糖鏈測定的方法和步驟

A. 苷中糖的鑒定方法

結構鑒定 1糖的種類和比例 一般是將其苷鍵全部水解，然後再用紙色譜或薄層色譜的方法檢出糖的種類，經顯色後用薄層掃描的方法測定出各糖之間的分子比。當然也可採用氣相色譜或HPLC的方法對各單糖進行定性定量分析。 2糖與苷元的連接位置 糖連接位置的測定多是將被測物全甲基化，然後水解所有的苷鍵，用氣相色譜的方法對水解產物進行定性定量分析。通常具有游離羥基的部位即是糖的連接位點。目前多用苷化位移來確定。糖的端基羥基成苷後，端基碳（C1）和苷元的α-C的化學位移均向低場移動，而相鄰的碳（β-C）稍向高場移動，偶爾也有稍向低場移動的，這種苷化前後的化學位移變化，稱做苷化位移。 3糖的連接順序及位置 早期解決糖鏈連接順序的方法主要是部分水解法，即稀酸水解、甲醇解、乙醯解、鹼水解等方法，將糖鏈水解成較小的片段（各種低聚糖），然後根據水解所得的低聚糖推斷整個糖鏈的結構；質譜分析是解決低聚糖及其苷中糖連接順序的一個有力工具，在了解了糖的組成後，可根據質譜中的裂解規律和該化合物的裂解碎片推測低聚糖及其苷中糖鏈的連接順序；現在測定糖鏈結構最常用的方法是NMR和2D-NMR法。

B. 糖鏈抗原72-4小於1.500常嗎

您好，糖類抗原是腫瘤標志物的一種，是腫瘤的一種篩選指標，從化驗結果看，明顯高於正常，需要做個腹部彩超，大便常規看一下，如果大便有潛血，還需要做腸鏡檢查。
胰腺癌、肝膽系癌、胃癌、結直腸癌的CA19-9水平分別是正常均值的683、535、279、115倍。而陽性率以胰腺癌為最高，故CA19-9是胰腺癌較好的標志。
胰腺癌診斷中的應用
大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明顯增高。如果以正常參考范圍上限（37U/mL）為診斷標准，敏感性和特異性均可達90%以上；
CA19-9水平與腫瘤的階段有關，血清中含量的高低提示手術的難易程度；
術前CA19-9水平對預後有一定提示作用，低者預後好；
術後CA19-9水平降至正常者生存期長於未下降者；
腫瘤復發時，CA19-9可再度升高，並且發生於影像學診斷之前。因此可用作監測腫瘤的復發。
其他惡性腫瘤
卵巢癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、食管癌、乳腺癌的陽性率較低。應用如下：
胃癌的陽性率約為25%-60%，且與腫瘤分期有關。對於胃癌患者，同時檢測CEA可提高陽性率；
直腸、結腸癌患者，陽性率為18%-58%，與腫瘤分期有關。同時測定CEA可提高敏感度，如果治療有效，CA19-9下降速度較CEA快；
膽囊癌、膽管癌、膽道癌的CA19-9陽性率較高，可用於區別胰腺癌、膽管癌合並的黃疸與阻塞性黃疸。後者的CA19-9水平較低。
使用原則：CA19-9與AFP、CEA聯合檢查，有助於提高胃腸道腫瘤的診斷效率。

C. 多糖及單糖的測定方法

苯酚-硫酸法需要多糖的純品和特定的酶。

蒽酮-硫酸法 多糖在濃硫酸水合產生的高溫下迅速水解，產生單糖，單糖在強酸條件下與苯酚反應生成橙色衍生物。

在波長490nm左右處和一定濃度范圍內，該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關系，從而可用比色法測定其含量，所用的單糖對照品盡量採用與其多糖組成一致或為含量較高的單糖，這樣測得的值較准確。

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由一種類型的單糖組成的有葡萄糖、甘露聚糖、半乳聚糖等，由二種以上的單糖組成的雜多糖（hetero polysaccharide）有氨基糖的葡糖胺葡聚糖等，在化學結構上實屬多種多樣。就分子量而論，有從0.5萬個分子組成的到超過106個的多糖。

比10個少的短鏈的稱為寡糖。不過，就糖鏈而論即使是寡糖，在寡糖上結合了蛋白質和脂類的，就整個分子而論，如果是屬於高分子。

則從廣義上來看也屬於多糖，因此特稱為復合多糖 （conjugated polysaccharide，complex poly－saccharide）或復合糖質（glycoconjugate）（糖蛋白、糖脂類、蛋白多糖）。

D. 糖鏈抗原15-3的注意事項

(1) 癌抗原15-3常被用於評價乳腺癌治療的效果、預測復發與轉移的參考指標。術後復發者癌抗原升高較臨床症狀為早，因此測定癌抗原15-3可預測乳腺癌的復發。(2) 本方法靈敏度為0.2u/ml，測定范圍0-240u/ml與其他腫瘤標志物(CEA、CA-19-9及CA-125)無交叉反應。(3) 試劑必須在2-8℃冰箱內保存，取出使用後保存期不宜超過8天(2-8℃)。ELSA管必須在2-8℃密封保存。(4) 樣品稀釋時宜採用聚乙烯管。(5) 溫育過程中，兩次洗滌過程要求操作一致，否則影響實驗結果。

E. 請教關於糖基化程度的分析方法

糖基化程度的分析過程大致如下：首先是鑒定糖蛋白，即確定糖蛋白的存在；其次是富集糖蛋白，即糖蛋白的分離存化。

糖蛋白的檢測大致有以下幾種：放射性標記法、分子熒游標記法、電泳法、凝集素標記法、抗體標記法和化學酵素法。

獲得糖基化蛋白的方法主要是電泳法和層析法。電泳法即通過電泳的方法先得到糖蛋白條帶或蛋白點，再通過電洗脫或透析的方法得到糖蛋白。此方法較為費時，且在操作中易使蛋白變性。而層析法則具有快速、准確、解析度高、穩定性好等特點，是分析糖蛋白的理想手段。目前，利用抗體、凝集素進行親和層析已成為分離存化糖蛋白的主要方法。

糖基化氨基酸位點的鑒定中，Edman降解法冗長，需要高超的實驗技巧和較多的蛋白質，且無法處理N－端封閉的蛋白質。因此，隨著質譜技術的發展，此法已不在被廣泛使用。核磁共振技術也可用於糖基化氨基酸位點的鑒定。這種方法可在液態溶液中直接進行蛋白質結構測定。糖鏈結構的鑒定也採用質譜技術、毛細管電泳技術、氣相色譜技術及凝集素親和技術。