指紋圖譜是紅外分析的方法嗎

A. 什麼是指紋圖譜技術

（一）中葯指紋圖譜的定義、特點和分類

中葯指紋圖譜是指某些中葯材或中葯制劑經適當處理後，採用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特徵的色譜圖或光譜圖。

中葯指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中葯化學成分系統研究的基礎上，主要用於評價中葯材以及中葯制劑半成品質量的真實性、優良性和穩定性。「整體性」和「模糊性」為其顯著特點。

目前，中葯指紋圖譜技術已涉及眾多方法，包括薄層掃描（TLCS）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和高效毛細管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規分析手段。由於HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、應用范圍廣等特點；中葯成分絕大多數可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，且積累較豐富的應用經驗。因此高效液相色譜法已成為中葯指紋圖譜技術的首選方法。隨著HPLC— MS和GC—MS等聯用技術的應用，中葯指紋圖譜技術更趨完善。

（二）中葯指紋圖譜建立的意義

中葯及其制劑均為多組分復雜體系，因此評價其質量應採用與之相適應的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，但現行的顯微鑒別、理化鑒別和含量測定等方法都不足以解決這一問題，建立中葯指紋圖譜將能較為全面地反映中葯及其制劑中所含化學成分的種類與數量，進而對葯品質量進行整體描述和評價。這也正好符合中醫葯整體學說。在此基礎上，如果進一步開展譜效學研究，可使中葯質量與其葯效真正結合起來，有助於闡明中葯作用機理。總之，中葯指紋圖譜的研究和建立，對於提高中葯質量，促進中葯現代化具有重要意義。

（三）中葯指紋圖譜研究概況

以指紋圖譜作為中葯（天然葯物）提取物及其制劑的質量控制方法，已成為目前國際共識，各種符合中葯（天然葯物）特色的指紋圖譜控制技術體系正在研究和建立。美國食品葯品管理局（FDA）允許草葯保健品申報資料中提供色譜指紋圖譜；世界衛生組織（WHO）在1996年草葯評價指導原則中也規定，如果草葯的活性成分不明確，可以提供色譜指紋圖譜以證明產品質量的一致；歐共體在草葯質量指南中亦稱，單靠測定某種有效成分考查質量的穩定性是不夠的，因為草葯及其制劑是以整體為活性物質。色譜指紋圖譜尤其是薄層色譜的鮮明的指紋圖譜是很有用的。國外指紋圖譜的應用，目的在於解決成分復雜，有效成分不明確的植物葯質量檢測和產品批次間質量差異的問題。其中德國研製的銀杏葉提取物制劑是一個突出的例子。他們應用指紋圖譜制定了相應的標准，該圖譜體現了制劑所含的33個化學成分（主要為黃酮類和內酯類）和各自的含量。經化學成分和葯效相關性研究，發現約24%銀杏黃酮和約6%銀杏內酯組成的提取物具有最佳療效。此外，採用「混批勾兌」法，可使最終產品質量穩定，指紋圖譜重現性良好，含量浮動范圍為5%左右。

20世紀70年代我國已有學者嘗試使用TLCS對中成葯進行分析，因主客觀條件的限制，技術和時機的不成熟，沒有得到公認；20世紀90年代《中國葯典》增設了中葯化學對照品和對照葯材，為中葯指紋圖譜的研究奠定了基礎。隨著色譜技術的迅速發展和檢測能力的顯著增強，為指紋圖譜的研究和應用提供了良好的技術保證。目前我國已對中葯注射劑做出了必須用指紋圖譜進行檢測的規定，同時提出了具體的技術要求；在中葯材規范化生產實施過程中指紋圖譜亦有較廣泛的應用。

但是作為一項新技術，中葯指紋圖譜在實際應用中還面臨許多問題，只有進一步加強中葯材種植加工和中成葯生產貯存的規范化；中葯化學成分和中葯葯理研究的系統化和標准化；以及技術上多學科的滲透，才能保證中葯質量的穩定，進而保證中葯指紋圖譜的建立
參考資料：http://www.21jxhg.com/nyhf/Print.asp?ArticleID=15353

B. 聽說勁牌在葯材處理上採用了「指紋圖譜技術」，請問什麼是「指紋圖譜技術」

來個更專業的解釋，中葯指紋圖譜是指某些中葯材或中葯制劑經適當處理後，採用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特徵的色譜圖或光譜圖。中葯指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中葯化學成分系統研究的基礎上，主要用於評價中葯材以及中葯制劑半成品質量的真實性、優良性和穩定性。

C. 中葯指紋圖譜的分析、技術

隨著分離分析技術的發展，中葯質量研究也由過去「四大鑒別」(基元鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別)發展到反映中葯材全貌的指紋體系，即反映中葯材的多元化學組成特性的化學指紋圖譜和反映生物體 (除礦物、樹脂類外) 特性的基因指紋圖譜，從有效成分和遺傳物質兩方面實現對中葯材的質量控制，為中葯材以及中成葯提供綜合的和可量化的質量評價方法。 中國中葯指紋圖譜的研究已有相當的基礎，最早可以追溯到20世紀60年代，如採用薄層色譜、紫外光譜、紅外光譜法來描述中葯材主要成分的特徵，這是早期的原始的指紋圖譜，具有直觀、在簡單情況下容易比較差異的優點。隨著分析技術的飛速發展和微電腦的廣泛應用，基於化學計量法的中葯指紋圖譜的研究方法向高效、靈敏、專屬、智能化、聯用型的方向發展，高效液相、高效毛細管電泳、高速逆流色譜、核磁共振、近紅外光譜等新興分析技術的應用和各種數學分析方法的運用，為中葯指紋圖譜的研究與發展提供了廣闊的前景。
紫外光譜指紋圖譜
紫外光譜法是1995年以前指紋圖譜常用的方法。由於不同中葯所含的不飽和程度有差異，因而導致其紫外吸收曲線的形態、峰位、峰強度亦有差異，以此達到鑒別效果。常用導數光譜及結合各種數學分析法來消除樣品中的一些無關吸收，排除原圖譜中的某些干擾。
紅外光譜(IR )指紋圖譜
紅外光譜又稱分子振動轉動光譜，是一種分子吸收光譜。當樣品受到頻率連續變化的紅外光照射時，分子吸收了某些頻率的輻射，並由其振動或轉動運動引起偶極矩的凈變化，產生分子振動和轉動能級從基態到激發態的躍遷，使相應於這些吸收區域的透射光強度減弱。記錄紅外光的百分透射與波數或波長關系的曲線，就得到紅外光譜。一般的紅外光譜是對整個化合物分子的鑒別，比單純的官能團的化學定性鑒別專一性更強。而中葯材的紅外光譜在本質上與純化合物紅外光譜不同，它是混合物中各個組分紅外光譜的疊加。中葯材各種化學成分只要在質和量的方面相對穩定，並且樣品處理方法按同一要求進行，則其紅外光譜也是應該相對穩定的。因此這樣得到的混合物紅外光譜應該是具有一定的客觀性和可重復性。利用上述原理，不同混合物的紅外光譜各主要吸收峰歸屬，只要在4000-400cm，范圍內比較光譜差異即可。這種差異可以表現在三個方面：一是在某一波數處鑒別雙方只有一方有明顯差異；二是在某一波數內，鑒別雙方的光譜中，吸收峰的形狀和強度都有明顯差異；三是「指紋區」，面貌不同。
近紅外光譜法
近紅外光譜法(NIRS)是一種用於鑒定有機物質十分有用的技術，是中紅外光譜中C-H， N-H，O-H和S-H的共振吸收，具有高信息量。波長范圍為780nm-2500nm，而且該光譜取決於粒子大小、多晶型、殘留溶劑、濕度等等因素。因此待測物光譜的鑒定不可能直接與參比物質光譜比較後確定，需要通過一系列樣本的檢測(必須預先知道樣本中相關成分的含量或樣本的定性歸屬)，運用化學計算學手段，建立樣本與信息之間的數學模型。運用該模型即可以對未知樣本(例如新近購進的原葯材或新生產的成品等)進行辨別分析(給出結果：合格與否、含量多少等)。該方法為非破壞性方法，可實現產品的無損檢測，具有檢測速度快，操作簡單，所需樣品少，適宜於液體、固體、粘稠流體的分析及過程式控制制等優點。但是在進行定性定量分析中必須採用一定的數據處理，需要掌握一定的化學計量知識。
熒光光譜
中葯注射劑常含熒光性物質，但因不同注射劑所含具體熒光性物質不同，同種注射劑又因廠家的具體配方的差異或制備工藝條件的波動，均會使其特徵的熒光激發、發射光譜不同或其強度呈現差異；根據注射劑的熒光圖譜的差異達到快速鑒別、認定和控制配方、工藝的目的。
熒光光譜不像紅外光譜那樣具有明顯的指紋特徵，但具有高靈敏度的顯著優勢，且差異更為一目瞭然，易於判斷，因此，可以作為紅外光譜指紋技術的一種補充，用於中葯注射液的鑒別和認定，以及生產工藝的控制和成葯熱穩定性研究等。 色譜指紋圖譜最實用、應用也是最廣泛。中葯色譜指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒別手段，是當前符合中葯特色的評價中葯真實性、穩定性和一致性的質量控制模式之一。色譜指紋圖譜最大的優點是具有分離的功能。
薄層色譜(TLC)指紋圖譜
TLC為傳統的定性、半定量分析方法，在中國「七五」、十一五」及「九五」公關課題中有大量採用薄層色譜法進行地道葯材的定性鑒別。該法操作簡單、分析速度快速、一次分析樣品多，提供信息量大，用固定波長對薄層展開的各個斑點進行掃描，所得掃描圖譜比目測的層析圖譜更加客觀准確，因此具有較好的指紋鑒別意義。其最大的缺點是重現性以及精密度差，所以在指紋圖譜應用中受到限制，但可以作為中葯指紋圖譜研究的借鑒和補充。
氣相色譜(GC)指紋圖譜
中葯指紋圖譜技術
GC最適合於各種主含易揮發性成分葯材及其制劑的分析，尤其是毛細管氣相色譜法，解析度很高，往往一個色譜可以分出百個成分。該法靈敏度高、分離度好，分析速度快，但是分析范圍只是局限於低沸點成分，是指紋圖譜研究的主要方法之一。
高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜
HPLC適用於成分復雜而不易分離的分析對象，具有分離效能高，靈敏度高，分析速度快，不需要氣化，檢測手段多等優點，是目前指紋圖譜技術中用途最廣泛的一種方法。
高速逆流色譜(HSCCC)指紋圖譜
HSCCC是當前國際流行的新型的液-液分配技術。應用動態液一液分配原理，利用相對移動互不混溶的兩相溶劑，在處於動態平衡的兩相中將具有不同分配比的樣品組分離。其特點是不用固相載體作固定相，克服了樣品吸附、損失、峰形拖尾問題。操作更為簡便，容易掌握。對樣品的預處理要求低，僅需一般粗提物即可。該技術的回收率高，能實現梯度操作，亦能重復進樣，在中葯質量分析控制研究中，尤其在指紋圖譜研究中有較好的應用前景。
毛細管電泳(CE)指紋圖譜
毛細管電泳(CE)又叫高效毛細管電泳(HPCE)，以彈性石英毛細管為分離通道，以高壓直流電場為驅動力，依據樣品中各組分之間淌度和分配行為的差異而實現分離的電泳分離分析方法，是近年發展起來的一種新的分離技術，是電泳技術和層析技術結合的產物，兼有高壓電泳的高速高解析度及HPLC的高效率等特點，其選擇性與高效液相有很大的互補性。因此在指紋圖譜研究方面的應用越來越廣泛。
聯用技術 由於中葯復方制劑成分復雜，現行的各種單一測定方法給出信息少均無法建立較完善的指紋圖譜，因而有人提出建立多維指紋譜嘗試解決這一問題。所謂多維，即採用多種分析儀器聯用的模式來測定指紋圖譜，各譜圖間相互補充信息，可對復雜供識品有更清晰完整的認識。目前最常用的是高效液相（或氣相色譜）/二極體陣列檢測器/質譜/質譜聯用方式 (HPLC或GC/ DAD/ MS/ MS) 所得的多維指紋圖譜。多維譜的建立既能較系統、較完整地解決中葯復方制劑質量控制的難題，又為中葯研究中缺乏標准品的難題提供了種新的解決途徑。除了手性化合物外，從概率上要找出4個或以上圖譜信息完全相同的化合物幾乎是不可能的。 隨著分子生物學技術的迅速發展，DNA分子技術己越來越多的用於中葯材品種鑒別的研究。分子生物指紋圖譜是指採用分子標記技術得到的某一中葯材品種的DNA指紋圖譜。如對於人參、西洋參一類中葯材的鑒別，用傳統的方法(性狀、顯微、理化等鑒別方法)都顯片面性，結果往往很模糊，因而其產地、生長年限、加工方式等因素與其性狀和成分不呈很強的相關性，但應用分子生物學技術可以迎韌而解。

D. 中葯指紋圖譜的構建方法

目前，中葯指紋圖譜技術已涉及眾多方法，包括薄層掃描（TLCS）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和高效毛細管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規分析手段。由於HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、應用范圍廣等特點；中葯成分絕大多數可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，且積累較豐富的應用經驗。因此高效液相色譜法已成為中葯指紋圖譜技術的首選方法。隨著HPLC— MS和GC—MS等聯用技術的應用，中葯指紋圖譜技術更趨完善。
1 薄層色譜法（TLC） 薄層色譜具有選用范圍廣,重現性好等優點，常用於中葯各種成分的鑒別。用固定波長對薄層展開的各斑點作薄層掃描圖譜比目測的層析圖譜更為客觀准確，因而具有更好的指紋鑒別意義。但由於受薄層板的質量和開放式層析系統等外界因素的影響，易引起一定的實驗誤差。
2 氣相色譜法 (GC) 氣相色譜是封閉性色譜，受外界影響較少，具有高性能、高選擇性、高靈敏度等優點，適合於葯材及制劑中揮發性成分指紋圖譜的研究。一般使用質量型檢測器-氫火焰離子化檢測器（FID）。錢浩泉等[5]用氣相色譜法建立了高良姜及其邊緣植物揮發油成分的指紋圖譜。具體應用中多與質譜聯用，不僅具有 GC 的高分離效能，而且兼備了質譜鑒定的高靈敏度和准確性。
3 高效液相色譜法 (HPLC) 高效液相色譜具有分離效率高，分析速度快，定量精密度高，檢測器種類多，穩定性好等特點。不受樣品揮發度和熱穩定性的限制，比氣相色譜法應用范圍更廣，樣品中大多數成分均可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，是構建指紋圖譜的主要方法之一。由於中葯成分的復雜性，構建指紋圖譜一般採用梯度洗脫，因為逐步提高流動相洗脫能力可獲得較多色譜峰，提供更多指紋信息。在考察條件時，要對指標成分和非指標成分都予以考慮，由於葯材中各種成分的吸收波長及對不同檢測器的響應不同，在構建指紋圖譜時也需要加以考慮。實際應用中多使用多種聯用技術，充分利用各檢測器的互補性，從不同角度反映葯材及制劑的全貌，從各種圖譜中得到結構信息。
4 高速逆流色譜法 (HSCCC) 它是目前國際上較新型的液－液分配色譜技術，利用相對移動的兩種互不相溶溶劑，在處於動態平衡的兩相中將具有不同分配比的組分分離。已有報道[6]將 HSCCC應用於生物鹼、黃酮、木脂素、蒽醌等天然產物的分離分析。具有分離效率高，溶劑用量少，無吸附，樣品回收率高,重現性好和適用范圍廣等優點。
5 高效毛細管電泳法 (HPCE) 高效毛細管電泳技術是以高壓電場為驅動，毛細管為分離通道，依據樣品中各組分淌度和分配行為上的差異而實現高效快速分離的新型電泳技術。毛細管電泳的廣泛應用取決於其多變的分離模式，幾乎涉及分析化學中所有的分離對象，小到無機離子，大到蛋白質和高分子聚合物，也能夠分析不帶電荷的中性物質[7]。具有所需樣品少、溶劑消耗少、抗污染能力強、可直接分析水溶液等優點。其中毛細管區帶電泳 (CZE) 和膠束電動毛細管電泳色譜 (MECC) 是中草葯分析中最常見的兩種模式。但該方法的重現性有待提高。
6 紫外可見光譜 (UV) 紫外可見光譜反映不同化學物質的電子共扼體系特徵，具有加和性，對於混合物的鑒別專屬性差，解析度低，故紫外光譜很少用於指紋圖譜的構建。
7 紅外光譜和近紅外光譜 (IR) 紅外光譜是由分子的振動－轉動能級躍遷產生的光譜，紅外光譜具有高度的特徵性。近紅外光譜法在中葯質量控制方面有較好的應用前景。
8 核磁共振法 (NMR) 從純有機化合物的核磁共振氫譜上可獲得結構信息，包括各類質子的化學位移、數量核偶合關系。核磁共振譜具有高度的重現性和特徵性，易於解析和進一步研究，可評價葯材和中成葯質量的均一性和穩定性。
9 質譜法 (MS) 將中葯提取液置質譜儀中進行電子轟擊電離，可獲得提取液中化學成分的質譜指紋譜，不同中葯提取液所含成分不同，所得質譜圖顯示的分子離子峰及進一步，裂解碎片峰不一致，可供鑒別。
10 X射線衍射法 物質被X射線照射可產生不同程度的衍射現象，只要某一混合物的組成是恆定的，其衍射圖譜可以作為該混合物的特徵圖譜。該法具有圖譜指紋專屬性強，信息量大,所需樣品量小等諸多優點，X射線衍射法在動物類葯材鑒定與辨別中有獨特的優勢[8]。
11 分子生物學法 (DNA) 利用聚合酶鏈反應從不同生物樣品中人工合成 DNA片斷，而這種 DNA片斷的大小、數目可因不同的生物而異，故稱之為 DNA指紋圖譜。該技術具有重復性好、靈敏度高的優點。限制性內切酶片段長度多態性（RFLP）是最常用的構建 DNA指紋圖譜的方法，但該法費時費力，應用受到限制。隨機擴增多態 DNA（RAPD）標記，可以在特異 DNA序列尚不清楚的情況下，檢測DNA的多態性，這是構建中葯指紋圖譜的新方法，具有極好的應用前景。 羅志勇等[9]採用 RFLP技術,分析了人參、西洋參基因 DNA指紋圖譜。

E. 測定化合物化學結構一般不會用到的技術是 A碳譜B紫外光譜C質譜D紅外光譜E指紋圖譜

指紋圖譜，它是指某些復雜物質，比如中葯，某種生物體或某種組織或細胞的DNA，蛋白質經適當處理後，採用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特徵的色譜圖或光譜圖。指紋圖譜主要分為中葯指紋圖譜，DNA指紋圖譜和肽指紋圖譜。可見測生物樣和中葯樣多於化學樣品。

F. 中葯化學指紋圖譜分析有何意義和用途

中葯包括中葯材、中葯飲片、中葯提取物和中成葯，中葯的種植、採摘、加工和炮製等步驟都會影響中葯中有效活性成分含量與葯效的變化，因此提高中葯質量控制標准必須從各個環節人手，才能確保中葯質量一致和臨床療效穩定。採用現代分析技術和科學方法全面控制中葯的質量，是當代中葯研究的方向。

中葯化學在中葯質量控制中的作用主要體現在，中葯指紋圖譜中各種色譜法、光譜法、核磁共振波譜、質譜及其聯用技術、DNA分子診斷技術、x射線衍射法等現代分析技術的運用。

中葯指紋圖譜作為整體評價中葯質量的有效控制方法，是目前在國內外廣泛被接受的全面評價中葯質量模式。美國FDA在植物葯製品指導原則中允許申報者提供產品的色譜指紋圖譜資料，德國葯用植物學會、英國草葯典、印度草葯典以及加拿大葯用及芳香植物學會也都把指紋圖譜作為質量控制標準的內容之一。中葯指紋圖譜按測定手段可分為中葯化學指紋圖譜和中葯生物指紋圖譜。中葯化學指紋圖譜是目前主要常用的方法，尤其是色譜和光譜聯用技術。最常用的光譜是紅外光譜（IR），最常用的色譜是薄層色譜（TLC）、氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）和毛細管電泳（CE），近來又出現了X射線粉末衍射指紋圖譜。

中葯化學研究已滲透到了中葯研究的各個領域，是影響其他學科發展的重要因素。如中葯鑒定學、中葯炮製學、中葯制劑學、中葯分析化學和中葯葯理學等，在當今多學科相互滲透的時代，中葯化學研究是學科間聯系的重要工具和橋梁。

G. 指紋圖譜技術的簡介

中葯指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中葯化學成分系統研究的基礎上，主要用於評價中葯材以及中葯制劑半成品質量的真實性、優良性和穩定性。「整體性」和「模糊性」為其顯著特點。
目前，中葯指紋圖譜技術已涉及眾多方法，包括薄層掃描（TLCS）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和高效毛細管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規分析手段。由於HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、應用范圍廣等特點；中葯成分絕大多數可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，且積累較豐富的應用經驗。因此高效液相色譜法已成為中葯指紋圖譜技術的首選方法。隨著HPLC— MS和GC—MS等聯用技術的應用，中葯指紋圖譜技術更趨完善。

H. 指紋圖譜的介紹

指紋圖譜是指某些復雜物質，比如中葯，某種生物體或某種組織或細胞的DNA，蛋白質經適當處理後，採用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學特徵的色譜圖或光譜圖。