製作培養基的計算方法

1. 配製培養基的步驟

1、配製溶液

向容器內加入所需水量的一部分，按照培養基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最後補足所需水分。對蛋白腖、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發的水分，應在全部原料溶解後加水補足。

配製固體培養基時，先將上述已配好的液體培養基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續加熱至完全融化。並不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

2、調節pH值 

用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。

3、過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時，最好折疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏鬥上過濾。

4、分裝

已過濾的培養基應進行分裝。如果要製作斜面培養基，須將培養基分裝於試管中。如果要製作平板培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝於錐形瓶內。

分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養基流出，另一隻手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養基。分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。

裝入試管的培養基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定。一般製作斜面培養基時，每隻15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度），如製作深層培養基，每隻20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每隻錐形瓶裝入的培養基，一般以其容積的一半為宜。

5、加棉塞 

分裝完畢後，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。棉塞應採用普通新鮮、乾燥的棉花製作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。

製作棉塞時，要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞。

棉塞作成後，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼內壁不留縫隙，以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松，塞好後，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內，上端露出少許棉花便於拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，准備滅菌。

6、製作斜面培養基和平板培養基

培養基滅菌後，如製作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。

(1)製作斜面培養基。在實驗台上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內培養基自然傾斜，凝固後即成斜面培養基。

(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗台上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養皿蓋，右手迅速將培養基倒入培養皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。

鋪放培養基後放置15分鍾左右，待培養基凝固後，再5個培養皿一疊，倒置過來，平放在恆溫箱里，24小時後檢查，如培養基未長雜菌，即可用來培養微生物。

2. 培養基怎麼配置

（1）配製母液。把培養基m的必需元素按原配方量的50倍/100倍或1000倍稱量後製成一種濃溶液，這種濃溶液叫母液在配製培養基時按比例分別量取母液稀釋到所需的濃度即可母液配好後貼上標簽，放在0～4℃的冰箱中可使用半年到1年，這樣傲可節省許多時間可能產生化學反應的或溶解後產生沉澱的不能放在同一個容器m配製母液要用重蒸餾水葯物要使用分析純或等級較高的化學純葯物的稱量和葯液的定容都要准確。

母液①：硫酸鎂18.5克．硝酸銨82.5克．硝酸鉀95.0克；加水定容到1000毫升，濃度為培養基的50倍，配1升培養基時量取20毫升母液

母液②：氯化鈣22.0克加水定容到500毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液

母液③：磷酸二氫鉀8.5克加水定容到500毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液。

母液④；乙二胺四乙酸二鈉3.73克硫酸亞鐵2.78克，加水定容到1000毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液

母液⑤：硼酸620毫克，硫酸錳2230毫克，硫酸鋅860毫克，硫酸銅2.5毫克，碘化鉀83毫克，鉬酸鈉25毫克，氯化鈷2.5毫克，加水定容到1000毫升，濃度為培養基的100信，配1升培養基時量取10毫升母液。

母液⑥：肌醇5克，甘氨酸100毫克，煙酸25毫克，鹽酸吡哆醇25毫克，鹽酸硫胺素5毫克，加水定容到500毫升，濃度為培養基的100倍，配1升培養基時量取10毫升母液

（2）配製培養基。配製每1000毫升培養基．稱取6～10克瓊：脂作凝固劑，具體按配方要求稱量，放在水浴鍋上慢慢溶解，先在量筒內放入一定量的水，按照母液順序和規定量，量取母液，當母液加完後，根據需要每升培養基再加入生長調節物質如吲哚乙酸或萘乙酸等，細胞分裂素類0.04～10毫克，細胞分裂素應用最多的是6-苄基腺嘌呤，加完後倒入已熔化的瓊脂中，每1000毫升培養基加入蔗糖30克或根據要求確定，定容到所需的體積，繼續加溫，直到瓊脂完全熔解，用鹽酸或氫氧化鈉對培養基的pH進行調節，多數培養基的pH在5．4～6.0，MS培養基的pH為5.7。

將配好的培養基趁熱倒入培養容器中，培養基占容器體積的1／4～1／3不要將培養基沾到容器壁上，否則容易被雜菌感染，然後及時加蓋，進行高壓滅菌，滅菌時要按高壓滅菌鍋的操作規程使用．在121℃、壓力111千帕下維持15～20分鍾，溫度和時間都要嚴格控制，到時間後立即切斷電源，當高壓鍋內壓力降到常壓後，開啟放氣閥，打開鍋蓋，取出滅菌好的培養基，放在接種室中培養3天，沒被感染後才能用來組織培養

3. 牛肉膏蛋白腖固體培養基的配置稱量計算公式是什麼

（1）制備牛肉膏蛋白腖固體培養基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、調pH、滅菌、倒平板；
（2）培養基滅菌的常用方法是高壓蒸汽滅菌，要證明所用培養基已經徹底滅菌只需對未接種的培養基進行培養，如無菌落出現，則證明培養基滅菌徹底．
（3）分解纖維素的微生物的基本過程如下：土壤取樣→選擇培養→梯度稀釋→將樣品塗布到鑒別纖維素分解菌的培養基上→挑選產生透明圈的菌落，其中選擇培養的目的是增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需的微生物，選擇培養所用的培養基中唯一的碳源是纖維素，別纖維素分解菌的培養基中需要加入的特殊物質是剛果紅，該物質能夠與纖維素反應生成紅色復合物，如果某個菌落的周圍出現了透明圈，說明該種微生物能夠產生纖維素酶，能夠分解纖維素．
（4）為測定哪些菌落屬於大腸桿菌，可選用伊紅美藍培養基對該菌落進行鑒定，大腸桿菌的菌落在該培養基上呈現黑色．
故答案為：
（1）溶化
倒平板
（2）高壓蒸汽滅菌
對未接種的培養基進行培養，如無菌落出現，則證明培養基滅菌徹底
（3）增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需的微生物
纖維素
剛果紅
紅色復合物
產生纖維素酶，能夠分解纖維素
（4）伊紅美藍
黑色

4. MS固體培養基的製作流程

一、實驗所需的儀器設備和用具。

二、實驗安排與要求：將全班若干小組（6-7人），每小組配製500 mlMS固體培養基，

三、邊示範邊講解實驗方法和步驟

1、計算並填寫培養基成分單

計算公式：∨母液＝∨配製÷母液倍數

∨激素＝∨配製×培養基中所要求的激素濃度÷激素母液濃度

2. 每組取500ml的燒杯一隻，加300ml蒸餾水，用天平稱4g瓊脂放入蒸餾水中，在電爐上加熱溶解。稱15g蔗糖放入溶解的瓊脂中。

3. 按配方取出各種母液，放入到溶解後的瓊脂和蔗糖溶液中，用玻璃棒攪動混合，並加蒸餾水定容至500ml。

4. 用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL將PH值調至5.8，可用PH精密試紙或酸度計測定。

5. 用培養基分裝用具將500ml的培養基分注於15個所選用的培養瓶中。

6. 用封口膜、棉塞或其它封口物包紮瓶口，並做好標記。

7. 把分裝好的培養基及所需滅菌的各種用具、蒸餾水等，放入高壓滅菌鍋的消毒桶內，將外層鍋內加水至水位線。蓋好鍋蓋，上好螺絲，接通電源升溫。待鍋內溫度達100。C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右時，打開排氣閥排凈鍋內冷空氣，然後關閉排氣閥，繼續加熱至溫度達到121。C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）時，維持20~30min即可切斷電源，讓鍋內氣壓自然下降，當壓力降到零點後，打開排氣閥，排出剩餘蒸汽，再打開鍋蓋取出培養基及滅菌物品。

8. 培養基及滅菌物品在室溫下自然冷卻後，存放於陰涼乾燥潔凈處待用。

四、總結高壓蒸汽滅菌的原理和一般操作步驟實驗

5. 培養基配比計算

50克香蕉泥放入一升培養基中,香蕉泥的質量百分百為50/1050,雖然培養基有多種成分,但主要是水,可以培養基的密度和水一致,即1千克/升.如果你的培養基規定香蕉泥含量為10%,那麼你就應該稱100克香蕉泥放入培養基中並定容至一升.粗略配製時可以不用定容,直接取100克香蕉泥和1升培養基混合即可.

6. MS固體培養基的製作流程

一、實驗所需的儀器設備和用具.
二、實驗安排與要求：將全班若干小組（6-7人）,每小組配製500 mlMS固體培養基,
三、邊示範邊講解實驗方法和步驟
1、計算並填寫培養基成分單
計算公式：∨母液＝∨配製÷母液倍數
∨激素＝∨配製×培養基中所要求的激素濃度÷激素母液濃度
2.每組取500ml的燒杯一隻,加300ml蒸餾水,用天平稱4g瓊脂放入蒸餾水中,在電爐上加熱溶解.稱15g蔗糖放入溶解的瓊脂中.
3.按配方取出各種母液,放入到溶解後的瓊脂和蔗糖溶液中,用玻璃棒攪動混合,並加蒸餾水定容至500ml.
4.用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL將PH值調至5.8,可用PH精密試紙或酸度計測定.
5.用培養基分裝用具將500ml的培養基分注於15個所選用的培養瓶中.
6.用封口膜、棉塞或其它封口物包紮瓶口,並做好標記.
7.把分裝好的培養基及所需滅菌的各種用具、蒸餾水等,放入高壓滅菌鍋的消毒桶內,將外層鍋內加水至水位線.蓋好鍋蓋,上好螺絲,接通電源升溫.待鍋內溫度達100.C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右時,打開排氣閥排凈鍋內冷空氣,然後關閉排氣閥,繼續加熱至溫度達到121.C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）時,維持20~30min即可切斷電源,讓鍋內氣壓自然下降,當壓力降到零點後,打開排氣閥,排出剩餘蒸汽,再打開鍋蓋取出培養基及滅菌物品.
8.培養基及滅菌物品在室溫下自然冷卻後,存放於陰涼乾燥潔凈處待用.
四、總結高壓蒸汽滅菌的原理和一般操作步驟實驗

7. 培養基的配置：吸取量mL=培養基中物質的含量(mg/L)*1000mL/母液濃度(mg/L),為什麼要乘以1000mL

我看這個公式里單位有點錯誤，應為：
吸取量mL=培養基中物質的含量(mg)*（1000mL/L）/母液濃度(mg/L)。
培養基中物質的含量(mg)/母液濃度(mg/L)，得出為所需母液的體積，但單位是升，而所求為毫升，所以再將升轉化為毫升，就再乘以（1000mL/L）。

8. 培養基的配製方法 培養基的配製方法是什麼

1、配製用水

培養基的大部分是水，所以水的質量直接影響培養基的質量。按Waymouth標准，水的電阻應為200萬歐姆，一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的

雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

2、培養基

培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基，以雙蒸或三蒸水配製。NaHCO3（或HCl）調pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠低於6.8，則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。

3、血清

培養中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鍾滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配製時含量視培養細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由於血清成分復雜、條件不易控制，可選用無血清培養基。

4、抗菌素

為防止培養時期細菌的污染，可在培養基中添加適當抗菌素，一般用量與組織細胞培養相同：卡那黴素100單位/毫升，或雙抗--青黴素100單位/毫升，鏈黴素100微克/毫升。

5、植物血凝素（PHA）

非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。

經實驗測定其分裂高峰分別於培養後44-48小時和68-72小時。

PHA有粘多糖，蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質起凝集作用。PHA激活的細胞數隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均

被激活為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般採用4%濃度為好。

9. 培養基制備有幾個主要步驟

培養基制備的四個主要步驟：
1、計算：根據培養基配方的比例，計算各種成分的用量；
2、稱量：准確稱取各種成分；
3、溶化：將各種成分加入燒杯，加熱，用玻璃棒攪拌溶解，加入瓊脂使其熔化後，補加水至一定量；
4、調節PH值。

10. 培養基的配製

培養基的配製：

1、稱量和熬煮

按培養基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。

2、加熱溶解

把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g(提前搞碎)，然後放在石棉網上，小火加熱，並用玻棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂完全溶解後，再補充水分至所需量。

3、分裝

按實訓要求，將配製的培養基分裝入試管或500ml三角瓶內。分裝時可用三角漏斗以免使培養基沾在管口或瓶口上造成污染。

4、加棉塞

培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等)，以阻止外界微生物進入培養基內造成污染，並保證有良好的通氣性能。

5、包紮

加塞後，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋紮好，用記號筆註明培養基名稱、組別、配製日期。

培養基配製注意事項：

1、培養基經滅菌後，必須放在37C溫箱培養24h，無菌生長者方可使用。

2、PDA培養基一般不需要調pH。對於要調節pH的培養基，一般用pH試紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏鹼時，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調節。

3、調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過鹼破壞培養基成分。

4、培養基在使用時也可以做成不含瓊脂的液體培養基，用於菌類的震盪培養。

5、培養基也可以加入氯黴素或土黴素，加入量為0.2g/L培養基，主要是為了抑制細菌的生長，減少干擾性。

(10)製作培養基的計算方法擴展閱讀

培養基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配製而成的營養基質。

一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。

培養基種類很多，根據配製原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基。

根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基；根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等。

根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基、真菌培養基等。培養基配成後一般需測試並調節pH，還須進行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。

培養基由於富含營養物質，易被污染或變質。配好後不宜久置，最好現配現用。