1. western結果怎樣統計分析
1、 一般分析是用方差分析、T檢驗。
2、統計分析是指運用統計方法及與分析對象有關的知識，從定量與定性的結合上進行的研究活動。它是繼統計設計、統計調查、統計整理之後的一項十分重要的工作，是在前幾個階段工作的基礎上通過分析從而達到對研究對象更為深刻的認識。它又是在一定的選題下，集分析方案的設計、資料的搜集和整理而展開的研究活動。系統、完善的資料是統計分析的必要條件。
運用統計方法、定量與定性的結合是統計分析的重要特徵。隨著統計方法的普及，不僅統計工作者可以搞統計分析，各行各業的工作者都可以運用統計方法進行統計分析。只將統計工作者參與的分析活動稱為統計分析的說法嚴格說來是不正確的。提供高質量、准確而又及時的統計數據和高層次、有一定深度、廣度的統計分析報告是統計分析的產品。從一定意義上講，提供高水平的統計分析報告是統計數據經過深加工的最終產品。
2. western blot的結果應怎麼分析
western blot結果的分析是一個主觀性比較強的過程
western是一個半定量的實驗。所以一般是作為定性的驗證試驗
首先要分析的就是有無目的蛋白的條帶，有無條帶就是一個定性的結果，這種分析是比較簡單。當然這其中還要綜合考慮內參等對照樣品。
然後就是有條帶之後，各個條帶灰度值的分析，而對其灰度值的量化不外乎是在肉眼可見的基礎上在給出一個數值的參考而已。
所以說western blot結果的分析是一個主觀性比較強而且需要綜合考慮的過程
3. Westernblot法中最常見的是哪種
Westernblot法（即蛋白質印跡法）的基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。（如：伯樂生命的印跡膜上總蛋白檢測）。Westernblot法顯色的方法中，目前做常用的是底物化學發光ECL和底物DAB呈色這兩種。
4. western blot是干什麼的
Western Blot中文一般稱為蛋白質印跡。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。
Western Blot採用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，「探針」是抗體，「顯色」用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：
i. 放射自顯影
ii. 底物化學發光ECL
iii. 底物熒光ECF
iv. 底物DAB呈色
值得一提的是，western blot 這個名稱的由來很有意思。最開始做印跡工作的是一個叫做Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern blot，後來類似的出現了兩個過程相似，但是對象不同的印跡方法，一個針對RNA，一個對蛋白質，人們分別把這兩種技術的稱為Northern和Western，與這兩個技術的發明人沒有關系了。
5. Western blot 實驗技術及常見問題分析
Western blot基本原理：
在電場的作用下將電泳分離的多肽從SDS-PAGE凝膠轉移至一種固相支持體，然後用這種多肽的特異抗體來檢測。
Western blot應用：
目的蛋白的表達特性分析；
目的蛋白與其他蛋白的互作；
目的蛋白的組織定位；
目的蛋白的表達量分析；
Western blot一般流程：
蛋白樣品的制備：
1
水溶液提取法：稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解 度大，是提取蛋白質最常用的的溶劑，操作相對麻煩，重復性一般；
2 有機溶劑提取法；
3 離心管柱提取法：超快速，易用，高產及重復性強；
4 通過層析或電洗脫法制備目的蛋白。
Western blot注意事項和常見問題：
1 我的細胞提取液有的有沉澱，有的很清亮，為什麼呢？
答：有沉澱可能因為你的蛋白沒有變性完全，可以適當提高SDS 濃度，同時將樣品煮沸時間延長； 也不排除你的抗原濃度過高，這時再加入適量上樣緩沖液即可。
2 我做的蛋白質分子量很小（10 KD），請問怎麼做WB？
答：可以選擇0.2 μm的膜，同時縮短轉移時間。也可以將兩張膜疊在一起，再轉移。
3最後顯色時用 DAB好還是ECM好？
答：DAB 有毒，但是比較靈敏，是HRP 最敏感的底物；ECM結果容易控制，但被催化時靈敏度差一點，但如果達到閥值，就特別靈敏，可以檢測pg 級蛋白，具體可以根據你實驗的情況。
4 要驗證某個細胞上有無該蛋白的存在，需要做免疫組化和western blot試驗嗎？做這兩個試驗時的一抗和二抗可以共用嗎？
答：①免疫組化可以用來進行定位，但是不能精確定量，而且有時會有假陽性，不易與背景區分；Western
blot可以特異性檢測某個蛋白質分子，進行定 量，但是不能定位。
②兩種實驗的一抗有時候不能通用，公司的產品說明一般都會說明可以進行什麼實驗，在免疫組化時，是否適合石蠟切片或者冰凍切片。
5 細胞水平要做western blot，多少細胞提的蛋白夠做western blot？
答：一般5×106就足夠了。
6 同一樣品能同時提RNA又提蛋白么？這樣對western blot有無影響？
答：能，沒有問題。
7同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的Western Blot檢測嗎？
答：當然可以，有的甚至可以同時測幾十種樣品。
8 蛋白變性後可以存放多久？
答：－80℃，一兩年沒有問題。最關鍵兩條：不要被蛋白酶水解掉；不要被細菌消化掉（也是被酶水解了）。
9 二抗是生物素化的抗體，三抗是親和素生物素體系，不知採用這樣的方案後，封閉液是否要作調整，能否再用5％的脫脂奶粉呢？
答：不能使用脫脂奶粉，因為脫脂奶粉中含生物素，用BSA代替應該好一點。
10 做組織樣品的western的時候，怎樣處理樣品？
答：必須進行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要分步抽提(超速離心)。還有一點就是組織中的蛋白酶活性更強，需要注意抑制蛋白酶的活性。
11 免疫組化和Western Blot可以用同一種抗體嗎？
答：免疫組化時抗體識別的是未經變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬於構象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮後的蛋白都含有；構象型表位由於受蛋白空間結構限制，煮後變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋白上連續的幾個氨基酸，也就是線性表位，那麼這種抗體可同時用於免疫組化和Western，而如果抗體識別構象形表位，則只能用於免疫組化。
12 在做Western Blot時，PVDF膜用甲醇浸泡的目的？
答：PVDF膜用甲醇泡的目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質結合，做小分子的蛋白轉移時多加甲醇也是這個目的。
13 檢測同一抗體的磷酸化和非磷酸化的抗原可以在同一張膜上嗎？
答：可以。
14 蛋白質的分子量跨度很大，如要分離小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好嗎？
答：這么廣的分布不好轉移，一般建議：21kd和66kd可以一起轉，12％SDS-PAGE，濕轉120mA， 45-60min就可以了， 可以根據你實驗室的經驗調節；170kd 用 7% SDS－PAGE，200mA 90-120min。
15 細胞裂解液選擇蛋白酶抑制劑時有什麼原則嗎？受不受組織來源的影響？胞膜和胞漿有區別嗎？
答：一般來說提取時加入廣譜的蛋白酶抑制劑就可以了，操作時保持低溫。若有特殊要求可以選擇相應的蛋白酶抑制劑。
16 PVDF膜和硝酸膜結合蛋白的原理是什麼？
答：一般而言，硝酸纖維素膜是通過疏水作用來和蛋白質相聯，這樣的話，反復洗幾次後，蛋白容易掉下來，結果較差。PVDF膜主要通過它膜上的正電荷和蛋白接合，同時也有疏水作用，但相對較弱。這樣的話，PVDF膜和蛋白接合較牢，不易脫落，結果較好。
17 westernblot內參選擇什麼合適？
答：這與目標抗原的表達位置有關，對於胞漿和全細胞蛋白，可選擇內參β-actin、GAPDH和Tubulin；線粒體蛋白則可選擇內參VCDA1/Porin和COXIV；核內抗原可以選擇內參Lamin B1、TBP和histone。
18不能很好地將大分子量蛋白轉移到膜上，轉移效率低？
答：轉移緩沖液中加入20% 甲醇（終濃度），因為甲醇可降低蛋白質洗脫效率，但可增加蛋白質和NC膜的結合能力，甲醇可以防止凝膠變形，甲醇對高分子量蛋白質可延長轉移時間；轉移緩沖液加入終濃度0.1%SDS，也能增加轉移效率；使用戊二醛交聯；降低凝膠濃度，如低至6-7%或提高轉膜電壓/電流，增加轉移時間。
19轉膜時凝膠腫脹或捲曲？
答：可將凝膠在轉膜前放到轉膜緩沖液中浸泡5-10min。
20跑膠的條帶歪斜或者漂移？
答：電轉儀長期使用導致海綿變薄，「三明治」結構不緊湊導致，可更換或者在兩塊海綿之間墊上少許普通的草紙。
21轉膜後膜上有單個或多個白點？
答：轉膜時確保膜和膠塊之間沒有氣泡。
22轉膜緩沖液過熱？
答：緩沖液中離子濃度太低，電流或者電壓過高，轉膜過程中注意降溫。
23顯影後膠片背景太高？
答：轉膜前PVDF膜沒有用100%甲醇完全浸濕；洗膜不充分，可以增加膜洗滌次數；封閉不完全，選擇合適的封閉液和提高封閉時間；二抗濃度過高，降低二抗濃度；一抗特異性不強，換用特異性較強的單克隆抗體；曝光時間過長，減少曝光時間。
24結果沒有條帶或者條帶很淺，雜交信號很弱？
答：樣品中不含靶蛋白或者含量太低，可增加蛋白上樣量，設置已知標准量蛋白的對照；抗體稀釋比例太低，孵育時間不夠；轉膜不好，轉膜後可先用麗春紅染色觀看染色效果；曝光時間過短，增加曝光時間；抗體保存不當，效價降低。
25目的條帶位置偏低或者偏高？
答：膠濃度不適合，高分子量要用低濃度膠，小分子蛋白要用高濃度膠。
26有非特異性條帶？
答：目的蛋白有多個修飾位點（磷酸化位點、糖基化位點、乙醯化位點等），本身可以呈現多條帶；一抗特異性不好，換用特異性較好的單克隆抗體；二抗非特異性引起的結果，可設立一組不加一抗只加二抗的平行對照來檢測二抗是否有非特異性結合；樣品蛋白質可能降解，提取蛋白時注意冰上操作，加入適當的蛋白酶抑制劑，避免樣品反復凍融；抗體濃度過高，降低一抗和二抗的濃度。
27膠片是一片空白，是怎麼回事？
答：如果能夠排除下面的幾個問題那麼問題多半出現在一抗和抗原制備上。 二抗的HRP 活性太強，將底物消耗光；ECM底物中H2O2，不穩定，失活；ECL底物沒覆蓋到相應位置；二抗失活。
28
目的條帶是白色，周圍有背景？
答：目的蛋白含量太高；一抗濃度偏高，二抗上HRP催化活力太強。
6. 如何分析western blot
個人認為，其實western是一個半定量的實驗，最後的膠片上顯示的條帶就是給出一個最直觀的結果，而對其灰度值的量化不外乎是在肉眼可見的基礎上在給出一個數值的參考而已。在肉眼的分辨已經能很好的區別條帶之間的差異的情況下，用不用分析軟體應該都是沒有問題的。換句話說，如果肉眼無法分辨條帶之間的差異，即使軟體分析出來的灰度值有所差異，但是不太明顯，而最終你做出了差異顯著的結論，我想很多人都會懷疑結果的可靠性的。
當然在分析結果時，盡量減小主觀因素造成的誤差也是一個問題。我認為手工的劃圈確實有一定的誤差，可以用「等高線法」也就是說在一些軟體中（如Quantity One）找出這個條帶灰度值相等的線作為條帶的邊緣線來圈定條帶，其准確性要提高不少。
7. 什麼是Westernblot法及Westernblot法目標
是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中時常會用到的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。
8. 給出一張western blot的圖，該怎麼分析
western blot結果的分析是一個主觀性比較強的過程western是一個半定量的實驗。
所以一般是作為定性的驗證試驗首先要分析的就是有無目的蛋白的條帶，有無條帶就是一個定性的結果，這種分析是比較簡單。當然這其中還要綜合考慮內參等對照樣品。然後就是有條帶之後，各個條帶灰度值的分析，而對其灰度值的量化不外乎是在肉眼可見的基礎上在給出一個數值的參考而已。所以說western blot結果的分析是一個主觀性比較強而且需要綜合考慮的過程
9. western blot 數據怎樣分析
實驗結果分析其實很簡單：如果樣品蛋白量有限，只夠進行一次電泳轉膜實驗時，分別檢測樣品的內參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內參含量，得到的數值即為內參校正後的各樣品中目的蛋白相對含量，再用此數值進行樣品間的比較和分析，得到目的蛋白含量在不同樣品間的實際變化結果。如果樣品量充分，可以先檢測內參，觀測樣品間內參顯色條帶是否一致，根據差異大小調整各樣品的上樣量重新進行Western Blotting實驗，至內參量一致為止；若內參一致，即可進行不同樣品間目的蛋白表達變化分析。這樣雖然麻煩一點，但是可以保證結果更有說服力，更可信。畢竟我們的實驗是一種嚴謹的工作。
10. western blot條帶怎麼分析
把條帶圈出來然後點測量 就是measure 出來的那個mean的數值就是灰度 應該說是白度值 條帶越深數值越小。