大腸菌群平板計數方法視頻

❶ 大腸菌群的計數法應該怎麼挑選可疑菌落

大腸菌群平板計數的報告
經最後證實為大腸菌群陽性的試碧模管比例乘以8.3中計數的平板菌落數，再乘以稀釋倍數，即為每g（mL）樣品中大腸菌群數。例：10-4樣品臘慧盯稀釋液1 mL，在VRBA平板上有100個典輪和型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數為：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。

❷ 檢驗食品中的大腸菌群需要注意的實驗步驟有哪些

食品微生物學檢驗 大腸菌群計數：大腸菌群平板計數法（GB 4789.3-2010）
一 試劑和儀器
煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB肉湯）
結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）
恆溫培養箱
自動稀釋儀
均質器
振盪器
二 樣品處理
固體樣品應在無菌條件下充分粉碎。本次演示以乳粉為例，取密封狀態良好的試樣，備用待測。
三 檢測過程
實驗前准備
進入無菌操作室前應更換無菌實驗服，戴帽子、口罩、無菌手套。進入無菌操作室後，首先用鑷子夾取適量酒精棉全面擦拭雙手，然後才能進行實驗操作。
酒精易燃，因此在擦拭雙手的過程中應離開酒精燈火焰一定距離，防止出現危險，待手上的酒精揮發完全後，再進行實驗操作。
樣品的稀釋
取一潔凈無菌均質袋於自動稀釋儀上，用酒精棉充分擦拭樣品袋，將剪刀置於酒精燈外焰上充分灼燒，小心剪開樣品袋。將稱樣勺於酒精燈外焰灼燒片刻，准確稱取25g樣品於無菌均質袋中。用酒精燈外焰灼燒注水口片刻，在盛有樣品的均質袋中注入225mL無菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液。取下均質袋，將均質袋放入拍擊式均質器中，用均質器拍打1min～2min，製成1:10的樣品勻液。
注意：樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時可用1 mol/L無菌氫氧化鈉或1mol/L無菌鹽酸溶液調節。
均質完畢後，做好標記，將均質袋置於樣品框中。
在裝有9mL生理鹽水的無菌試管上做好標記，用1mL無菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入裝有9mL生理鹽水的無菌試管中，稀釋前後試管口都應在酒精燈上灼燒片刻。加塞後於振盪器上混合均勻，製成1:100的樣品勻液。同理，按上述操作，依次製成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。稀釋樣品時，注意吸管或吸頭尖端不得觸及稀釋液面；每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管或吸頭。
接種及培養
在事先經滅菌處理的培養皿底部做好標記。根據對樣品污染狀況的估計，選取2～3個適宜的連續稀釋度。本次演示只做1:10和1:100的樣品稀釋液。
用無菌吸管吸取1:10樣品稀釋液1mL，加入到培養皿中，備用。同理，加入1:100稀釋液和空白液。注意，每個稀釋度應接種2個無菌培養皿，空白液即為以1mL生理鹽水代替1mL樣品稀釋液。
加完樣品梯度稀釋液後，即可傾倒培養基。傾倒前應將錐形瓶的瓶口在酒精燈上充分灼燒。灼燒後及時傾注15mL～20mL結晶紫中性紅膽鹽瓊脂於每個培養皿中，小心旋轉培養皿，將培養基與樣液充分混勻。傾注培養基時應將錐形瓶口盡量伸入培養皿內，防止傾倒時培養基掛在培養皿的內壁或外壁上，且傾倒過程應果斷，防止培養基沿錐形瓶外壁流出、滴落。培養基的溫度以46℃為宜，不能過高或過低，溫度過高不利於操作且對菌體有害，溫度過低培養基迅速凝固，菌體不能在培養皿內均勻的分布，導致菌落計數困難。轉動培養基時用力須均勻，防止培養基沾到培養皿上蓋或灑出。
倒完培養基後，靜置培養皿，等待培養基冷卻凝固。
待培養基凝固後，再加3mL～4mL 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂覆蓋平板表層。加兩次培養基的主要目的是：使菌體均在培養基內部生長，以便於觀察典型菌落形態。等待培養基冷卻凝固。待培養基凝固後，翻轉平板，置於培養箱中於36℃±1℃條件下培養18h～24h。
平板菌落計數
選取菌落數在15CFU～150CFU之間的平板，分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落，其中典型菌落的特徵為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉澱環，菌落直徑為0.5mm或更大。
證實實驗
先在煌綠乳糖膽鹽肉湯管上做好標注。將接種環置於紅外滅菌器中滅菌，再用接種環從結晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種於煌綠乳糖膽鹽肉湯管內，振搖均勻。每次接種後都應及時將接種環在滅菌器中滅菌。將接種完的煌綠乳糖膽鹽肉湯管置於培養箱中，於36℃±1℃條件下培養24h～48h。培養完畢後，觀察煌綠乳糖膽鹽肉湯管中產氣情況。凡管內倒管有氣泡者，即可報告為大腸菌群陽性。

❸ 大腸菌群平板計數法怎麼做

用無菌吸管吸取稀釋度樣品1 mL，然後將其放入無菌培養皿中，再加入溫度於 45℃下的CDLJ JD 顯色培養基中10 mL的量，並進行培養皿中溶液均勻混合，可以通過快速轉動培養皿的方式，等溶液凝固以後，加入5 mL左右 ，使其均勻覆蓋平板表面，凝固後翻轉培養基，在37℃培養24h左右。

然後觀察其形態，顏色等變化。除此之外，平行設置兩個稀釋度培養基，步驟是先稀釋樣本，通過稀釋後，微生物可以分散為單個細胞，然後進行一定環境條件下培養，直野哪到其長成菌落為止，然後進行計算大腸桿菌的數量，通過稀釋度和樣本數量進行計算

平板計數法操作簡便，較適用於菌體大小和質量都相近的類群，如細菌、酵母菌等的計數。但它只能測定那些可培養的微生物，脊清而且干擾因素很多，且採用櫻脊前的培養基或培養條件有選擇性，難以平等地區分所有的微生物。

(3)大腸菌群平板計數方法視頻擴展閱讀：

發酵法檢測大腸桿菌；可以進行統計學估計原來樣品中的菌落。主要步驟包括發酵、分離培養、二次發酵、顯微鏡觀察等，要點有：

1、在44.5℃下的培養基上進行大腸桿菌的培養，該培養基含有熒光底物，需要培養 24 h。

2、對熒光底物進行釋放，需要採用葡萄糖醛酸進行，讓培養基能夠在紫外光的照射下發出熒光。

❹ 大腸桿菌檢測方法國標是用什麼方法檢測的

大腸桿菌檢測方法分為三種：

1、細菌分離鑒定法

分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液先經肉湯增菌，然後轉種血瓊脂平板。其他標本同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。

37℃孵育18～24小時後，觀察菌落塗片染色鏡檢。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要的時候檢定腸黴毒素。

2、衛生細菌學檢查法

大腸桿菌會不斷隨糞便排出體外，污染周圍環境水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，則表示樣品被糞便污染的越嚴重，表明樣品中存在腸道致病菌的可能性也就越大。

大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群，瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。

3、全自動微生物定量分析儀（TEMPO）檢測法

全自動微生物定量分析（TEMPO）儀大腸桿菌群計數檢測有TEMPOTC和TEMPOCC兩種方法。

TEMPOTC的開發是為獲得NF ISO4832標准相當性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群方法。

(4)大腸菌群平板計數方法視頻擴展閱讀：

大腸桿菌在生物技術中的應用

這些菌株由於失去了細胞壁等重要組分，所以在自然條件下已無法生長。甚至普通的清潔劑都可以輕易地殺滅這類菌株。即便由於操作不慎導致活菌從實驗室流出，也不易導致生化危機。

生物工程用的菌株基因組都被優化過，使之帶有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用於分子克隆實驗。

真核基因在大腸桿菌中表達，必須有合適的表達載體(Vector),常用載體：pBV220,pET系統。

目的基因在大腸桿菌中表達的情況：

大腸桿菌更適合原核基因的表達，外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的，外源基因拷貝數和表達 產物產量之間存在動態平衡，單個細胞的產量又與外源基因拷貝數，基因表達效率，表達產物的穩定性和細胞代謝負荷等因素有關。

❺ 微生物檢驗中飲料的大腸菌群平板計數法具體操作步驟是怎樣的

兩個平板總共挑選10個典型菌落或者是可疑菌落（是五五分還是四六分這個全憑你心情了），有的菌落長的在10個以下的就有幾個接種幾管就OK了。
每次接種前將典型和可疑菌落分類，哪個多就多接種幾管，少的就少接種幾管，每個樣品只需選15-150菌落間的稀釋度接種BGLB管。
接種的目的是看是否產氣且是否有大腸。

❻ 大腸菌群平板計數法,懂得進.!

先悉斗放襲陸埋肉湯，
不用事先滅菌
要用棉塞
121℃15分鍾
接種拍螞棒
蘸取到肉湯里涮一涮
注意每次都要滅菌接種棒
最後一個問題要說具體點，
希望你滿意！簡潔明了！

❼ 食品衛生微生物學檢驗.大腸菌數測定

微生物
一、大腸菌群的檢測GB4789.3-2010
第一法 大腸物寬察菌群MPN計數法 第二法 大腸菌群平板計數法

1.1月桂基硫酸鹽胰蛋白腖（LST）肉湯:稱取35.6g溶於1000ml蒸巧拆餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，121℃高壓滅菌15min後備用。雙料除蒸餾水外其他成分加倍。

1.2煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯：稱取30g溶於1000ml蒸餾水中分裝 ，經115℃15min高壓滅菌備用。

1.3無菌生理鹽水：稱取8.5gNaCl溶於1L蒸餾水中。分裝於250ml的錐形瓶中，121℃高壓滅菌15min後備用
1.4結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）：稱取41.6g溶於1L蒸餾水中，充分搖勻，加熱煮沸2min冷卻至50℃，傾注平板。

無菌 1 mol/L NaOH：稱取40 g氫氧化鈉溶於1 000 mL蒸餾水中，121 ℃高壓滅菌15 min。

無菌 1 mol/L HCl：移取濃鹽酸90 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。

二、大腸菌群的檢測GB4789.3-2003 第一法 大腸菌群MPN計數法

2.1稱取乳糖膽鹽發酵培養基35.0g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，115℃高壓滅菌15min後備用。雙料除蒸餾水外其他成分加倍。

2.2伊紅美藍瓊脂平板：稱取伊紅美藍瓊脂37.5g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝、115℃高壓滅菌15min後備用。

2.3乳糖發酵管：稱取乳糖發酵培養基35.0g溶於1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝於有倒立發酵管的試管中，每管10ml，115℃高壓滅菌15min後備用

2.4無菌生理鹽水：稱取8.5gNaCl溶於1L蒸餾水中。分裝於250ml的錐形瓶中，121℃高壓滅菌15min後備用
2.5革蘭氏染色按GB/T4789-2003中罩茄2規定。

❽ 食品中大腸桿菌的檢測

用大腸桿菌顯色培養基，檢測原理：蛋白腖和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;十二烷基硫酸鈉抑製革蘭氏陽性菌;混合顯色底物分別與大腸菌群和大腸桿菌所對應的酶發生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上大腸菌群產生橙紅色的菌落，大腸桿菌產生藍綠色的菌落。
資料出自環凱官網。

❾ 大腸菌群平板計數法怎麼計數

一個菌落就是一個大腸菌群繁殖來的，所以只要亂陵算菌落數就行
大腸埃希氏菌（Escherichia coli）通常被稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發現的，在相當長的一段時間內，一直被當作正常腸道菌群的組成部分，認為是非致病菌。直到遲陪肆20世紀中葉，才認識到一些特殊血清型的大腸桿菌對人和動物有病原性，尤其對嬰兒和幼畜（禽），常引起嚴重腹瀉和敗血症，它是一種普通的原核生物，根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為6類：腸致病性大腸桿菌（EPEC）、腸產毒性大腸桿菌（ETEC）、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）、腸出血性大腸桿菌（EHEC）、腸碼轎黏附性大腸桿菌（EAEC）和彌散粘附性大腸桿菌(DAEC).。大腸桿菌屬於革蘭氏陰性細菌（G-）。