Bradford法測定蛋白質濃度:實驗原理。
雙縮脲法(Biuret法)和Folin—酚試劑法(Lowry法)的明顯缺點和許多限制,促使科學家們去尋找更好的蛋。
取6支試管分別標號,前5支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,不加標准蛋白溶液,每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致。
將液體混合均勻,在室溫下放置30分鍾,以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照,於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。
(1)體內蛋白質代謝的測量的主要方法擴展閱讀:
紫外吸收法:
大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收,這是由於蛋白質中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用於測定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。
取9支試管分別標號,前8支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,1號試管不加標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,而不加標准蛋白溶液,每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致,將液體混合均勻,在280nm波長處進行比色,記錄吸光度值。
『貳』 簡述營養狀態評定的方法。
營養狀態評定的方法是:
(1)人體測量:體重低於標准體重的15%,提示存在營養不良。三頭肌皮皺厚度是測定體脂貯備的指標,上臂周徑測定可反映全身肌肉及脂肪的狀況。上述測定值若低於標准值的10%,則提示存在營養不良。
(2)三甲基組氨酸測定:三甲基組氨酸是肌纖蛋白和肌球蛋白的最終分解產物,不再被合成代謝所利用。尿中三甲基組氨酸排出量可反映機體蛋白質的分解量。
(3)內臟蛋白測定:包括血清白蛋白、轉鐵蛋白及前白蛋白濃度測定。是營養評定的重要指標。營養不良時該測定值均有不同程度的下降。
(4)淋巴細胞計數:周圍血淋巴細胞計數可反映機體免疫狀態。計數<1500常提示營養不良。吵洞
(5)氮平衡試驗:在沒有消化道及其他額外的體液丟失(如消化道瘺或大面積升橘枯燒傷等伍陵)的情況下,機體蛋白質分解後基本是以尿素形式從尿中排出。出氮量為24h尿液中尿素氮含量加常數2~3g(表示以非尿素氮形式排出的含氮物質和經糞便、皮膚排出的氮)。入氮量則是靜脈輸入的氨基酸液的含氮量。由此,可測得病人是處於正負氮平衡狀態,指導營養支持治療。
『叄』 測定蛋白質含量的方法有哪些
1、凱氏定氮法
凱氏定氮法是由丹麥化學家凱道爾於1833年建立的,現已發展為常量、微量、平微量凱氏定氮法以及自動定氮儀法等,是分析有機化合物含氮量的常用方法。
凱氏定氮法的理論基礎是蛋白質中的含氮量通常占其總質量的16%左右(12%~一19%),因此,通過測定物質中的含氮量便可估算出物質中的總蛋白質含量(假設測定物質中的氮全來自蛋白質),即: 蛋白質含量=含氮量/16%。
2、紫外吸收光譜法
紫外吸收光譜法又稱紫外分光光度法,是根據物質對不同波長的紫外線吸收程度不同而對物質組成進行分析的方法。此法所用儀器為紫外吸收分光光度計或紫外-可見吸收分光光度計。
光源發出的紫外光經光柵或棱鏡分光後,分別通過樣品溶液及參比溶液,再投射到光電倍增管上,經光電轉換並放大後,由繪制的紫外吸收光譜可對物質進行定性分析。
(3)體內蛋白質代謝的測量的主要方法擴展閱讀
蛋白質含量測定的意義:
膳食蛋白質符合人的需要時,可維持正常代謝,生成抗體,抵抗感染,有病也易恢復。相反,蛋白質供給不足時,會減輕體重,易患貧血,容易感染疾病;創傷、骨折不易癒合;嚴重缺乏時,血漿蛋白降低,可引起浮腫。
此外癌症與蛋白質攝入量不足也有一定關系。但是,蛋白質攝入過多也可造成腎臟負擔。食物蛋白質在體內代謝所生成的尿酸、氨、酮體等累積過多,可導致衰老;而氨還對機體有毒性,不僅會陡然增加肝臟負擔,還會增加胃腸負荷,引起肝腎受累以及消化不良等症。所以,蛋白質的攝入量要適當。
『肆』 代謝研究的方法有哪些
代謝研究的方法有以下幾種:
1. 實驗室研究法
實驗室研究法是代謝研究的基礎方法。研究者可以通過控制實驗條件,對特定的代謝過程進行細致的觀察和分析。例如,通過改變實驗對象的飲食、運動等條件,觀察其生理變化,進而探究代謝的變化規律。此外,實驗室研究還可以利用體外實驗,對細胞或組織進行代謝研究,以揭示其內部的代謝機制和影響因素。
2. 體內測定法
體內測定法是通過測量人體或動物體內的代謝物質變化來研究代謝的方法。這種方法可以直接觀察到生物體內的真實代謝情況,因此在代謝研究中具有重要價值。體內測定法通常包括呼吸測定法、血樣分析法等。呼吸測定法可以測定生物體的氧氣消耗量和二氧化碳產生量,從而了解代謝速率和能量消耗情況;血樣分析法則是通過採集生物體的血液樣本,分析其中的代謝物質含量變化,來探究代謝過程。
3. 影像學技術法
隨著科技的發展,影像學技術在代謝研究中也得到了廣泛應用。例如,核磁共振技術(NMR)可以用於檢測生物體內的代謝物質種類和含量;正電子發射斷層掃描(PET)和功能性磁共振成像(fMRI)等技術則可以通過觀察生物體內部的代謝活動變化,來揭示其代謝機制和功能狀態。這些技術為代謝研究提供了強有力的工具,有助於更深入地理解代謝過程的本質和機制。
4. 分子生物學法
分子生物學方法在代謝研究中也有著重要的地位。通過分子生物學技術,如基因測序、蛋白質分析等,可以深入研究代謝相關的基因和蛋白質,從而揭示代謝的分子機制和調控網路。此外,基因編輯技術如CRISPR-Cas9等工具的發展,也使得研究者能夠更精確地操控代謝相關基因,為代謝研究開辟了新的途徑。這些方法不僅有助於理解代謝的基本機制,還有助於揭示代謝性疾病的發病機制,為疾病治療提供新的思路和方法。