❶ 求教植物葉片POD酶活性的大致范圍
求教植物葉片POD酶活性的大致范圍
酶活性測定的原理：
超氧物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）
活性的測定 SOD採用氮藍四唑（nitro-blue tetrazolium，NBT）法（Beauchamp和Fridovich，1971）。反應步驟為：取200μl粗提液，加入3.7 ml NBT反應液50mmol/LpH7.8的磷酸緩沖液（PBS）配製的含77.12μmol/L氮藍四唑, 100μmol/LEDTA－Na2和13.37mmol/L甲硫氨酸溶液〕，在30℃下保溫2分鍾後加入100μl核黃素溶液（pH7.8的50mmol/L磷酸緩沖液中含80.2μmol/L 核黃素和100μmol/LEDTA－Na2），在4000Lx日光下反應20min。然後迅速測定A560。以不照光的管做空白。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。酶活性按以下公式計算：以抑制NBT光化還原的50％為一個SOD活性單位，結果以U/mg蛋白表示。以加緩沖液代替酶液的作為對照。
SOD總活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 式中， Ack為照光對照管的吸光度；AE為樣品管的吸光度；V為樣品液總體積（ml）；Vt為測定時樣品用量（ml）；W為樣品鮮重（g）或蛋白質含量（mg）。
過氧化氫酶（Catalase，CAT）
活性測定 CAT 活性參照Aebi (1984)[7]的方法進行測定。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL 。400 μL反應液含50 mmol/L的PBS (pH 7.0)，30 mmol/L的H2O2和50 µL粗酶液。反應從加入過氧化氫開始計時，連續測定在240 nm吸光度的降低值。酶活性定義為：一個過氧化氫酶單位相當於在規定條件下於溫度25℃，pH7.0條件下1分鍾分解1μmol過氧化氫所需酶量，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
多酚氧化酶（Polyphenoloxidase，PPO）
活性的測定 PPO活性測定採用鄰苯二酚法（Aquino-Bolaños和Mercado-Silva，2004）。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。350µL反應液（用50mmol/L，pH6.4的PBS配製，內含100µmol/L鄰苯二酚）中加入50 µL的粗酶液，平衡1分鍾後連續測定398nm吸光度的變化。以1分鍾內398nm吸光度上升0.01為一個酶活性單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
過氧化物酶（Peroxidase，POD）
活性測定POD活性測定採用愈創木酚法（Lurie等，1997)。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。反應體系為30μL粗酶液，290 µL 0.3%愈創木酚（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）和 80µL0.3%H2O2（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）。反應在加入H2O2 後開始准確記時。連續吸光度在470 nm的上升值。酶活性以每分鍾上升0.01為一個單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
❷ AsA-POD活性的計算方法
一、抗壞血酸含量測定
【原理】
還原型抗壞血酸(AsA)可以把鐵離子還原成亞鐵離子，亞鐵離子與紅菲咯啉(4，7－二苯基－1，10－菲咯啉，BP)反應形成紅色螯合物。在534nM波長的吸收值與AsA含量正相關，故可用比色法測定。脫氧抗壞血酸(DAsA)可由二硫蘇糖醇(DTT)還原成AsA。測定AsA總量，從中減去還原型AsA，即為DAsA含量。
【儀器與用具】
離心機；分光光度計；研缽；試管。
【試劑】
5％三氯乙酸(TCA)；
20％TCA；
無水乙醇溶液；
0�4％磷酸—乙醇溶液；
0�5％BP—乙醇溶液；
0�03％FeCl3—乙醇溶液；
0�6g／L DTT；
NA2HPO4—NAOH溶液：以0�2Mol／L NA2HPO4和1�2Mol／L NAOH等量混合；
60MMol／L DTT—乙醇。
【方法】
1.製作標准曲線配製濃度為2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14Mg／L的AsA系列標准液。取各濃度標准液1�0Ml於試管中，加入1�0Ml 5％TCA、1.0ml乙醇搖勻,再依次加入0�5Ml 0�4%H3PO4—乙醇、1�0Ml 0�5％BP—乙醇、0�5Ml 0�03%FeCl3—乙醇，總體積5�0Ml。將溶液置於30℃下反應90Min，然後測定A534。以AsA濃度為橫坐標，以A534為縱坐標繪制標准曲線，求出線性方程。
2.提取取植物葉片1�0g，按1∶5(W／V)加入5%TCA研磨，4000r／Min離心10Min，上清液供測定。
3.測定
(1)AsA測定取1.0Ml樣品提取液於試管中，按上述相同的方法進行測定，並根據標准曲線計算AsA含量。
(2)DAsA測定向1.0Ml樣品液中加入0�5Ml 60MMol／L DTT—乙醇溶液，用NA2HPO4—NAOH混合液，將溶液PH調至7～8,置於室溫下10Min，使DAsA還原。然後加入0�5Ml 20％TCA，把PH調至1～2。按AsA相同方法進行測定，計算出總AsA含量，從中減去AsA,即得DAsA含量。
二、抗壞血酸過氧化物酶(AsA－POD)活性
【原理】
AsA－POD催化AsA與H2O2反應，使AsA氧化成單脫氫抗壞血酸(MDAsA)。隨著AsA被氧化，溶液中290nM波長下的消光值(A290)下降，根據單位時間內A290減少值，計算AsA－POD活性。AsA氧化量按消光系數2�8(MMol／L)／CM計算，酶活性可用每克鮮重每小時氧化AsA的微摩爾數μMol／g·H表示。
【儀器】
離心機；紫外分光光度計；研缽；試管。
【試劑】
50MMol／L K2PO4—KH2PO4緩沖液(PH7�0，內含0�1MMol／L EDTA－NA2)�
0�3MMol／L AsA；
20μMol／L AsA；
0�06MMol／L H2O2。
【方法】
1�酶液制備取1�0g植物葉片剪碎，按1∶3(W／V)加入預冷的50MMol／L K2HPO4—KH2PO4緩沖液進行研磨提取，用兩層紗布過濾，濾液在4000r／Min下離心10Min，上清液作酶粗提液供測定。
2.酶活性測定3Ml反應混合液中含50MMol／L K2HPO4—KH2PO4緩沖液(PH7�0)，0.1MMol／L EDTA－NA2，0.3MMol／L AsA，0�06MMol／L H2O2和0.1Ml酶液。加入H2O2後立即在20℃下測定10～30s內的A290變化，計算單位時間內AsA減少量及酶活性。
❸ sod酶活性測定方法
1、測定方法很多，常見的有化學法、免疫法和等電點聚焦法。其中化學法應用最普遍，化學法的原理主要是利用有些化合物在自氧化過程中會產生有色中間物和O2 -，利用SOD分解而間接推算酶活力。
2、在化學方法中，最常用的有黃嘌呤氧化酶法，鄰苯三酚法，化學發光法，腎上腺素法，NBT-還原法，光化學擴增法，Cyte還原法等。
（1）改良的鄰苯三酚自氧化法簡單易行較為實用。
（2）化學發光法和光化學擴增法不適用於測定Mn-SOD，但對於Cu/Zn-SOD反應極靈敏。（3）Cyte還原法用於Mn-SOD活力測定結果穩定，重復性好。但專一性和靈敏度不夠理想，而且需要特殊儀器，實際應用受到限制。
（4）亞硝酸鹽形成法與CN—抑制劑或SDS處理相結合，應用於Mn-SOD測定，靈敏度比Cyte還原法提高數倍，而且專一性強，重復性好，操作方便，不需要特殊儀器和設備，易於實際應用和推廣，是目前較好的測定方法之一。
❹ 植物pod怎麼算
pod過氧化物酶是過氧化物酶體的標志酶，是其一類氧化還原酶，它們能催化很多反應。過氧化物酶是以過氧化氫為電子受體催化底物氧化的酶。主要存在於載體的過氧化物酶體中，以鐵卟啉為輔基，可催化過氧化氫，氧化酚類和胺類化合物和烴類氧化產物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類、醛類、苯類毒性的雙重作用。
用以下公式計算活性：
式中：E436――每分鍾吸光度的變化（436nm處）(15次的平均值)
Ew――67μl所用酶液中含酶的重量（0.00004958mg）
8.3――1μmol鄰-聯二茴香胺/mL的吸光度（436nm處）
2.067――反應混合物的總體積
GOD:
15min的平均值：
U1=181.23U/mg; U2=167.36U/ mg; U3=156.11U/ mg
4min的平均值：
U1=156.56U/ mg; U2=129.89U/ mg, U3=134.97U/ mg
❺ pod測定方法
0.5 g葉片加入50 mmol L-1磷酸緩沖液（pH7.8，含2％的聚乙烯吡咯烷酮），研磨，4℃ 8000 r/min離心20 min，上清液定容至5 ml。 POD活性測定按Kraus和Fletcher(1994)方法進行3 ml反應混合液中含0.2％愈創木酚0.95 ml，50 mmol L-1 PBS（pH7.0）1 ml，酶液0.05 ml，0.3％過氧化氫1 ml。記錄1 min內470 nm下的光吸收值變化。
❻ 急呀 知道的給說一下 生化實驗！！！製作定 量分析測定標准曲線的原理和方法
植物生理生化實驗課程教學大綱
一、課程基本概況
1. 課程名稱：植物生理生化實驗
2. 課程名稱（英文）： Experiments of Plant physiology and Biochemistry
3. 課程編號：B16035
4. 課程總學時：60學時（均為實驗教學）
5. 課程學分：3學分
6. 課程分類：必修課
7. 開設學期：第3、4學期
8. 適用專業：園藝、農學、植物保護、植物生物技術等農科類本科專業。
9. 先行課：《物理學》、《化學》、《分析化學》、《植物生理生化》等。
二、課程性質、目的和任務
本課程是植物生理學的配套課程，是農科類各專業必修的專業基礎課，屬於以植物為對象各專業的工具課程之一。其先行課為物理學、化學、分析化學、植物學、生理生化。該課程主要介紹植物生理生化的實驗研究技術以及常用植物生理生化指標的分析方法及原理，為專業課的學習與科學研究工作提供技術支持與手段。
通過本課程的學習，要求學生掌握植物生理生化的一些基本實驗技術與原理，熟悉植物生理生化常規儀器的使用方法，能獨立設計並完成一般性實驗內容，操作規范，能夠完成以植物為材料的基本的科學研究工作。從而達到更好地利用植物、人為地影響和改造植物，使之更大限度的為人類服務的目的。。
三、主要內容、重點及難點
實驗一 應用紙層析分離鑒定氨基酸
（一）目的要求：學習紙層析分離技術，掌握紙層析分離鑒定氨基酸的原理和方法。
（二）重點：紙層析分離鑒定氨基酸的原理、操作方法、結果分析。
（三）難點 點樣適量、分析確定層析結果。
實驗二 氨基酸含量的測定——茚三酮比色法
（一）目的要求：掌握茚三酮比色法測定氨基酸含量的原理和方法；學習分光光度計的使用；學習標准曲線的製作。
（二）重點：實驗原理和操作方法
（三）難點：樣品提取、標准曲線製作和使用。
實驗三 可溶性糖含量的測定——蒽酮法
（一）目的要求：掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法，了解可溶性糖含量這一生理指標的意義。練習分光光度計的使用和標准曲線的製作。
（二）重點：實驗原理和方法；蒽酮試劑的配製。
（三）難點：樣品提取及適度稀釋，標准曲線製作和使用。
實驗四 蛋白質含量的測定
（一）方法：考馬斯亮藍比色法；福林酚比色法
（二）目的要求：掌握測定蛋白質含量的原理和方法，了解蛋白含量測定的意義及使用方面。練習分光光度計的使用和標准曲線的製作。
（三）重點：了解實驗原理，正確運用方法。
（四）難點：樣品提取及適度稀釋，標准曲線製作和使用。
實驗五 酶的基本性質
（一）目的要求：通過實驗，進一步理解酶的重要性質和影響酶活性的條件。
（二）重點：酶的專一性，溫度、pH、激活劑、抑制劑對酶活性的影響，鑒定酶促反應速度快慢的依據和方法
（三）難點：鑒定酶促反應速度快慢的依據和方法。
實驗六 RNA的提制
（一）目的要求：掌握濃鹽法提制RNA的原理和方法，進一步理解RNA的理化性質。
（二）重點：理解實驗原理和各步操作的方法、意義和目的。
（三）難點：理解實驗原理和各步操作的方法、意義和目的。
實驗七 RNA含量的測定
（一）目的要求：掌握苔黑酚法測定RNA含量的原理和方法；學習RNA含量和純度的計算方法及計算原理；進一步練習分光光度計的使用和標准曲線法的應用。
（二）重點：掌握苔黑酚法測定RNA含量的原理和方法；學習RNA含量和純度的計算方法及計算原理。
（三）難點：正確稱量，掌握測定原理。
實驗八 澱粉酶活性的測定
（一）目的要求：了解α澱粉酶和β澱粉酶催化的產物和作用條件，掌握α澱粉酶活性、β澱粉酶活性和澱粉酶總活性的測定原理和方法；進一步理解酶的作用條件。
（二）重點：澱粉酶活性的測定原理和方法，進一步理解酶的作用條件。
（三）難點：通過控制實驗條件，准確測定不同澱粉酶的活性。
實驗九 電泳法分離酶或蛋白質
（一）方法：醋酸纖維薄膜電泳；聚丙烯醯胺凝膠電泳
（二）目的要求：掌握電泳的概念、原理以及電泳技術
（三）重點：電泳的原理和電泳技術
（四）難點：電泳技術的掌握
實驗十 穀物種子中賴氨酸含量測定
（一）方法：茚三酮溶液顯色法；染料結合（DBL）法；.三硝基苯磺酸（PDAB）法
（二）目的要求：掌握測定原理、方法及技術
（三）重點：原理及標准曲線製作
（四）難點：材料處理
實驗十一 植物組織水勢的測定
（一）方法：小液流法
（二）目的要求：學習並掌握小液流法植物組織水勢的測定方法，理解水分在細胞內外的轉移的條件和水勢的概念。
（三）重點：測定原理和方法
（四）難點：根據試材確定濃度系列；檢驗操作方法。
實驗十二 呼吸強度的測定
（一）方法：小籃子法；氧電極法。
（二）目的要求：掌握呼吸強度的測定原理和方法；學習滴定管的使用。
（三）重點：測定原理和方法。
（四）難點：滴定管的使用；滴定終點的把握。
實驗十三 葉綠素含量的測定
（一）方法：光電比色法
（二）目的要求：掌握分光光度法測定葉綠素含量的原理和方法；學習分光光度計的使用。
（三）重點：葉綠素的提取、含量計算。
（四）難點：葉綠素的提取、定容；按要求稀釋到適當濃度；正確地使用分光光度計。
實驗十四 光合色素的提取分離與理化性質
（一）目的要求：進一步理解光合色素的重要理化性質；學習鑒定理化性質的方法。
（二）重點：光合色素的種類；光合色素的化學與光學性質；紙層析分離鑒定光合色素的方法。
（三）難點：皂化反應；吸收光譜。
實驗十五 硝酸還原酶活力測定
（一）方法： 對-氨基苯磺酸法。
（二）目的要求：掌握測定硝酸還原酶活力的原理及方法，加深對硝酸還原酶在植物體內重要作用的認識；學習真空泵的使用；練習標准曲線的製作。
（三）重點：測定原理和方法；真空泵的使用；標准曲線的製作。
（四）難點：理解測定原理；製作出符合要求的標准曲線；理解各步操作的目的性。
實驗十六 種子生活力的測定
（一）方法（三種方法同時做）：紅墨水染色法；TTC染色法；BTB顯色法。
（二）目的要求：理解測定原理；學會用三種方法測定種子生活力。
（三）重點：三種方法的原理與操作；各步注意事項。
（四）難點：在實踐中能根據具體種子的特點選擇適用的測定方法；能正確判別種子的生活力。
實驗十七 超氧化物歧化酶（SOD）活性測定
（一）方法：NBT光化還原法。
（二）目的要求: 認識SOD的作用及測定SOD活性的意義，掌握SOD的測定原理和方法。
（三）重點：掌握測定原理和方法；理解照光的意義。
（四）難點：測定原理；具體使用中能根據酶活決定加入提取液的數量；各種試劑的作用；實驗條件的控制。
實驗十八 過氧化物酶（POD）活性的測定
（一）方法：聯苯胺氧化法；愈創木酚法。
（二）目的要求：認識過氧化物酶的作用，掌握過氧化物酶活性的測定原理和方法。
（三）重點：明了測定原理；掌握測定方法。
（四）難點：具體使用中能根據酶活決定加入提取液的數量及三濾乙酸的量；准確保溫。
實驗十九 丙二醛（POD）含量的測定
（一）方法：硫代巴比妥酸法。
（二）目的要求：認識丙二醛的來源、作用及測定意義，掌握測定原理和方法。
（三）重點：測定原理和方法
（四）難點：明了測定原理；掌握測定方法。
實驗二十 植物細胞差別透性的測定
（一）方法：電導率儀法。
（二）目的要求：了解逆境對細胞膜透性的影響，掌握電導儀法測定細胞膜透性的原理和方法；學習電導儀的使用。
（三）重點：明了測定原理；掌握測定方法；學會使用電導率儀。
（四）難點：正確控制實驗環節，正確使用電導率儀。
實驗二十一 光合強度的測定
（一）方法：改良半葉法；氧電極法；光合測定儀法。
（二）目的要求：學習不同方法測定光合強度的原理；進一步理解總光合強度和凈光合強度；掌握測定方法；要求能根據需要和條件獨立完成光合強度測定。
（三）重點：相關儀器的使用、測定原理和方法；實驗環節的條件控制。
（四）難點：正確使用儀器和測定方法。
實驗二十二 脯氨酸含量影響
（一）方法：酸性茚三酮法；磺基水楊酸法。
（二）目的要求：掌握脯氨酸的測定方法及原理；能根據需要獨立完成測定過程。
（三）重點：標准曲線的製作、植物材料的處理。
（四）難點：標准曲線的製作、植物材料的處理。
實驗二十三 植物根系活力的測定
（一）方法：TTC比色法；α-萘胺氧化法。
（二）目的要求：理解根系活力的內涵，掌握根系活力的測定原理和方法。
（三）重點：實驗原理和方法
（四）難點：操作方法
實驗二十四 維生素C含量的測定
（一）方法：滴定法；二苯胺萃取比色法；2，4二硝基苯肼比色法；熒光法。
（二）目的要求：掌握測定原理和方法；能根據需要和條件選擇適當的測定方法。
（三）重點：相關儀器的使用、測定原理和方法；實驗環節的條件控制。
（四）難點：正確掌握操作方法。
實驗二十五 綜合性實驗——植物組織中POD的提取分離純化與鑒定
（一）方法：採用分段鹽析法提取分離POD；用透析法脫鹽；用福林酚法測定蛋白質含量；愈創木酚法測定POD活性，計算比活力和回收率；用聚丙烯醯胺凝膠電泳分離鑒定POD同工酶。
（二）目的要求：掌握實驗的基本原理和方法；能設計實驗操作流程。
（三）重點：相關儀器的使用、測定原理和方法；各實驗環節的銜接。
（四）難點：實驗技術的綜合運用。
實驗二十六 設計性實驗——植物組織衰老過程中的生理變化
（一）方法和實驗流程：設計使植物組織衰老的處理方法；根據理論知識，設計在衰老的不同階段測定與衰老有關的生理指標；確定各生理指標的測定方法；寫出實驗設計方案；配製葯品；取材、測定；寫出實驗報告。
（二）目的要求：學習實驗設計方法，初步培養科學研究的基本能力。
（三）重點：實驗設計、相關儀器的使用、測定原理和方法；各實驗環節的銜接。
（四）難點：試驗設計、實驗技術的綜合運用。
四、學時分配表
教學時數分配
順 序
授 課 內 容
學時分配
小計
生化實驗部分
（第三學期與生化理論課教學平行開課）
實驗一
應用紙層析分離鑒定氨基酸
4
4
實驗二
氨基酸含量的測定——茚三酮比色法
3
3
實驗三
可溶性糖含量的測定——蒽酮法
3
3
實驗四
蛋白質含量的測定——福林酚法
3
3
實驗五
RNA的提制
4
4
實驗六
RNA含量的測定
3
3
實驗七
澱粉酶活性的測定
4
4
實驗八
聚丙烯醯胺凝膠電泳分離同工酶
6
6
綜合性實驗
（任選）
將蛋白質含量測定、酶活性測定、聚丙烯醯胺凝膠電泳三項實驗內容綜合起來，開設綜合性實驗植物組織POD的提取分離純化與鑒定。
18
18
備選實驗一
酶的基本性質
4
4
備選實驗二
穀物種子中賴氨酸含量測定
3
3
生理實驗部分
（第四學期與植物生理理論課教學平行開課）
實驗十一
植物細胞水勢測定
3
3
實驗十二
呼吸強度測定
3
3
實驗十三
光合色素含量測定
3
3
實驗十四
光合色素的提取分離與理化性質
3
3
實驗十五
硝酸還原酶活性測定
3
3
實驗十六
種子生活力快速測定
3
3
實驗十七
超氧化物岐化酶（SOD）活性測定
3
3
實驗十八
過氧化物酶（POD）活性測定
2
2
實驗十九
丙二醛（MDA）含量測定
3
3
實驗二十
細胞差別透性測定
4
4
備選實驗一
光合強度測定
4
4
備選實驗二
脯氨酸含量測定
3
3
備選實驗三
根系活力測定
3
3
備選實驗四
維生素C含量測定
3
3
設計性實驗（任選）
將光合色素含量測定、POD、SOD活性測定、MDA含量測定和細胞差別透性測定結合起來，開設設計性實驗植物組織衰老過程中的生理變化。
15
15
註：根據需要和實驗室條件從中選擇60學時實驗，生理、生化部分各30學時。
五、課程教學的基本要求和主要環節
（一）實驗教學的基本要求：
1．堅持精講多練的原則，講授、演示、指導與學生獨立設計獨立完成相結合，讓學生成為實驗課主體。
2．將能力培養做為實驗課的主要目標追求。一方面要求學生掌握實驗原理，能根據實驗原理適當調整實驗步驟；另一方面訓練學生能根據專業研究的需要，能獨立地從選擇實驗內容、確定實驗方法、試劑配製、實驗條件控制、儀器使用等環節完成實驗內容；
3．把培養學生動手能力做為實驗課重點之一，達到規范操作目的。
4．實驗內容可根據需要和實驗室條件在大綱范圍內選擇10～11項，並應根據需要和實驗室條件啟動備選實驗。
（二）教學主要環節
1．實驗教學：與相應理論課相伴進行。
2．考試及成績構成：本課程為考查課。成績由兩部分構成，一是實驗報告成績，占總成績的30%～50%；二是期末考試成績，占總成績的50%～70%。
六、本課程與其它課程的聯系與分工
本課程與物理學、化學、分析化學、植物學、生理生化理論課有重要聯系，與化學尤其是分析化學的聯系尤為重要。
化學課為本課程奠定試劑配製、實驗室基本操作方法與操作規范的基礎，本課程運用這些知識與技能基礎完成教學，並在教學中使之鞏固和強化；
植物學為以植物為材料試材准備和取捨提供基礎知識；
植物生理生化為本課程的學習提供必要的理論指導，本課程的學習加深對生理生化知識的理解，並使深奧的理論知識具有可操作性，甚至使之物質化。
七、建議教材與參考教材
建議教材：劉永軍主編《植物生理生化實驗》，中國農業科技出版社，2002年。
參考教材：
1．李合生主編. 植物生理生化實驗原理及技術.北京：高等教育出版社，2000.
2．李建武等主編. 生物化學實驗原理和方法. 北京：北京大學出版社，2000.
3．白寶璋等. 植物生理學測試技術. 中國科學技術出版社，1993
4．西北農業大學. 基礎生物化學實驗指導. 陝西科學技術出版社，1986
5．張志良主編. 植物生理學實驗指導（第二版）. 北京：中國農業出版社，2000.
6．鄒琦主編. 植物生理學實驗指導. 北京：高等教育出版社，1990.
7．朱廣廉等主編. 植物生理學實驗. 北京：北京大學出版社，1990 .
9．李秀錦主編. 實用生化實驗技術. 北京：中國農業出版社，1995.
10．劉福嶺編著. 食品物理與化學分析方法. 北京：輕工業出版社，1987.
11．張承圭等合編. 生物化學儀器分析與技術. 北京：高等教育出版社，1990.
12．何忠孝主編. 電泳. 北京：科技出版社，1999.
13．華東師范大學生物系植物生理教研組編. 植物生理學實驗指導，人民教育出版社，1980
14．.植物生理與分子生物學報
15．.植物生理學通訊
❼ SOD活性怎麼測
超氧化物歧化酶(SOD)的催化底物是O2 ，一般多以一定時間內產物生成量或底物的消耗量作為酶活性單位。由於O2 自身很不穩定，且不易制備，測定SOD的方法除少數採用直接法外，一般多為間接法。
1．直接法 原理是根據O2 或產生O2 的物質本身的性質測定O2 的歧化量，從而確定SOD的活性。經典的直接法包括：脈沖輻射分解法、電子順磁共振波法(EPR)、核磁共振法。由於所需的儀器設備價格昂貴,一般較少應用。
2．一般化學法 這些方法的共同特點是要有一個O2 的產生體系和一個被O2 還原或氧化的可檢測體系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 還原或氧化檢測體系的反應受到抑制。根據反應受抑製程度，測定SOD的活性。一般化學法有鄰苯三酚自氧化法、細胞色素C還原法、羥胺法、黃嘌呤氧化酶-NBT法、腎上腺素法、沒食子酸法、6-羥多巴胺法、亞硝酸鹽形成法和鹼性二甲亞碸法。
常用的有： (1) 鄰苯三酚自氧化法：即改良Marklund法。原理是基於經典的分光光度法，在鹼性條件下，鄰苯三酚自氧化成紅桔酚，用紫外-可見光譜跟蹤波長為325nm、420nm或650nm(經典為420nm)，同時產生O2 ，SOD催化O2 發生歧化反應從而抑制鄰苯三酚的自氧化，樣品對鄰苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映樣品中的SOD含量。本法具有特異性強，所需樣本量少(僅50μl)，操作快速簡單，重復性好，靈敏度高，試劑簡單等優點。 (2) 細胞色素C還原法(McCord法)：原理是黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶體系中產生的O2 使一定量的氧化型細胞色素C還原為還原型細胞色素C，後者在550nm有最大光吸收。在SOD存在時，由於一部分O2 被SOD催化而歧化，O2 還原細胞色素C的反應速度則相應減少，即其反應受到抑制。將抑制反應的百分數與SOD濃度作圖可得到抑制曲線，由此計算樣品中SOD活性。本法是間接法中的經典方法，但本法靈敏度較低。
3．化學發光法原理是黃嘌呤氧化酶在有氧條件下，催化底物黃嘌呤或次黃嘌呤發生氧化反應生成尿酸，同時產生O2 。後者可與化學發光劑魯米諾反應，使其產生激發。SOD能清除O2 從而抑制魯米諾的化學發光。本法可應用於SOD的微量測定，不僅靈敏度高，簡便易行，而且特異性與准確性至少與細胞色素C還原法類似。
4．免疫學方法上述方法測定的是SOD活性，免疫學方法則可測定樣品中SOD的質量，因此特異性較好，是較理想的測定SOD方法，免疫法有放射免疫法、化學發光免疫分析法、ELISA法等。但其缺陷是只能測定抗體相應的抗原，對於檢測不同種類的SOD，則須制備相應的特異性抗體，手續繁瑣。
5．電泳法電泳染色定位法的基本原理是根據光化學法與NBT還原法。電泳則採取垂直板聚丙烯醯胺凝膠電泳。既可採用SOD活性正染色(呈現棕色區帶)也可採取SOD活性負染色(呈現無色透明區帶)。根據凝膠上電泳分離的SOD區帶的著色深淺與面積大小，對樣品進行半定量分析，也可製作校正曲線計算樣品中的SOD含量。染色定位法常用於鑒定SOD，很少為了定量，主要原因是它不及化學法簡便，但鑒定SOD卻較化學法為優。用電泳法可鑒定SOD是否摻有雜質蛋白，有無同工酶，且可半定量地確定SOD的活性大小。
6. 平行放在距20 W熒光燈管3 cm處的光照台上，光照8 min後，立即在200A分光光度計的460 nm波長下比色。用測得的結果計算樣品中的SOD含量。
SOD是機體內天然存在的超氧自由基清除因子，它通過上述反應可以把有害的超氧自由基轉化為過氧化氫。盡管過氧化氫仍是對機體有害的活性氧，但體內 6性極強的過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(POD)會立即將其分解為完全無害的水。這樣，三種酶便組成了一個完整的防氧鏈條。