微生物的計數方法和計算方法

A. 用來測定細菌生長量的直接計數法和間接計數法包含哪些具體的方法

顯微鏡直接計數法和稀釋平板計數法是測定微生物數量的常用方 法。 直接計數法中常用的是顯微鏡直接計數法，這種方法是先將待 測樣品製成懸液，然後取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數(圖1- 3-1)。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微 生物總數。直接計數法所需設備簡單，可迅速得到結果，而且在計數 的同時能觀察到所研究微生物的形態特徵，其缺點是難以計數微小的 細菌。這種方法一般適用於純培養懸浮液中各種單細胞菌體的計數。 間接計數法最常用的是稀釋平板計 數法，它是根據微生物的培養特徵而設計 的計數方法。這種方法在樣品中含菌數較 少的情形下，也可以完成計數。 應用稀釋平板計數法計數時，需要 將待測樣品配製成均勻的系列稀釋液，盡 量使樣品中的微生物細胞分散開。再取一 定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板 中，使其均勻分布於平板中的培養基內； 或是將一定量的稀釋液，與溶化後冷卻至 45℃左右的瓊脂培養基混合，傾入無菌培 養皿中，搖勻、靜置待凝。經過培養後， 就由單個微生物生長繁殖形成菌落，這樣 的一個菌落就代表著一個微生物個體。統 計培養基中出現的菌落數，即可推算出檢 測樣品中的活菌數。 FOR EXAMPLE:] 土壤中好氣性細菌的計數 土壤中生活的微生物種類和數量是極其豐富的，這些數量眾多的 微生物對提高土壤肥力有重要作用。因此，測定土壤中的含菌量可以 作為判定土壤肥力的一個重要指標。 材料器具 土壤樣品；牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基(附錄二)、無菌水；培養皿、 移液管、天平、錐形瓶、試管、酒精燈、恆溫培養箱、搖床等。 活動程序 1.制備土壤稀釋液 取土壤表層5～10 cm 處的土樣。准確稱取1 g 土樣，放入盛有 99 mL 無菌水的錐形瓶(250 mL，放有小玻璃珠)中，用手或搖床振盪 20 min，即製成102 倍的稀釋液。 用1 mL無菌移液管，吸取10 2倍稀釋液0.5 mL，移入裝有4.5 mL 無菌水的試管中，配製成103 倍稀釋液。 用同樣的方法可製成稀釋倍數為104、105、106 的系列稀釋菌液 (圖1-3-2)。 圖 移液時，要將移液管插入液面，吹吸3 次，每次吸上的液面要高 於前一次，讓菌液混合均勻並減少稀釋中的誤差。每配一個稀釋度要 換用一支移液管。 2.取樣及倒平板 將無菌培養皿編號，依次為104、105、106，每一號碼設置三個 重復。 用無菌移液管三支，分別吸取稀釋倍數為104、105、106的土壤稀釋 液各0.2 mL，注入到相應編號的培養皿中(每個稀釋倍數各三個培養皿)。 將已滅菌牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基溶化，待冷卻至45～50 ℃左 右，傾入到無菌培養皿中，每皿約15 mL，輕輕轉動培養皿，使土壤 稀釋液與培養基混合均勻。 3.培養 將上述接種好的平板培養基冷卻後，倒置放入28～30 ℃的恆溫 培養箱中培養24～36 h，直至長出菌落為止。 4. 觀察記錄 將實驗中得到的菌落數填入表1-3-1。 結果分析 1.選取具有合適菌落數的稀釋倍數並計數。 在計算結果時，從接種的3 個稀釋度中選擇一個合適稀釋倍數， 統計出菌落數(圖1-3-3)。選擇的原則是： 過 (1) 細菌、放線菌、酵母菌以每個培養皿內有30～300 個菌落為 宜。黴菌以每個培養皿內有10～100 個菌落為宜。 (2) 同一稀釋倍數各個重復的菌落數相差不太懸殊。 2.將統計出的菌落數按下列公式計算，得出每克樣品菌數。 每克土壤樣品菌數= 某稀釋倍數的菌落平均數×稀釋倍數

B. 測定微生物的生物量有哪些主要方法

測定微生物的生物量有哪些主要方法
測定的方法主要有四種：

1.直接計數測定：根據微生物種類，有血球計數板和細菌計數板；

2.比濁法：根據菌懸液的濃度在一定范圍內與光密度成正比，可以用分光光度計測OD值，用OD值表示樣品菌液濃度；

3.核酸計數法：熒光定量PCR技術；

4.活菌計數法：MPN和平板計數法由於測定方法的限制。新鮮土樣經氯仿熏蒸後（24h），土壤微生物死亡細胞發生裂解，釋放出微生物生物量碳，用一定體積的LK2SO4溶液提取土壤，借用有機碳自動分析儀測定微生物生物量碳含量。根據熏蒸土壤與未熏蒸土壤測定有機碳的差值及轉換系數（KEC），從而計算土壤微生物生物量碳。

C. 微生物原液怎麼計算結果

微生物原液計算結果方法有直接計數法和稀釋系數法。
1、直接計數法：該方法需要使用顯微鏡對微生物進行視覺計數。具體方法為在不同濃度的微生物原液中取樣，製作好攜譽樣品後穗前，用顯微鏡直接統計在視野范圍內所觀察到的微生物的數量，並通過單位體積中微生物的數量計算微生物的濃度。2、稀釋系數法：該方法需要先對微生物原液進行稀釋，然後取一定數量的稀釋液進行培養，之後用菌落計數器計算菌落數量，再通過濃度計算公式計算出微生物濃度。
微生物原液一般用於微生物檢測和分離培養，通常需要猜隱清計算微生物濃度，以便進行質量控制和質量評價。

D. 計算微生物的繁殖數時有哪些常用方法

測定微生物繁殖，一定要計算各個體的數目。
單細胞狀態的細菌和酵母菌--計算各個體的數目
放線菌和黴菌等絲狀生長的微生物--計算其孢子數
1.繁殖數直接計數法
(1)
計數板直接計數法
指採用計數板(細菌計數板或血球計數板)，在光學顯微鏡下直接觀察微生
物細胞並進行計數的方法。(計算一定容積里樣品中微生物的數量)
缺點:
不能區分死菌與活菌;
不適於對運動細菌的計數;
需要相對高的細菌濃度;
個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察;
(2)染色後活菌計數法
採用特定的染色技術進行活菌染色，然後用光學顯微鏡計數的方法。可分別對活菌和死菌進行計數。
例:美藍染色酵母
活細胞→無色
死細胞→藍色
Eg.
細菌經丫啶橙染色後，在紫外光顯微鏡下可觀察
活細胞→橙色熒光
死細胞→綠色熒光
(3)比例計數法死細胞→藍
將已知顆粒濃度的樣品(例如血液)與待測細胞細胞濃度的樣品混勻後在顯微鏡下根據二者之間的比例直接推算待測微生物細胞濃度。
(4)過濾計數法
當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數。
(5)Coulter
電子計數器
菌體與液體導電性不同,
一個細胞通過小孔,電阻增加,形成一個脈沖。
(6)菌絲長度
平板
U行管
2.繁殖數間接計數法
是一種活菌計數法，這是一種依據活菌在液體培養基中會使其變混或在固體培養基上(內)形成菌落的原理而設計。
最常用的是菌落計數法(colony-counting
methods)。
(1)平板菌落計數法
可用澆注平板(pour
plate)或塗布平板(spread
plate)等方法進行。此法適用於各種好氧菌或厭氧菌。
採用培養平板計數法要求操作熟練、准確，否則難以得到正確的結果。
樣品充分混勻;每支移液管及塗布棒只能接觸一個稀釋度的菌液;
同一稀
釋度三個以上重復,取平均值;
每個平板上的菌落數目合適(30-300)，便於准確計
數;
一個菌落可能是多個細胞一起形成，所以在科研中一般用菌落形成單位
(colony
forming
units，
CFU)來表示，而不是直接表示為細胞數。
根據每皿上形成的CFU數乘上稀釋度可推算出菌樣的含菌數。此方法最為常用，
但操作較繁瑣且要求操作者技術熟練--缺點。
國外出現了微型、快速、商品化的用於菌落計數的小型紙片或密封瓊脂板。原
理是利用加在培養基中的活菌指示劑TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)，它可使
菌落在很微小時就染成易於辨認的玫瑰色。
(2)膜過濾培養菌落計數法
當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器，然後將將膜轉到相應的培養基上進行培養，對形成的菌落進行統計。
(3)厭氧菌的菌落計數法
一般可用亨蓋特滾管培養法進行。此法設備較復雜，技術難度很高。
簡便快速的半固體深層瓊脂法，可測定雙歧桿菌(bifidobacteria)和乳酸菌
(lactic
acid
bacteria)等厭氧菌活菌數。
原理:
試管中的深層半固體瓊脂有良好的厭氧性能，並利用其凝固前
可作稀釋用，凝固後又可代替瓊脂平板作菌落計數用的良好性能。
兼有省工、省料、省設備和菌落易辯認等優點!

E. 高中生物幾個計數法。

高中生物有5個計數法。

1、取樣器取樣法

取樣器取樣法是用來調查土壤小動物的種類時的取樣方法； 取樣器取樣法適用於小型動物，如蚯蚓等；樣方法適用於植物和活動力弱的動物。

2、目測估計法和記名統計法

目測估計法和記名統計法是調查土壤小動物的時候具體計數的方法，記名統計法更准確，目測估計法模糊。

3、顯微計數法

顯微計數法是在顯微鏡下觀察並計算某種微生物的數量的方法。

4、稀釋塗布平板法

稀釋塗布平板法是用稀釋後，在培養基上形成菌落的方法來計算細菌等微生物的數量的方法。

細胞計數法的用途：

細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法，一般利用計數板(血球計數板)進行。

既可用於分離細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，也可用於對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何，均需制備分散的細胞懸液。

F. 微生物的數量如何計算

現在用的多的就是這幾種，樓主挑著看吧

細菌計數1.計數器測定法：
即用血細胞計數器進行計數。取一定體積的樣品細胞懸液置於血細胞計數器的計數室內，用顯微鏡觀察計數。由於計數室的容積是一定的(O.1mm3)，因而根據計數器刻度內的細菌數，可計算樣品中的含菌數。本法簡便易行，可立即得出結果。
本法不僅適於細菌計數，也適用於酵母菌及黴菌孢子計數。
2、電子計數器計數法:
電子計數器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個細胞，當一個細胞通過這個小孔時，電阻明顯增加，形成一個脈沖，自動記錄在電子記錄裝置上。
該法測定結果較准確，但它只識別宴含桐顆粒大小，而不能區分是否為細菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。
3、活細胞計數法
常用的有平板菌落計數法，是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然後將定量的稀釋液進行平板培養，根據培養出的菌落數，可算出培養物中的活菌數。此法靈敏度高，是一種檢測污染活菌數的方法，也是目前國際上許多國家所採用的方法。使用該法應注意：①一般選取菌落數在30～300之間的平板進行計數，過多或過少均不準確；②為了防止菌落蔓延，影響計數，可在培養基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用於形成菌落的微生物。
廣泛應用於水、牛奶、食物、葯品等各種材料的細菌檢驗，是最常用的活菌計數法。
4、比濁老枯法
比濁法是根據菌懸液的透光量間接地測定細菌的數量。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內與透光度成反晌坦比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計測定菌液，用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。
此法簡便快捷，但只能檢測含有大量細菌的懸浮液，得出相對的細菌數目，對顏色太深的樣品，不能用此法測定。
5、測定細胞重量法
此法分為濕重法和乾重法。濕重法系單位體積培養物經離心後將濕菌體進行稱重；乾重法系單位體積培養物經離心後，以清水洗凈放人乾燥器加熱烘乾，使之失去水分然後稱重。
此法適於菌體濃度較高的樣品，是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。
6、測定細胞總氮量或總碳量
氮、碳是細胞的主要成分，含量較穩定，測定氮、碳的含量可以推知細胞的質量。此法適於細胞濃度較高的樣品。
7、顏色改變單位法（colour change unit,簡稱CCU）
這種方法通常用於很小，用一般的比濁法無法計數的微生物，比如支原體等，因為支原體的液體培養物是完全透明的，呈現為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計數，由於支原體固體培養很困難，用cfu法也不容易計數，因此需要用特殊的計數方法，即CCU法。它是以微生物在培養基中的代謝活力為指標，來計數微生物的相對含量的，下面以解脲脲原體為例單介紹其操作：，簡
（1）取12隻無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養基。
（2）在第一管加入0.2ml待測解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2ml加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到最末一管
（3）於37度培養，以培養基顏色改變的最末一管作為待測菌液的CCU，也就是支原體的最大代謝活力，比如第六管出現顏色改變，他的相對濃度就是10的6次方CCU/ml.
一般來說，比濁法和菌落計數法就可以滿足絕大多數細菌的計數，但是對支原體這樣比較特殊的微生物，用CCU法比較合適。

G. 試述微生物活菌計數方法有哪幾種

v常用測定微生物生長的方法有：1)稱乾重法。可用離心法或過濾法測定。優點：可適用於一切微生物，缺點：無法區別死菌和活菌。2)比濁法。原理：由於微生物在液體培養時，原生質的增加導致混濁度的增加，可用分光光度計測定。優點：比較准確。3)測含氮量，大多數微生物的含氮量占乾重的比例較一致，根據含氮量再乘以6.25即可測得其粗蛋白的含量。4)血球計數板法。優點：簡便、快速、直觀。缺點：結果包括死菌和活菌。5)液體稀釋法。對未知菌樣作連續的10倍系列稀釋，經培養後，記錄每個稀釋度出現生長的試管數，然後查MPN表，再根據樣品的稀釋倍數就可計算其中的活菌含量。優點：可計算活菌數，較准確。缺點：比較繁瑣。6)平板菌落計數法。取一定體積的稀釋菌液塗布在合適的固體培養基，經培養後計算原菌液的含菌數。優點，可以獲得活菌的信息。缺點：操作繁瑣，需要培養一定時間才能獲得，測定結果受多種因素的影響。

H. 微生物計數方法有哪些我想知道詳細的操作步驟

微生物的顯微直接計數法

一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法，掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤（Petrof Hausser）細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數區（圖21-1），計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後，計數區的高度為0.1mm，所以每個計數區的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時，先要測定每個小方格中微生物的數量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數量。
已知：1mm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以：1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格，即系數K=4×106 。
因此：每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數（N）×系數（K）×菌液稀釋倍數（d）
三、實驗器材
1．活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培養液。
2．器材：顯微鏡、血球計數板、蓋玻片（22mm×22mm）、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實驗方法
1．視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋到10-2），以每小格的菌數可數為度。
2．取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3．將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上，不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。4．靜置片刻，將血球計數板置載物台上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。
5．計數時若計數區是由16個大方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數。如果是25個大方格組成的計數區，除數上述四個大方格外，還需數中央l個大方格的菌數（即80個小格）。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。
6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2—3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），求出每一個小格中細胞平均數（N），按公式計算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。
五、實驗作業：
將實驗結果填入下表中：
計數次數 每個大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次

I. 微生物檢驗菌落總數計算方法

微生物檢驗菌落總數計算方法有以下兩種。

返困知第一種:

只有一個稀尺盯釋度平板時菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數。漏消

第二種:

有兩個連續稀釋度的平板菌落在適宜技術范圍內，樣品中菌落數等於平板菌落數之和除以第一稀釋度平板個數加上第二稀釋度平板個數之和，再乘以稀釋因子。

J. 微生物計數方法有哪些

測定微生物計數的方法有很多,主要有以下幾種：
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數.
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數.
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數.
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確.
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.