測蛋白濃度電腦使用方法

A. 國家標准檢測蛋白質含量測定方法

蛋白質含量測定方法就是檢測N元素的含量，像三聚氰胺的問題，就是通過增加N的含量使「蛋白質」含量提高的。

國家標准檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法，食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解，導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫，硼酸吸收，用硫酸或鹽酸標准滴定溶液滴定，根據酸耗計算氮含量，再乘以轉化系數，即蛋白質含量。

具體操作步驟如下：

1.樣品處理

精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品（約30-40mg氮當量）。將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中，加入0.2克硫酸銅，6克硫酸鉀和20毫升硫酸，輕輕搖動，在瓶口放置一個小漏斗，將瓶子傾斜石棉網上有45度角，有小孔。

加熱小火後，內容物碳化，泡沫完全停止，加強火力，保持瓶內液體稍微沸騰，直至液體呈藍綠色澄清透明，然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻，小心加入20毫升水，冷卻，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗凈氮氣瓶，洗凈液放入容量瓶中，然後用水沖洗至刻度，混勻備用。

取相同量的硫酸銅，硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而，這種方法很危險，很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器，可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。它更安全，更可操作。

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除了凱氏定氮法以外，標準的測量方法還有：

• 分光光度法

食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解，分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，在pH4.8的乙酸鈉-乙酸緩沖溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值，與標准系列比較定量,結果乘以換算系數，即為蛋白質含量。

• 燃燒法

樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中，產生混合氣體。 諸如碳，硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收，氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器（TCD）檢測。

B. 如何測定蛋白濃度

常用紫外分光光度法測定蛋白質含量.
以下引用：
6種方法測定蛋白質含量
一、微量凱氏（kjeldahl）定氮法
樣品與濃硫酸共熱.含氮有機物即分解產生氨（消化）,氨又與硫酸作用,變成硫酸氨.經強鹼鹼化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量.若以甘氨酸為例,其反應式如下：
nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)
2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)
(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)
反應（1）、(2)在凱氏瓶內完成,反應（3）在凱氏蒸餾裝置中進行.
為了加速消化,可以加入cuso4作催化劑,k2so4以提高溶液的沸點.收集氨可用硼酸溶液,滴定則用強酸.實驗和計算方法這里從略.
計算所得結果為樣品總氮量,如欲求得 樣品中蛋白含量,應將總氮量減去非蛋白
氮即得.如欲進一步求得樣品中蛋白質的含量,即用樣品中蛋白氮乘以6．25即得.
二、雙縮脲法（biuret法）
（一）實驗原理
雙縮脲（nh3conhconh3）是兩個分子脲經180℃左右加熱,放出一個分子氨後得到的產物.在強鹼性溶液中,雙縮脲與cuso4形成紫色絡合物,稱為雙縮脲反應.凡具有兩個醯胺基或兩個直接連接的肽鍵,或能過一個中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應.
紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量.測定范圍為1-10mg蛋白質.干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等.
此法的優點是較快速 ,不同的蛋白質產生顏色的深淺相近,以及干擾物質少.主要的缺點是靈敏度差.因此雙縮脲法常用於需要快速,但並不需要十分精確的蛋白質測定.

C. 怎麼用NanoDrop檢測蛋白濃度

nano測的不太準的，建議你還是用2100測一下，每種測序儀都有一個上機濃度要求，只要可以達到這個要求就能進行高通量測序了。

D. qubit可以用於蛋白濃度測定嗎

qubit可以用於蛋白濃度測定
常用紫外分光光度法測定蛋白質含量。
以下引用：

6種方法測定蛋白質含量
一、微量凱氏（kjeldahl）定氮法
樣品與濃硫酸共熱。含氮有機物即分解產生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經強鹼鹼化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例，其反應式如下：
nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)
2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)
(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)
反應（1）、(2)在凱氏瓶內完成，反應（3）在凱氏蒸餾裝置中進行。
為了加速消化，可以加入cuso4作催化劑，k2so4以提高溶液的沸點。收集氨可用硼酸溶液，滴定則用強酸。實驗和計算方法這里從略。
計算所得結果為樣品總氮量，如欲求得 樣品中蛋白含量，應將總氮量減去非蛋白
氮即得。如欲進一步求得樣品中蛋白質的含量，即用樣品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、雙縮脲法（biuret法）
（一）實驗原理
雙縮脲（nh3conhconh3）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與cuso4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。
紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。測定范圍為1-10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等。
此法的優點是較快速 ，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及干擾物質少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。
（二）試劑與器材
1. 試劑：
（1）標准蛋白質溶液：用標準的結晶牛血清清蛋白（bsa）或標准酪蛋白，配製成10mg/ml的標准蛋白溶液，可用bsa濃度1mg/ml的a280為0.66來校正其純度。如有需要，標准蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計算出其純度，再根據其純度，稱量配製成標准蛋白質溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配製，酪蛋白用0．05n naoh配製。
（2）雙縮脲試劑：稱以1.50克硫酸銅（cuso4•5h2o）和6.0克酒石酸鉀鈉（knac4h4o6•4h2o），用500毫升水溶解，在攪拌下加入300毫升10% naoh溶液，用水稀釋到1升，貯存於塑料瓶中（或內壁塗以石蠟的瓶中）。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉澱出現，則需要重新配製。
2. 器材：
可見光分光光度計、大試管15支、旋渦混合器等。
（三）操作方法
1. 標准曲線的測定：取12支試管分兩組，分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的標准蛋白質溶液，用水補足到1毫升，然後加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻後，在室溫（20～25℃）下放置30分鍾，於540nm處進行比色測定。用未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值，以蛋白質的含量為橫座標，光吸收值為縱座標繪制標准曲線。
2、樣品的測定：取2～3個試管，用上述同樣的方法，測定未知樣品的蛋白質濃度。注意樣品濃度不要超過10mg/ml。

三、folin—酚試劑法（lowry法）
（一）實驗原理
這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法，由於其試劑乙的配製較為困難（現在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深蘭色的原因是：在鹼性條件下，蛋白質中的肽鍵與銅結合生成復合物。folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。
folin—酚試劑法最早由lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以後在生物化學領域得到廣泛的應用。這個測定法的優點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時間較長，要精確控制操作時間，標准曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質較多。對雙縮脲反應發生干擾的離子，同樣容易干擾lowry反應。而且對後者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素（0.5%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液對顯色無影響，但這些物質濃度高時，必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉—氫氧化鈉溶液，即可顯色測定。若樣品酸度較高，顯色後會色淺，則必須提高碳酸鈉—氫氧化鈉溶液的濃度1～2倍。
進行測定時，加folin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性ph條件下穩定，但上述還原反應只在ph=10的情況下發生，故當folin一酚試劑加到鹼性的銅—蛋白質溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應即能發生。
此法也適用於酪氨酸和色氨酸的定量測定。
此法可檢測的最低蛋白質量達5mg。通常測定范圍是20~250mg。
（二）試劑與器材
1.試劑
（1）試劑甲：
（a）10克 na2co3，2克 naoh和0.25克酒石酸鉀鈉 （knac4h4o6•4h2o）。溶解於500毫升蒸餾水中。
（b）0.5克硫酸銅（cuso4•5h2o）溶解於100毫升蒸餾水中，每次使用前，將50份（a）與1份（b）混合，即為試劑甲。
（2）試劑乙：在2升磨口迴流瓶中，加入100克鎢酸鈉（na2wo4•2h2o）,25克鉬酸鈉（na2moo4•2h2o）及700毫升蒸餾水，再加50毫升85%磷酸，100毫升濃鹽酸，充分混合，接上迴流管，以小火迴流10小時，迴流結束時，加入150克硫 酸 鋰（li2so4），50毫升蒸餾水及數滴液體溴，開口繼續沸騰15分鍾，以便驅除過量的溴。冷卻後溶液呈黃色（如仍呈綠色，須再重復滴加液體溴的步驟）。稀釋至1升，過濾，濾液置於棕色試劑瓶中保存。使用時用標准naoh滴定，酚酞作指示劑，然後適當稀釋，約加水1倍，使最終的酸濃度為1n左右。
（3）標准蛋白質溶液: 精確稱取結晶牛血清清蛋白或 g—球蛋白，溶於蒸餾水，濃度為250mg/ml左右。牛血清清蛋白溶於水若混濁，可改用0.9%nacl溶液。
2. 器材
（1）可見光分光光度計
（2）旋渦混合器
（3）秒錶
（4）試管16支
（三）操作方法
1. 標准曲線的測定：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其餘試管分成兩組，分別加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升標准蛋白質溶液（濃度為250mg/ml）。用水補足到1.0毫升，然後每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，於室溫（20～25℃）放置10分鍾。再逐管加入0.5毫升試劑乙（folin—酚試劑），同樣立即混勻。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。然後在室溫下放置30分鍾，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於700nm處測定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質的量為橫座標，吸光度值為縱座標，繪制出標准曲線。
注意：因lowry反應的顯色隨時間不斷加深，因此各項操作必須精確控制時間，即第1支試管加入5毫升試劑甲後，開始計時，1分鍾後，第2支試管加入5毫升試劑甲，2分鍾後加第3支試管，余此類推。全部試管加完試劑甲後若已超過10分鍾，則第1支試管可立即加入0.5毫升試劑乙，1分鍾後第2支試管加入0.5毫升試劑乙，2分鍾後加第3支試管，余此類推。待最後一支試管加完試劑後，再放置30分鍾，然後開始測定光吸收。每分鍾測一個樣品。
進行多試管操作時，為了防止出錯，每位學生都必須在實驗記錄本上預先畫好下面的表格。表中是每個試管要加入的量（毫升），並按由左至右，由上至下的順序，逐管加入。最下面兩排是計算出的每管中蛋白質的量（微克）和測得的吸光度值。

E. cedex怎麼測蛋白濃度

最開始的濃度假設是xug/mL

那麼取了1ml蛋白質溶液，稀釋到了100ml，則濃度為x/100

ug/mL

再取0.6mL,加入0.4ml蒸餾水和5ml考馬斯後，濃度為x/100

*0.6/6

故x/100

*0.6/6

=12.777

那麼x=12.777*100*6/0.6ug/mL

F. 蛋白濃度怎麼測

首先您應該搞清楚測蛋白濃度和測酶活性是兩個不同的概念。
測蛋白濃度可以用Bradford法或者BCA法。
測酶活的話要因酶而異。
底物是什麼？如果是多功能酶要選擇多種底物包括最適底物，如果不是則通常選擇最適底物。
緩沖液怎麼配 ？要根據酶的性質選擇緩沖液的種類。
調到多少pH值？這也要根據酶的性質，並且測酶活要確定酶的最適pH，要配製一系列pH的緩沖液。
計算酶的比活性通常是酶的活力比蛋白濃度，單位是U/mg。
酶活力的定義通常是1min催化1微摩底物轉化為產物所需的酶量。

G. 求助考馬斯亮藍法測蛋白質的濃度

常用紫外分光光度法測定蛋白質含量。以下引用：

6種方法測定蛋白質含量
一、微量凱氏（kjeldahl）定氮法
樣品與濃硫酸共熱。含氮有機物即分解產生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸氨。經強鹼鹼化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。若以甘氨酸為例，其反應式如下：
nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)
2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)
(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)
反應（1）、(2)在凱氏瓶內完成，反應（3）在凱氏蒸餾裝置中進行。
為了加速消化，可以加入cuso4作催化劑，k2so4以提高溶液的沸點。收集氨可用硼酸溶液，滴定則用強酸。實驗和計算方法這里從略。
計算所得結果為樣品總氮量，如欲求得 樣品中蛋白含量，應將總氮量減去非蛋白
氮即得。如欲進一步求得樣品中蛋白質的含量，即用樣品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、雙縮脲法（biuret法）
（一）實驗原理
雙縮脲（nh3conhconh3）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與cuso4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。
紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。測定范圍為1-10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等。
此法的優點是較快速 ，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及干擾物質少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。
（二）試劑與器材
1. 試劑：
（1）標准蛋白質溶液：用標準的結晶牛血清清蛋白（bsa）或標准酪蛋白，配製成10mg/ml的標准蛋白溶液，可用bsa濃度1mg/ml的a280為0.66來校正其純度。如有需要，標准蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計算出其純度，再根據其純度，稱量配製成標准蛋白質溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配製，酪蛋白用0．05n naoh配製。
（2）雙縮脲試劑：稱以1.50克硫酸銅（cuso4?5h2o）和6.0克酒石酸鉀鈉（knac4h4o6?4h2o），用500毫升水溶解，在攪拌下加入300毫升10% naoh溶液，用水稀釋到1升，貯存於塑料瓶中（或內壁塗以石蠟的瓶中）。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉澱出現，則需要重新配製。

H. 如何選擇合適的蛋白含量測定方法

選擇一種蛋白測定方法時，需要考慮兩個重要因素：緩沖液的化學組成和檢測的蛋白量。基於dford方法的QuickStartBradford和Bio_Rad蛋白測定靈敏度高，可以兼容糖、巰基乙醇、DTT等。而對於去污劑和NaOH這兩種干擾Bradford測定的物質，DC蛋白測定卻可以兼容。

如果蛋白是在loadingbuffer中，准備跑1D或2D電泳，或者剛從細胞裂解液中抽提出來，需要定量，那麼RCDC蛋白測定更合適。

(8)測蛋白濃度電腦使用方法擴展閱讀：

常見測試方法：

QuickStartBradford蛋白測定是一種簡單、精確的蛋白濃度定量方法。現成的1倍濃度染料和7個預稀釋濃度(0.125、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0mg/ml)的蛋白標准品，讓你擁有現成的檢測工具。無需稀釋標准品和染料，一步完成蛋白濃度定量。

Bio_Rad蛋白測定也是一種簡單的蛋白濃度測定方法。該方法適應標准濃度測定、低濃度微量測定，或96孔微孔板的快速測定。它的基本原理和流程和上面的QuickStartBradford都是一樣的，不過要麻煩一點點。因為除了要稀釋蛋白標准品，配成幾個不同濃度之外，還要稀釋染料，再過濾除去不溶顆粒。

QuickStartBradford和Bio_Rad蛋白測定方法的起源都是Bradford染料結合方法(Bradford1976)，該方法檢測考馬斯亮藍G_250染料與蛋白結合時(主要結合鹼性或芳香族氨基酸殘基)的顏色變化。這種測定方法能定量多數蛋白或多肽(分子量>3,000_5,000Da)，操作簡單、速度快，靈敏度高，與一些還原劑(如DTT、巰基乙醇)兼容。

DC(DetergentCompatible)蛋白測定是一種適用於含有去垢劑的蛋白樣品比色測定方法。該方法類似於常規的Lowry測定方法(Lowryetal.1951)，但經過改良，節省了操作時間。DC蛋白測定只需要15分鍾的溫育過程，而且吸光值讀數能保持2小時的穩定。

RCDC(RecingagentCompatible&DetergentCompatible)蛋白測定是一種適用於含還原劑和去垢劑的蛋白樣品比色測定方法。

以Lowry方法(Lowryetal.1951)為基礎的RCDC蛋白測定，具有原來DC蛋白測定的特點，並能與更多的試劑兼容，簡化了復雜蛋白樣品溶液的定量測定。吸光值至少穩定1小時。

除了與DC蛋白測定兼容的試劑外，RCDC蛋白測定還與以下試劑和緩沖液兼容：2%CHAPS、350mMDTT、0.1MEDTA、Laemmli緩沖液、10%beta-巰基乙醇、ReadyPrep抽提試劑等。

I. Bradford蛋白濃度測定試劑盒具體是做什麼的 怎麼使用！

測蛋白總量的！
以牛血清蛋白(BSA)為標准蛋白，配置1 mg/mL標准溶液，選擇10 μg~80 μg/mL的不同用量，定容至100μL，然後加入1 mL Bradford工作液並振盪混勻，在2 min後測定A595 nm值，測量應在1 h內完成。A595 nm－BSA標准曲線。
然後以同樣的方法測定樣品溶液在595NM下的吸光度對照標准曲線，獲得濃度的數值。

J. 考馬斯亮藍法測蛋白濃度，具體步驟有哪些，需要什麼試劑

該方法用於大多數蛋白質的定量是比較精確的，但不適用於小分子鹼性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2％影響測定結果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford濃染液的配製：將100mg考馬斯亮藍G-250溶於50m1 95％乙醇，加入100ml濃磷酸，然後，用蒸餾水補充至200ml，此染液放4℃至少6個月保持穩定。
2．標准曲線蛋白質樣本的准備：盡量使用與待測樣本性質相近的蛋白質作為標准品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標准。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之間繪制標准曲線。
3．將待測樣本溶於100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應與製作標准曲線的緩沖溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結合溶液，如出現沉澱，過濾除去。
5．每個樣本加5ml稀釋的染料結合溶液，作用5～30rain。染液與蛋白質結合後，將由紅色變為藍色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應不得超過30min．
6．根據標准曲線計算待測樣本的濃度。
注意：
考馬斯亮藍和皮膚中蛋白質通過范德華力結合，反應快速，並且穩定，無法用普通試劑洗掉。待一兩周左右，皮屑細胞自然衰老脫落即可無礙

三、 考馬斯亮藍法測定蛋白質含量—標准曲線製作
（一）、試劑：
1、 考馬斯亮藍試劑：
考馬斯亮藍G—250 100mg溶於50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。最終試劑中含0.01%（W/V）考馬斯亮藍G—250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。
2、 標准蛋白質溶液：
純的牛血清血蛋白，預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，根據其純度同0.15mol/LNaCl配製成100ug/ml蛋白溶液。
（二）、器材：
1、722S型分光光度計使用及原理（）。
2、移液管使用（）。
（三）、標准曲線製作：
試管編號 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml標准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考馬斯亮藍試劑 （ml） 5 5 5 5 5 5 5
搖勻，1h內以1號管為空白對照,在595nm處比色
A595nm
1、

2、以A595nm為縱坐標，標准蛋白含量為橫坐標（六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐標軸上繪制標准曲線。
1）、利用標准曲線查出回歸方程。
2）、用公式計算回歸方程。
3）、或用origin作圖 ，測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相關系數應過0.999以上，至少2個9以上。
4）、繪圖時近兩使點在一條直線上，在直線上的點應該在直線兩側。
（四）、蛋白質含量的測定：
樣品即所測蛋白質含量樣品（含量應處理在所測范圍內），依照操作步驟1操作，測出樣品的A595nm，然後利用標准曲線或回歸方程求出樣品蛋白質含量。
一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間，所以上述樣品如果A595nm值太大，可以稀釋後再測A595nm值，然後再計算。
（五）、注意事項：
1、 玻璃儀器要洗滌干凈。
2、 取量要准確。
3、 玻璃儀器要乾燥，避免溫度變化。
4、 對照：用被測物質以外的物質作空白對照。