轉染試劑計算方法

『壹』 細胞轉染的常用步驟

1. 轉染試劑的准備
① 將400ul去核酸酶水加入管中，震盪10秒鍾，溶解脂狀物。
② 震盪後將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震盪。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體 體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震盪後在加入合適體積的轉染試劑，再次震盪。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鍾。
4. 吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。
5. 加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。
6. 到時後，根據細胞種類決定是否移除混合液，之後加入完全培養基繼續培養24－48小時。

『貳』 脂質體轉染原理

1定義編輯
最初，人們只是運用脂質體模擬生物膜，研究膜的構造及功能，從而發現了膜的融合及內吞作用，因而可用作外源物質進入細胞的載體。

2特徵編輯
陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用將DNA分子包裹入內，形成DNA一脂復合體，也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附，再通過膜的融合或細胞的內吞作用，偶爾也通過直接滲透作用，DNA傳遞進入細胞，形成包涵體或進入溶酶體其中一小部分DNA能從包涵體內釋放，並進入細胞質中，再進一步進入核內轉錄、表達。

已有眾多的文獻報道，脂質體本身會參與細胞生理活動,引起基因表達的上調或下調。如參與PKC（蛋白激酶C）通路調節(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如與線粒體膜發生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15)；轉染siRNA造成脫靶效應等等。細胞毒性的大小往往意味著對細胞生理活動影響的大小，脂質體這些作用是造成細胞毒性的根本原因。這會對相關研究數據產生嚴重的干擾，甚至影響研究的結論。這已引起了許多研究者的注意。

雖然人們早已發現脂質體對細胞的毒性，對研究的影響，但由於一直沒有更好的方法尤其是更高效的轉染方法代替脂質體，所以脂質體轉染試劑一度應用非常廣泛。同時，人們也一直在尋找更有效、毒性小同時對研究影響也小的轉染試劑。由於脂質類轉染試劑對細胞的毒性是由其脂質特性決定的，眾多的研究者和生物公司將新一代轉染試劑的開發聚焦在非脂質體的聚合物上，一種納米材料的聚合物已經研發出來，其原理是：分子內含有許多氨基，在生理PH下會發生質子化，這些質子化的氨基可以中和DNA質粒表面的負電荷，使DNA分子由伸展結構壓縮為體積相對較小的DNA粒子，並包裹在其中，使DNA免受核酸酶的降解。轉染復合物主要是通過細胞內吞作用將DNA轉移進入細胞，形成內含體(endosome)，DNA從內含體釋放，進入細胞質中，再進一步進入核內轉錄、表達。通過納米技術生產出的轉染試劑在納米尺度表現出結合保護DNA能力強、毒性低的獨特性能。

『叄』 轉染試劑的介紹

轉染(transfection)指真核細胞由於外源DNA摻入而獲得新的遺傳標志的過程。DNA轉染技術的發展對現代分子生物學產生了巨大的影響。基因轉染技術不僅是研究轉基因和基因表達的重要工具，而且是目前基因治療的關鍵步驟。理想的基因轉染試劑應該具有如下特點：高效轉染；安全；低細胞毒性；方法簡單；省時、經濟。

『肆』 siRNA轉染實驗

通常是建議用來稀釋siRNA和稀釋轉染試劑的培養基是無血清培養基。但我們課題組用的BIODAI轉染前後不需要換成無血清培養基。遇到特別的，可以在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養基，以防轉染後孵育階段細胞密度太大、營養不足導致的細胞死亡。

『伍』 轉染試劑的簡介

哺乳動物的轉染技術在60年代末70年代初即已引入。
目前, 將外源DNA 導入哺乳動物細胞的方法大致可分為兩大類，即生物方法和物理化學方法。物理化學方法中常用的有磷酸鈣法、顯微注射、電穿孔、脂質體介導的轉染，以及最近出現的以高分子聚合物為載體的基因傳遞技術。生物方法則主要是以病毒作為載體,通過病毒感染的方式將外源DNA 導入到細胞中, 其中以逆轉錄病毒及腺病毒轉染系統最為常用。
其中病毒載體的特點是整和效率高, 可使外源基因在宿主細胞中長期表達，缺點是存在潛在的安全危險性。電穿孔法及顯微注射法的特點是轉染率較高，缺點是需要昂貴的儀器，前者對細胞的損傷較大，後者在導入DNA 時需要一個細胞一個細胞地注射，不適合大量細胞研究的需要。
磷酸鈣在良好的轉染條件下，可以在293T等細胞的轉染達到較高的轉染效率。但磷酸鈣轉染有一個突出的問題，非常不穩定，尤其受PH值的影響非常大，在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準，保證質量，因為甚至偏離最優條件十分之一個PH都可能導致磷酸鈣轉染的失敗，經常即使最熟練的轉染實驗者也不能保證每次磷酸鈣轉染的成功，他們可能經常為莫名其妙的轉染失敗而沮喪。同時，他們還經常發現，往往小體積的轉染比如6孔板以下的轉染效果比較理想，可一換到大皿，經常轉染效率下降很快。磷酸鈣的先天缺陷往往是實驗梗阻的主要原因。

『陸』 rnaimax 轉染試劑 加多少

澆築前應將模板內的垃圾、泥土，鋼筋上的油污等雜物清除干凈，並檢查鋼筋的水泥砂漿墊塊、塑料墊塊是否墊好。如使用木模板時應澆水使模板濕潤。柱子模板的掃除口應在清除雜物及積水後再封閉。