⑴ 微生物計數方法有哪些
測定微生物計數的方法有很多,主要有以下幾種:
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數.
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數.
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積上)的細菌數.
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目:將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確.
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.
⑵ 空氣細菌培養數是如何計算出來的
1 空氣細菌培養的采樣方法
檢測空氣細菌總數的細菌培養法平板暴露法。此法簡便,目前大部分醫療單位採用。在消毒處理後,操作前進行,室內面積≤30m2對角線內、中、外處設3點,內外點布位距牆壁1m處,室內面積>30m2設4角及中央5點,4角的布點部位距牆壁1m處。
基本原理是:空氣中細菌等微生物可隨塵粒一起下降,在室內各采樣點處放好營養瓊脂平板,采樣高度距地面0.8~1.5m,采樣時,將平板蓋打開,暴露5min或10min,蓋好平板。將平板置於37℃恆溫箱培養48h計算菌落數。
2 細菌數的計算方法細菌總數(cfu/m3=4500N/A×T)
式中A=平板面積(cm2) T——平板暴露時間(min) N——平均菌落數(cfu)
這個計算公式是根據在面積100cm3的培養基表面,5min內能落下的細菌相當於10L空氣中含的細菌數而推算出來的。
3 空氣消毒效果和污染狀況的評價空氣消毒效果的比較
應在消毒前後取樣進行培養,如消毒後空氣中細菌數明顯下降,說明消毒效果好,下面規定適用GB15982——1995規定:Ⅰ類區域細菌總數≤10cfu/m3,並且未檢出致病菌為消毒合格;Ⅱ類區域細菌總數≤200cfu/m3並且未檢出致病菌為消毒合格;Ⅲ類區域細菌總數≤500cfu/m3並且未檢出致病菌為消毒合格。
Ⅰ類環境包括層流潔凈手術室和層流潔凈病房只能採用層流通風才能空氣中的微生物減到此標准以下。Ⅱ類環境包括普通手術室、產房、嬰兒室、早產兒室、普通保護性隔離室、供應室潔凈區、燒傷病房、重症監護病房、採用循環風紫外線空氣消毒器或靜電吸附式空氣消毒器,這類均為有人房間,必須採用對人無毒無害且可連續消毒才能使空氣中的微生物減到此標准以下。Ⅲ類環境包括兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換葯室、治療室、供應室清潔區、急診室、化驗室、各類普通病房室和房間,採用紫外線消毒,化學消毒劑熏蒸或噴霧消毒。
⑶ 菌落計數有哪些的方法
測定微生物細胞數目方法有多介紹幾種
1.血細胞計數法
稀釋菌液樣品滴血細胞計數板上顯微鏡下計算4~5格細菌數並求出每小格所含細菌平均數再此依據估算總菌數
①此法缺點能區分死菌和活菌
②對壓小方格界線上細菌應當取平均值計數
③此法用於測定培養液酵母菌種群數量變化
2.稀釋塗布平板法
原理:每活細菌適宜培養基和良好生長條件下通過生長形成菌落培養基表面生長菌落來源於樣品稀釋液活菌
①方法常用來統計樣品活菌數目
②統計菌落數往往比活菌實際數目低原因當兩活多細胞連起時平板上觀察只菌落因此統計結般用菌落數而用活菌數來表示
③土壤、水、牛奶、食品和其材料所含細菌、酵母、芽孢與孢子等數量均用此法測定適於測定樣品絲狀體微生物例放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等營養體等
④此法若培養成菌落通過定量菌液均勻地塗布玻片上定面積上經固定染色顯微鏡下計數樣又稱塗片計數法染色用台盼藍台盼藍能使死細胞染成藍色分別計數死細胞和活細胞
3.濾膜法
濾膜法當樣品菌數低時定體積湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器濾膜乾燥、染色並經處理使膜透明再顯微鏡下計算膜上(或定面積上)細菌數
此法也通過培養觀察形成菌落數來推算樣品菌數例測定飲用水大腸桿菌數目:已知體積水過濾濾膜放伊紅美藍培養基上培養該培養基上大腸桿菌菌落呈現黑色根據培養基上黑色菌落數目計算出水樣大腸桿菌數目
此法也統計樣品活菌數目
4.比濁法
原理定范圍內菌懸液細胞濃度與混濁度成正比即與光密度成正比菌越多光密度越大因此藉助與分光光度計定波長下測定菌懸液光密度光密度表示菌量實驗測量時定要控制菌濃度與光密度成正比線性范圍內否則准確
5.顯微鏡直接計數法
課本生物選修1生物技術實踐P22除了上述活菌計數法外顯微鏡直接計數也測定微生物數量常用方法里說顯微鏡直接計數我認應該稀釋塗布基礎上培養成菌落而通過染色方法顯微鏡下直接計數再濾膜法也樣有兩種情況
另外微生物計數法發展迅速多種多樣快速、簡易、自動化儀器和裝置等方法用來統計微生物數目。
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⑷ 怎樣計算細菌繁殖個數
怎樣計算細菌繁殖個數
1.取細菌培養液適當稀釋後用分光光度計測其OD600,一般1OD約6億活菌。當然你可針對你的細菌恰當估算
2.將細菌培養液取1ml,加到9ml稀釋液的管中,振勻後用同方法進行10倍倍比稀釋,之後根據上述估算取活菌數大概在30-300個/培養皿的稀釋度塗板,同時塗該稀釋度的上一個稀釋度和下一個稀釋度已參照。這樣可以比較精確的確定細菌繁殖個數。
⑸ 統計活菌數量的方法都有哪些
統計菌落數目的方法有直接計數法和間接計數法兩種。
1. 直接計數法
直接計數法是將稀釋的樣品滴在計數板上,蓋上蓋玻片,然後在顯微鏡下計數4〜5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再按公式求出每 毫升樣品中所含的細菌數。計算公式 為:每毫升原液所含細菌數=每小格平 均細菌數X400X1 000X稀釋倍數。這種方法的優點是所需設備比較簡單,能迅速得到結果,而且在計數的同時還可以觀察到所研究的微生物的形態特徵; 缺點是不能區分死菌與活菌。
2. 間接計數法
在應用稀釋塗布平板法計數時,首先要將待測樣品配製成均勻的系列稀釋液,盡量使微生物細胞分散開,再把稀釋液接種到平板上,進行培養觀察。但值得注意的是,統計的菌落數往往比活菌 的實際數目低,而且統計的結果一般用 菌落數而不用活菌數來表示。計算公式為:每克樣品中的菌落數= (C+V)X M,其中,C表示某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數,V表示塗布平板時所 用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數。
⑹ 龐大的細菌數量是如何算出來的
要計算細菌數量有很多種方法,我只舉其中幾個例子,你感受下:
隨機抽樣法:隨便取菌液塗片樣品中的幾個部分,進行計數,然後即再乘以總數就好了。
無限稀釋法:細菌樣品不斷按倍數稀釋,一直稀釋到可以計數為止,然後乘以稀釋倍數。
檢測特定菌種的OD值,直接用機器測就好了,對應的OD值有對應的大致細菌數量。