提取動物細胞蛋白質的方法步驟

A. 如何提取動物細胞膜

倒入水中
讓c吸水脹破
然後離心
取上層清液過濾
就能得到c膜
哺乳動物成熟的紅細胞內只有血紅蛋白
無核無c器
c膜主要成分是磷脂
質量分數比蛋白質小
離心後會分層
c膜處於上層清液中
雞鴨血中的細胞器也會脹破
離心後同樣能分離

B. 蛋白質的提取

稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時需要均勻的攪拌，以利於蛋白質的溶解。提取的溫度要視有效成份性質而定。一方面，多數蛋白質的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度高利於溶解，縮短提取時間。但另一方面，溫度升高會使蛋白質變性失活，因此，基於這一點考慮提取蛋白質和酶時一般採用低溫（5度以下）操作。為了避免蛋白質提以過程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸，碘乙酸等）。
下面著重討論提取液的pH值和鹽濃度的選擇。
1、pH值
蛋白質，酶是具有等電點的兩性電解質，提取液的pH值應選擇在偏離等電點兩側的pH 范圍內。用稀酸或稀鹼提取時，應防止過酸或過鹼而引起蛋白質可解離基團發生變化，從而導致蛋白質構象的不可逆變化，一般來說，鹼性蛋白質用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白質用偏鹼性的提取液。
2、鹽濃度
稀濃度可促進蛋白質的溶，稱為鹽溶作用。同時稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質部分結合，具有保護蛋白質不易變性的優點，因此在提取液中加入少量NaCl等中性鹽，一般以0.15摩爾。升濃度為宜。緩沖液常採用0.02-0.05M磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液。

二、有機溶劑提取法

一些和脂質結合比較牢固或分子中非極性側鏈較多的蛋白質和酶，不溶於水、稀鹽溶液、稀酸或稀鹼中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑，它們具的一定的親水性，還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必須在低溫下操作。丁醇提取法對提取一些與脂質結合緊密的蛋白質和酶特別優越，一是因為丁醇親脂性強，特別是溶解磷脂的能力強；二是丁醇兼具親水性，在溶解度范圍內（度為10%，40度為6.6%）不會引起酶的變性失活。另外，丁醇提取法的pH及溫度選擇范圍較廣，也適用於動植物及微生物材料。

C. 細菌蛋白質提取方法

若為胞內可溶性蛋白，需使用破胞法（如超聲裂解），使內容物釋放，然後採用柱層析等步驟提取；若為胞內包涵體，細胞破碎後，離心，收集沉澱，採用變性/復性方法，獲得純度較高的蛋白；
若為胞外蛋白，需富集濃縮，再用常規方法提取。

D. 超聲法破碎細胞提蛋白質的具體步驟

這樣說吧，如果我們用原核表達載體表達一段目標基因，我們先把這個基因通過酶切連接的原核表達載體上，再轉化到大腸桿菌中進行誘導表達，常用的誘導物是IPTG，37度誘導表達4小時，這樣表達出的目標蛋白一般以包涵體的形式存在細菌內，然後用超聲破碎細菌，首先將吸取5ml的細菌放入試管中，然後放在超聲儀中，開80hz的頻率進行破碎細菌，待到細菌全部破碎，溶液變清亮為止，然後你可以洗滌沉澱，進行包涵體蛋白的收集，後面你可以做一個SDS-PAGE蛋白質電泳和Western-blot，這樣就可以確定你的要蛋白是不是你的蛋白。
最後，你可以大量的搖菌提取蛋白質了，祝你好運，我也是做這方面的研究，已經做到蛋白質電泳這一步了，祝你好運。

E. 蛋白質提取方法比較

1.機械破碎法（勻漿）

• 1

  利用機械力將細胞破碎。常用的設備：高速組織搗碎機，勻漿器，研缽等。

  不同組織的特性來選擇不同的方法，動物的胰肝腦一般較柔軟，用普通勻漿器研磨即可，而肌及心肌組織較韌，需預先攪碎成勻漿。

  

F. 如何從細胞中提取蛋白質

（一）水溶液提取法
稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質最常用的溶劑,通常用量是原材料體積的1-5倍,提取時需要均勻的攪拌,以利於蛋白質的溶解.提取的溫度要視有效成份性質而定.一方面,多數蛋白質的溶解度隨著溫度的升高而增大,因此,溫度高利於溶解,縮短提取時間.但另一方面,溫度升高會使蛋白質變性失活,因此,基於這一點考慮提取蛋白質和酶時一般採用低溫（5度以下）操作.為了避免蛋白質提以過程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制劑（如二異丙基氟磷酸,碘乙酸等）.
下面著重討論提取液的pH值和鹽濃度的選擇.
1、pH值蛋白質,酶是具有等電點的兩性電解質,提取液的pH值應選擇在偏離等電點兩側的pH 范圍內.用稀酸或稀鹼提取時,應防止過酸或過鹼而引起蛋白質可解離基團發生變化,從而導致蛋白質構象的不可逆變化,一般來說,鹼性蛋白質用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白質用偏鹼性的提取液.
2、鹽濃度稀濃度可促進蛋白質的溶,稱為鹽溶作用.同時稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質部分結合,具有保護蛋白質不易變性的優點,因此在提取液中加入少量NaCl等中性鹽,一般以0.15摩爾.升濃度為宜.緩沖液常採用0.02-0.05M磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液.
（二）有機溶劑提取法
一些和脂質結合比較牢固或分子中非極性側鏈較多的蛋白質和酶,不溶於水、稀鹽溶液、稀酸或稀鹼中,可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑,它們具的一定的親水性,還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液.但必須在低溫下操作.丁醇提取法對提取一些與脂質結合緊密的蛋白質和酶特別優越,一是因為丁醇親脂性強,特別是溶解磷脂的能力強；二是丁醇兼具親水性,在溶解度范圍內（度為10%,40度為6.6%）不會引起酶的變性失活.

G. 動植物DNA提取步驟是什麼

實驗內容方法步驟 提取DNA（1）破碎細胞，釋放DNA取5～10 mL雞血細胞懸液注入50 mL燒杯中，加蒸餾水20 mL，同時，用玻璃棒沿一個方向快速充分攪拌，使血細胞過度吸水破裂，細胞核內物質釋放出來，然後用紗布過濾取其濾液於500 mL燒杯中實驗中應抓住關鍵並注意以下幾點：(1)制備雞血細胞液時，雞血要在180 mL左右，並且在取新鮮雞血的同時加入抗凝劑，使血液分層，取下層血細胞沉澱。(2)獲取較多DNA的關鍵之一是向雞血細胞液加入足量的蒸餾水，以便使細胞膜和核膜破裂，核內物質釋放出來。(3)實驗中共有3次過濾。過濾時使用的紗布層數與取其濾液或黏稠物有關。第1、3次要收集其濾液，使用的紗布為1～2層，第2次是要收集其濾出的黏稠物，使用的紗布為多層。 (4)實驗中有6次攪拌，除最後一次攪拌外，前5次攪拌均要朝向一個方向，並且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步攪拌都要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，以防止DNA分子斷裂。(5)實驗中有兩次使用蒸餾水。一次在第1步，加水是為了使血細胞吸水膨脹破裂，加水後必須充分攪拌，不應少於5 min，使血細胞充分破裂；第二次加蒸餾水是在第3步，加水是為了稀釋NaCl溶液。(6)實驗中有三次加NaCl溶液。在步驟2中，當加入NaCl後，必須充分晃動燒杯，使二者混合均勻，加速染色質中DNA與蛋白質分離，使DNA充分游離並溶解在NaCl溶液中。在步驟5中，加NaCl溶液也是為了DNA的再溶解，不過這時溶液中蛋白質含量已很少。在步驟8中，加的NaCl溶液的濃度比前兩次低得多，但還是為溶解DNA。(7)在步驟7中，沉澱DNA必須使用冷酒精(至少在5℃以下存放24 h)，並且將1份含DNA的NaCl溶液加入到2份的冷酒精中。如果懸浮在溶液中的DNA絲狀物較少，可將混合液放入冰箱中再冷卻幾分鍾。(8)盛放雞血細胞液的容器和實驗中的燒杯和試管最好是塑料制的，因為玻璃製品表面帶電荷，DNA中的磷酸基帶相反的電荷，會被吸附於玻璃表面，減少DNA含量。(2)溶解核內的DNA：在濾液中加入2 mol／L的NaCl40 mL，並用玻璃棒沿一個方向攪拌1 min，核中DNA游離並充分溶解，染色質中的DNA和蛋白質分離(3)析出含DNA黏稠物：沿燒杯內壁緩慢加入蒸餾水，同時用玻璃棒沿一個方向不停地輕輕攪拌。由於溶液濃度的下降，使得DNA溶解度下降，蛋白質溶解度上升，DNA析出成白色絲狀黏稠物，當黏稠物不再增加時，停止加入蒸餾水。（這時溶液中NaCl的物質的量濃度相當於0.14 mol／L）(4)濾取含DNA黏稠物：用多層紗布過濾，取紗布上DNA的黏稠物 提純DNA(5)DNA黏稠物再溶解：取含DNA黏稠物於50 mL燒杯內，加入2 mol/L的NaCl溶液20 mL，用玻璃棒沿一個方向不停攪拌3min，使黏稠物盡可能多地溶解(6)過濾含DNA的NaCl溶液：用兩層紗布過濾DNA的NaCl溶液，取其濾液(7)提取含雜質較少的DNA：在濾液中加入冷卻的95%無水乙醇，並用玻璃棒沿一個方向輕輕攪拌，由於DNA不溶於酒精，會出現乳白色絲狀物，用玻璃棒將絲狀物捲起，並用濾紙吸去表面的水分 鑒定DNA(8)DNA的鑒定：兩支試管中各加入0.015 mol/L的NaCl溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，攪拌使其充分溶解後，向兩支試管中分別加入4 mL二苯胺試劑，混勻後沸水浴中加熱5 min，待試管冷卻後，比較兩試管的顏色變化，將發現加入DNA的試管中溶液呈藍色，從而鑒定DNA的存在 （1）破碎細胞，釋放DNA取5～10 mL雞血細胞懸液注入50 mL燒杯中，加蒸餾水20 mL，同時，用玻璃棒沿一個方向快速充分攪拌，使血細胞過度吸水破裂，細胞核內物質釋放出來，然後用紗布過濾取其濾液於500 mL燒杯中(2)溶解核內的DNA：在濾液中加入2 mol／L的NaCl40 mL，並用玻璃棒沿一個方向攪拌1 min，核中DNA游離並充分溶解，染色質中的DNA和蛋白質分離(3)析出含DNA黏稠物：沿燒杯內壁緩慢加入蒸餾水，同時用玻璃棒沿一個方向不停地輕輕攪拌。由於溶液濃度的下降，使得DNA溶解度下降，蛋白質溶解度上升，DNA析出成白色絲狀黏稠物，當黏稠物不再增加時，停止加入蒸餾水。（這時溶液中NaCl的物質的量濃度相當於0.14 mol／L）(4)濾取含DNA黏稠物：用多層紗布過濾，取紗布上DNA的黏稠物(5)DNA黏稠物再溶解：取含DNA黏稠物於50 mL燒杯內，加入2 mol/L的NaCl溶液20 mL，用玻璃棒沿一個方向不停攪拌3min，使黏稠物盡可能多地溶解(6)過濾含DNA的NaCl溶液：用兩層紗布過濾DNA的NaCl溶液，取其濾液(7)提取含雜質較少的DNA：在濾液中加入冷卻的95%無水乙醇，並用玻璃棒沿一個方向輕輕攪拌，由於DNA不溶於酒精，會出現乳白色絲狀物，用玻璃棒將絲狀物捲起，並用濾紙吸去表面的水分 實驗中應抓住關鍵並注意以下幾點：(1)制備雞血細胞液時，雞血要在180 mL左右，並且在取新鮮雞血的同時加入抗凝劑，使血液分層，取下層血細胞沉澱。(2)獲取較多DNA的關鍵之一是向雞血細胞液加入足量的蒸餾水，以便使細胞膜和核膜破裂，核內物質釋放出來。(3)實驗中共有3次過濾。過濾時使用的紗布層數與取其濾液或黏稠物有關。第1、3次要收集其濾液，使用的紗布為1～2層，第2次是要收集其濾出的黏稠物，使用的紗布為多層。 (4)實驗中有6次攪拌，除最後一次攪拌外，前5次攪拌均要朝向一個方向，並且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步攪拌都要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，以防止DNA分子斷裂。(5)實驗中有兩次使用蒸餾水。一次在第1步，加水是為了使血細胞吸水膨脹破裂，加水後必須充分攪拌，不應少於5 min，使血細胞充分破裂；第二次加蒸餾水是在第3步，加水是為了稀釋NaCl溶液。(6)實驗中有三次加NaCl溶液。在步驟2中，當加入NaCl後，必須充分晃動燒杯，使二者混合均勻，加速染色質中DNA與蛋白質分離，使DNA充分游離並溶解在NaCl溶液中。在步驟5中，加NaCl溶液也是為了DNA的再溶解，不過這時溶液中蛋白質含量已很少。在步驟8中，加的NaCl溶液的濃度比前兩次低得多，但還是為溶解DNA。(7)在步驟7中，沉澱DNA必須使用冷酒精(至少在5℃以下存放24 h)，並且將1份含DNA的NaCl溶液加入到2份的冷酒精中。如果懸浮在溶液中的DNA絲狀物較少，可將混合液放入冰箱中再冷卻幾分鍾。(8)盛放雞血細胞液的容器和實驗中的燒杯和試管最好是塑料制的，因為玻璃製品表面帶電荷，DNA中的磷酸基帶相反的電荷，會被吸附於玻璃表面，減少DNA含量。(8)DNA的鑒定：兩支試管中各加入0.015 mol/L的NaCl溶液5 mL，將絲狀物放入其中一支試管中，攪拌使其充分溶解後，向兩支試管中分別加入4 mL二苯胺試劑，混勻後沸水浴中加熱5 min，待試管冷卻後，比較兩試管的顏色變化，將發現加入DNA的試管中溶液呈藍色，從而鑒定DNA的存在</SPAN></SPAN>

H. 提純蛋白的步驟

蛋白純化方法很多，也很復雜，一般程序如下：分離純化某一特定蛋白質的一般程序可以分為前處理、粗分級、細分級三步。前處理分離純化某種蛋白質，首先要把蛋白質從原來的組織或細胞中以溶解的狀態釋放出來並保持原來的天然狀態，不丟失生物活性。為此，動物材料應先剔除結締組織和脂肪組織，種子材料應先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質的污染，油料種子最好先用低沸點的有機溶劑如乙醚等脫脂。然後根據不同的情況，選擇適當的方法，將組織和細胞破碎。動物組織和細胞可用電動搗碎機或勻漿機破碎或用超聲波處理破碎。植物組織和細胞由於具有纖維素、半纖維素和果膠等物質組成的細胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和適當的提取液一起研磨的方法或用纖維素酶處理也能達到目的。細菌細胞的破碎比較麻煩，因為整個細菌細胞壁的骨架實際上是一個借共價鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅韌。破碎細菌細胞壁的常用方法有超聲波破碎，與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。組織和細胞破碎後，選擇適當的緩沖液把所要的蛋白提取出來。細胞碎片等不溶物用離心或過濾的方法除去。如果所要的蛋白主要集中在某一細胞組分，如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質等，則可利用差速離心的方法將它們分開，收集該細胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質細胞器結合的，則必須利用超聲波或去污劑使膜結構解聚，然後用適當介質提取。粗分級分離當蛋白質提取液（有時還雜有核酸、多糖之類）獲得後，選用一套適當的方法，將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來。一般這一步的分離用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大，既能除去大量雜質，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大，又不適於用沉澱或鹽析法濃縮，則可採用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空乾燥或其他方法進行濃縮。細分級分離樣品經粗分級分離以後，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進一步純化，一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳法，包括區帶電泳、等電點聚焦等作為最後的純化步驟。用於細分級分離的方法一般規模較小，但解析度很高。結晶是蛋白質分離純化的最後步驟。盡管結晶過程並不能保證蛋白一定是均一的，但是只有某種蛋白在溶液中數量上佔有優勢時才能形成結晶。結晶過程本身也伴隨著一定程度的純化，而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白。由於結晶過程中從未發現過變性蛋白，因此蛋白的結晶不僅是純度的一個標志，也是斷定製品處於天然狀態的有力指標。

I. 急:請問從動物肌肉組織中提取全部蛋白質的方法和相關試劑

普通的Westerning Blotting Sample准備階段時候不就是提取全部蛋白嗎？要不看看GE Healthcare，應該有這樣的Kit。

J. 細胞培養液中蛋白的提取方法

蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段,現介紹幾種常用的濃縮技術.
1、透析袋濃縮法
利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種.將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替）,結扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液,將裝有蛋白液的透析袋放入即可.吸水劑用過後,可放入溫箱中烘乾或自然乾燥後,仍可再用.
2、冷凍乾燥濃縮法
這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法,它既使蛋白質不易變性,又保持蛋白質中固有的成分.它是在冰凍狀態下直接升華去除水分.具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍,然後移置乾燥器內（乾燥器內裝有乾燥劑,如NaOH、CaCl2和硅膠等）.密閉,迅速抽空,並維持在抽空狀態.數小時後即可獲得含有蛋白的乾燥粉末.乾燥後的蛋白質保存方便,應用時可配成任意濃度使用.也可採用凍干機進行冷凍乾燥.
3、吹乾濃縮法
將蛋白溶液裝入透析袋內,放在電風扇下吹.此法簡單,但速度慢,且溫度不能過高,最好不要超過15 ℃.
4、超濾膜濃縮法
此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出,而蛋白質存留於膜上達到濃縮目的.有兩種方法進行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內,在不斷攪拌之下過濾；另一種是將蛋白液裝入透析袋內置於真空乾燥器的通風口上,負壓抽氣,而使袋內液體滲出.
5、凝膠濃縮法
選用孔徑較小的凝膠,如SephadexG25或G50,將凝膠直接加入蛋白溶液中.根據干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數而稱取所需的干膠量.放入冰箱內,凝膠粒子吸水後,通過離心除去.
6、濃縮膠濃縮法
濃縮膠是一種高分子網狀結構的有機聚合物,具有很強的吸水性能.每克干膠可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物質,如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等,適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質.濃縮後,蛋白質的回收率可達80％～90％.比濃縮膠應用方便,直接加入被濃縮的溶液中即可.必須注意,濃縮溶液的pH值應大於被濃縮物質的等電點,否則在濃縮膠表面產生陽離子交換,影響濃縮物質的回收率.
（轉的!不過也希望能幫到你）