氨基氮的測定, 可以測出樣品中總氨基酸的含量,其原理是在中性或弱鹼性水溶液中,氨基酸的α—氨基與醛類反應生Schiff鹼:α—氨基酸與甲醛反應生成亞甲基亞氨基衍生物
2、分光光度法——茚三酮法
茚三酮是一種能使氨基酸生成在可見光區有吸收的衍生試劑。該方法的基本原理是經陽離子交換柱分離出的氨基酸與茚三酮混合,經加熱反應後,一級胺與之生成藍紫色化合物,二級胺與之生成黃色化合物。兩種衍生物使用雙通道紫外檢測器同步檢測,檢測波長分別為570nm 和436nm。

『伍』 氨基酸的定量分析

就給你找到兩種，將就著看吧..你找到了另一種，再告訴我一下
1、化學分析法——甲醛滴定法
甲醛滴定法用於氨基氮的測定, 可以測出樣品中總氨基酸的含量,其原理是在中性或弱鹼性水溶液中,氨基酸的α—氨基與醛類反應生Schiff鹼:α—氨基酸與甲醛反應生成亞甲基亞氨基衍生物
2、分光光度法——茚三酮法
茚三酮是一種能使氨基酸生成在可見光區有吸收的衍生試劑。該方法的基本原理是經陽離子交換柱分離出的氨基酸與茚三酮混合,經加熱反應後,一級胺與之生成藍紫色化合物,二級胺與之生成黃色化合物。兩種衍生物使用雙通道紫外檢測器同步檢測,檢測波長分別為570nm 和436nm。

『陸』 生葯中氨基酸，肽類及蛋白質類常用檢查方法有哪些

①.氨基酸：
a.分光光度法：只有絡氨酸和苯丙氨酸對紫外線有吸收，氨基酸與衍生物反 應生成有色物質，常用的衍生物是：茚三酮、乙醯丙酮-甲醛。
b.氣象色譜法：將氨基酸衍 生為易氣化的物質，利用氣態樣品中各組成在兩相中的分配系數不同進行分析，常用的有硅 烷化、酯化、醯化等方法。
c.液相色譜法。
②.肽鏈：
a.N-末端降解法。
b.高效液相色譜法。
c.毛細管電泳技術。
d.C-末端酶解法。
③.蛋白質：
a.凱氏定氮法：樣品與濃硫酸共熱，有機物則分解產生NH 3 ，與H 2 SO 4 作用產生 （NH 4 ） 2 SO 4 。經強鹼鹼化後，分解釋放NH 3 蒸到溶液中，計算其含量。
b.雙縮脲法： （NH 4 ） 2 SO 4·Tris 緩沖液，在強鹼溶液中，雙縮脲與 CuSO 4 形成絡合物。
c.Tolin 酚法：與雙 縮脲原理相似。
d.考馬斯亮藍反應：蛋白質與染料結合測定吸光值。

『柒』 氨基酸的檢測方法有哪些

1. 分光光度法氨基酸檢測：主要是利用氨基酸與衍生劑發生化學反應，產生藍紫色化合物，該化合物在某一波長處有最大吸收峰，根據吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生劑為茚三酮。
2. 毛細管電泳法氨基酸檢測：根據分離原理的不同，可分為毛細管區帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電電泳、毛細管等速電泳以及膠束電動力學毛細管電泳。其中，毛細管區帶電泳和膠束電動力學毛細管電泳可用於氨基酸檢測。
3. 近紅外光譜法氨基酸檢測：利用有機化合物的含氫基團在特定波長區域躍遷，產生光譜的變化，結合統計學方法間接地實現氨基酸的定量檢測。
4. 氣相色譜法氨基酸檢測：將氨基酸衍生化處理變為容易氣化的物質，根據氣態樣品中各組分在流動相和固定相中的分配系數的不同，實現對氨基酸的定量分析。
5. 高效液相色譜法氨基酸檢測：是最常用的一種氨基酸檢測方法。由於大多數氨基酸本身沒有紫外吸收和熒光反應，因此需要對樣品進行衍生化處理將其轉化為有紫外吸收和發射熒光的物質，衍生可分為柱前衍生和柱後衍生。

『捌』 氣相色譜分析中常用哪些衍生化法

1.硅烷化衍生化方法
硅烷化衍生化方法是氣相色譜樣品處理中應用最多的方法，它是利用質子性化合物（如醇，酚，酸，胺，硫醇等）與硅烷化試劑反應，形成揮發性的硅烷衍生物。硅烷化反應一般在數分鍾內即可完成。
能進行硅烷化的化合物反應活性一般為：醇>酚>羧酸>胺>醯胺，反應活性還受空間位阻的影響，其醇的反應活性為伯醇>仲醇>叔醇，胺的反應活性為：伯胺>仲胺。

2. 酯化衍生化方法
有機酸由於極性較強，易產生嚴重的拖尾現象，而且大多數有機酸揮發性差，熱穩定性也較低。因此，許多有機酸（特別是長碳鏈的有機酸）在進行氣相色譜分析之前都要衍生為相應的酯。常用的酯化方法有以下一些。
（1）甲醇法。有機酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發生酯化反應，生成有機酸的甲酯。當催化劑使用H2SO4、HCl時，需要迴流，反應時間較長。若用三氟化硼作催化劑，反應可在室溫下完成，通常是將三氟化硼通入甲醇中配製酯化劑，然後再進行酯化反應。
（2）重氮甲烷法。重氮甲烷可與有機酸反應，生成有機酸的甲酯，放出氮氣。
此方法簡便有效，反應速度快，轉化率高，很少有副反應，不引入雜質，但反應要在非水介質中進行。反應條件雖溫和，但重氮甲烷不穩定，有爆炸性，有毒（致癌），制備和使用時要特別小心。常溫下酚羥基可與重氮甲烷緩慢反應，但在0℃以下時可避免酚羥基反應。
（3）三氟乙酸酐法。在三氟乙酸酐的存在下有機酸和酸可以反應生成酯。此法特別適於空間位阻較大的有機酸和醇或酚的酯化。
（4）其他酯化方法。為了提高方法的靈敏度和選擇性，有時需要制備甲酯以外的酯，這些酯化方法有的類似於甲酯化反應，如以重氮乙烷、重氮丙烷、重氮甲苯代替重氮甲烷，可製得相應的酯。而且這些試劑穩定性好、爆炸性小。用BF3的丙醇、丁醇或戊醇溶液與有機酸反應，也可制備相應的丙酯、丁酯或戊酯。

3. 醯化衍生化方法
醯化能降低羥基、氨基、巰基的極性，改善這些化合物的色譜性能（減少峰的拖尾），並能提高這些化合物的揮發性，也能增加某些易氧化化合物（如兒茶酚胺）的穩定性。當醯化時引入含有鹵離子的醯基時，還可提高使用電子捕獲檢測器（ECD）的靈敏度。常用的醯化試劑有醯鹵、酸酐和反應活性的醯化物（如乙酸咪唑）。
常用的醯化方法有以下一些。
（1）乙醯化法。標準的乙醯化法是將樣品溶於氯仿（5ml）中，與0.5ml 乙酸酐和1ml乙酸在5℃反應2-6h，真空除去剩餘試劑。還可以乙酸鈉為鹼性催化劑，以乙酸酐為乙醯化試劑進行乙醯化反應，用於糖類的分析。吡啶、三乙胺、甲基咪唑等也可作為鹼性催化劑。乙醯化反應通常在非水介質中進行，但胺類和酚類化合物乙醯化時可在水溶液中進行。
（2）多氟醯化法。常用的多氟醯化試劑是三氟乙醯（TFA），五氟丙醯（PFP）和七氟丁醯（HFB），其反應活性是TFA>PFP>HFB。TFA和PFP的衍生物揮發性較強，而HFP的衍生物ECD靈敏度高。多氟醯化反應的時間除取決於多氟醯化試劑的活性外，還取決於目標化合物的活性。如：麻黃鹼和偽麻黃鹼及其同系物與三氟乙酸酐（TFAA）在60℃時5min可完成反應：三環類抗抑鬱葯物與七氟乙酸酐（HFBA）在60℃時10min 可完成反應：而哌可酸，脯氨酸，谷氨酸，γ - 氨基丁酸的甲酯與HFBA的反應需在120℃時+20min 完成。多數情況氟醯化反應不需溶劑，但也有些需在溶劑中進行。此外，有時還需加鹼性催化劑。如胺和酸的多氟醯化常以苯為溶劑，三乙胺為催化劑；糖類的三氟乙醯化是在三氯甲烷溶劑中，以吡啶為催化劑進行的。

4. 鹵化衍生化方法
在目標化合物中引入鹵原子後可使用ECD檢測器，提高檢測的靈敏度（降低檢測限），同時也可改善揮發性和穩定性，常用的鹵化衍生化方法有以下一些。
（1）鹵素法。用鹵素直接作為衍生化試劑處理樣品，鹵素的作用是加成或取代。
（2）鹵化氫法。常用HCl和HBr為衍生化試劑與不飽和鏈發生加成反應或與羥基發生置換反應。
（3）N - 溴代丁二醯亞胺（NBS 法)。NBS是選擇性很強的鹵化衍生試劑，可使烯丙位的氫原子發生溴代反應。

『玖』 檢驗氨基酸用什麼方法

你若是問蛋白質，我可以直接告訴你又雙縮脲試劑（中學階段），但氨基酸的檢驗比蛋白質麻煩多了。 一、氨基酸的分離和檢測氨基酸的分離和檢測手段，以往用化學分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動分析儀。隨著高效液相色譜及填料的發展，HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優越性。但大多數氨基酸無紫外吸收和熒光發射特性，為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性，通常將氨基酸衍生，衍生方式有柱前衍生法與柱後衍生法。HPLC與各種衍生相結合的氨基酸分析技術，構成了具有廣泛適用性的現代氨基酸分析技術。
二、鑒定是哪種氨基酸，不同的氨基酸要用不同的方法。1、茚三酮反應 （ninhydrin reaction） 茚三酮（弱酸環境加熱） 紫色（脯氨酸、羥脯氨酸為黃色） （檢驗α－氨基）
2、坂口反應 （Sakaguchi reaction） 丙氨酸
α-萘酚+鹼性次溴酸鈉 紅色 （檢驗胍基 精氨酸有此反應）
3、米隆反應（又稱米倫氏反應） HgNO3+HNO3+熱 紅色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應，未加熱則為白色）
4、Folin-Ciocalteau反應（酚試劑反應） 磷鎢酸-磷鉗酸 藍色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應）
5、黃蛋白反應 濃硝酸煮沸 黃色 （檢驗苯環 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應）
6、Hopkin-Cole反應（乙醛酸反應） 加入乙醛酸混合後徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產生紫紅色環 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應）
7、Ehrlich反應 P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍色 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應）
8、硝普鹽試驗 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 （檢驗巰基 半胱氨酸有此反應）
9、Sulliwan反應 1，2萘醌、4磺酸鈉+Na2SO3 紅色 （檢驗巰基 半胱氨酸有此反應）
10、Folin反應 1，2萘醌、4磺酸鈉在鹼性溶液 深紅色 （檢驗α－氨基酸）
三、關於氨基酸態氮的測定：（定量分析）1.雙指示劑甲醛滴定法2.電位滴定法 另請參閱： http://www.docin.com/p-69133358.html

『拾』 氨基酸的分離分析方法常有有哪些

如果是兩個氨基酸的保留時間距離太近，那麼只能調整液相條件了。
比如調整流動相比例，或者是梯度比例，把兩個氨基酸拉開。
也可以適當調整衍生程序。
雖然衍生程序不會對氨基酸的保留時間有影響，不過會對它的信號產生影響。
如果這兩種氨基酸的峰高有所下降，或許分離度也可以達到要求。
還有就是注意峰型。
衍生化程序很容易損壞色譜柱，超高效色譜的壓力又高，色譜柱很容易損毀。
如果峰型不好，建議用純乙腈低流速反沖色譜柱。
或者是更換新色譜柱。