『壹』 超詳細細胞計數步驟
細胞計數是科學研究中不可或缺的部分，旨在准確、重復性和統計意義上獲取細胞數量和存活率。常用的計數工具有細胞計數板與細胞計數儀。
細胞計數板是通過激光蝕刻的網格輔助在光學顯微鏡下計數樣本細胞，得出實驗樣品細胞總數。其核心原理在於中央有兩個細胞計數池，池上有網格劃分成9個主要方格，角上四個方格細分16個更小方格，中心主要方格則被劃分為25個更小方格，每個小方格進一步細分16個微型方格。計數時，樣品從上樣口加入，藉助毛細作用填滿網格。
執行細胞計數板步驟如下：
首先，清潔並擦拭細胞計數池和蓋玻片以去除纖維、指紋或水印。其次，通過輕輕搖動細胞懸浮液，使其單個細胞分散。接著，使用微量移液器吸取10微升細胞懸浮液至上樣口，使其通過毛細作用進入細胞計數池，填滿網格。隨後，讓細胞靜置，選擇適當物鏡，將細胞計數板置於顯微鏡載物台上。在顯微鏡下觀察細胞，若每個大方格內細胞少於5個，需重新離心，用更小體積重懸細胞；若細胞相互重疊或密度太大難以區分，需要再次稀釋至更大體積。注意記錄稀釋倍數，以便計算細胞濃度。
在計數過程中，根據樣品細胞密度決定選取方格大小。細胞數量較少時，計數一個角落方格所有細胞；數量適中時，選擇16個較小方格之一；密度較高時，計數中央25個小方格之一。確保每個方格至少有20-50個細胞進行計數。計數原則是記上不記下，記左不記右，並計算四個同樣大小方格內的平均細胞數。計算1毫升體積中的細胞數，將平均細胞數乘以10000（網格中的大方格體積為萬分之一毫升）。如果計數的是大方格，乘以1；較小方格乘以16；中央方格乘以25。若細胞懸浮液在上樣前已稀釋，還需乘以稀釋倍數。
細胞總數計算公式：已知1毫升中細胞總數為5E6個/mL，若樣品體積為5毫升，細胞總數為5E6個/mL * 5mL = 2.5E7個細胞。若取的細胞懸液已稀釋，總數還需乘以稀釋倍數。
細胞計數完成後，應清潔蓋玻片和細胞計數池。另外，可以測定細胞存活率。使用96孔板進行細胞鋪板，是細胞計數與存活率測定的後續步驟。
『貳』 科研 | 血細胞計數板的使用方法
普通光學顯微鏡、血球計數板、吸水紙、蓋玻片、吸管、移液槍、槍頭、離心管、鑷子（取用蓋玻片）、無水乙醇或 95% 乙醇溶液、
如果需要將細胞進行稀釋需要加入培養基嗎？還是生理鹽水，緩沖溶液都可？
二、實驗步驟
血球計數板的准備：取血球計數板，檢測血球計數板是否清潔，如果有污垢，應先洗滌干凈並擦乾。用無水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭計數板後，用綢布擦凈，另擦凈蓋玻片一張。先在低倍鏡下，熟悉計數板和計數區的構造。
加蓋玻片，蓋住血球計數板兩邊的小槽。
制備細胞懸液：將動物細胞用稀釋液制備成適當濃度的細胞懸液備用。
（如果需要染色，需要在充液之前將染色液按照一定的比例加入細胞懸液中）
充液: 用滴管或者移液器將一小滴震盪混勻的稀釋的細胞懸液滴在蓋玻片邊緣的玻片上，細胞懸液借毛細管現象自動滲入計數室中。如果加入的液體過多，會進入計數取兩側的凹槽內，使蓋玻片浮起，需要用濾紙把多餘的液體吸出。
避免滴入過少細胞懸液，易產生氣泡。如果加入的過少，需要洗凈計數板，乾燥後重做。
充液後靜置1-2min，待細胞下沉後，方可計數。
先用低倍鏡找到血球計數器的計數區。
計數結束後，清洗計數板，整理試驗台。
三、計數原理
1、熟悉血細胞計數板的計數區
2、計數時只計數中央
3、細胞濃度計算
細胞濃度計算公式：
細胞濃度(細胞個數/mL) = (80小方格內細胞個數÷80)×400×104×稀釋倍數
4、細胞計數原則
計數區每個中方格內16個小方格要依次計數，遵循 S形計數原則。
在計數靠近中方格邊線（為雙線）的細胞時，遵循「計上不計下，計左不計右」原則。
如發現各中方格中的細胞數目相差20個以上，表明細胞分布不均勻，須重新計數。
四、實驗注意事項
血球計數板為易碎品，請務必輕拿輕放。
檢查計數板，確保清潔。
方格網的分隔線無色，在相差顯微鏡下更容易看到。
充液時，避免滴入過多細胞懸液，溢出並流入兩側槽內，使蓋玻片浮起。避免滴入過少細胞懸液，易產生氣泡。
計數時，只計數完整的細胞，若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數。
二次重復計數誤差不應超過 ±5%
如果細胞數量較多的情況下，可取一滴（或100ul）細胞混懸液＋八滴（或800ul）細胞培養液＋一滴（或100ul）苔盼藍，這樣最終稀釋倍數為十倍。
五、染色計數
如果需要了解細胞生活狀態和鑒別細胞死活，確定細胞接種濃度和數量以及了解細胞存活率和增殖度，如用酶消化制備的細胞懸液中細胞活力的鑒別，凍存細胞復甦後的活力檢測等。
細胞懸液制備後，常用活體染料台盼藍對細胞進行染色，進行細胞計數。台盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高，可使染料進入細胞內而使細胞著色（藍色）。
1、用滴管吸取 0.4% 台盼藍染液，按 1∶1 比例加入細胞懸液中。
2、鏡下觀察，凡折光性強而不著色者為活細胞，染上藍色者為死細胞。
3、計數細胞後，計算細胞懸液濃度並求出存活與死亡細胞數的比例。
參考網址：
https://www.icourse163.org/learn/XMU1207467801tid=1207788203#/learn/contenttype=detail&id=1213913014&cid=1217906593（中國大學慕課-細胞與顯微技術實驗課程）
http://paper.dxy.cn/article/501668（丁香園-獻給初學者：手把手教你做細胞計數實驗）
文章文字稿整理自中國大學慕課
『叄』 細胞計數的通用步驟和注意事項
細胞計數是生物學實驗中至關重要的步驟，主要用於評估細胞的數量和生長狀態。在實驗中，它對於監測細胞培養密度、研究不同條件下的細胞生長效果至關重要。細胞計數方法主要分為直接計數和間接計數，其中血球計數板計數法是常用的直接計數法，它涉及胰蛋白酶消化細胞、制備單細胞懸液並藉助顯微鏡進行計數。
血球計數板計數操作步驟如下：首先，消化或收集細胞並製成單細胞懸液。接著，用酒精擦拭計數板，蓋上蓋玻片，吸取20微升懸液滴入計數板，使用10倍物鏡觀察，計數25個格子內的細胞。然後，根據公式計算細胞濃度和總數。值得注意的是，計數過程中需確保細胞懸液充分分散，避免細胞團導致誤差，同時遵循特定的計數規則，如忽略邊緣線上的細胞。
血球計數板雖然成本低廉，但人工操作較多，易產生誤差。在使用時要注意細胞懸液的准備，及時操作以防止細胞聚集，以及正確處理細胞團的計數問題。如果細胞成團，可以嘗試裂解細胞後計數細胞核。實驗過程中，還要注意細胞數量的適宜范圍，過多或過少都可能影響結果准確性，需要適當調整計數區域和方法。
以上是細胞計數通用步驟和注意事項的詳細解釋，希望對你的實驗研究提供幫助。
『肆』 血球計數板使用方法
血球計數板是用於測定微生物數量的精密工具。在進行操作前，應將待測菌懸液稀釋至適當濃度，一般斜面稀釋100倍，以確保每小格內的菌體數量可計數。
接著，准備一塊潔凈的血球計數板，用蓋玻片覆蓋計數區。將菌懸液均勻搖勻後，用滴管吸取適量液體，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片邊緣滴入，讓菌懸液自行填滿計數區，注意避免氣泡產生，並用吸水紙吸去多餘液體。
等待一段時間，讓細胞沉降，不再隨液體漂移。然後，將血球計數板置於顯微鏡下，先使用低倍鏡找到計數區，再切換至高倍鏡進行觀察與計數。在觀察時，應適度減弱光線強度，以便更清晰地識別細胞。
對於16中方格組成的計數區，需計數左上、左下、右上、右下的4個中方格（共100個小格）內的菌數。若計數區有25中方格，則還需計入中央1中方格的菌數（共80個小格）。為確保計數准確性，應統一規定如何處理位於格線上的細胞。例如，如果菌體位於大方格的線上，僅計數上線不計下線，僅計數左線不計右線，以減少誤差。
對於出芽的酵母菌，當芽體達到母細胞大小的一半時，可將其作為兩個菌體計算。每個樣品應重復計數2-3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），並根據公式計算出每毫升（克）菌懸液所含細胞數量。
完成計數後，小心取下蓋玻片，用清水沖洗血球計數板，避免使用硬物洗刷或抹擦，以保護網格刻度。將血球計數板自然晾乾或用吹風機吹乾後，存放在盒內。
血球計數板被用以對人體內紅、白血球進行顯微計數之用，也常用於計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數量，是一種常見的生物學工具
『伍』 血細胞怎麼做計數實驗
實驗
目的原理 了解血細胞計數的原理並掌握紅細胞、白細胞、血小板計數的方法，紅細胞計數結果結合血紅蛋白值還可以計算出紅細胞平均血紅蛋白量(MCH)可作為生理機能檢查和臨床診斷的指標。用相應的稀釋液將血液稀釋若干倍(另有抗凝、固定、著色作用)，置於計數室中，在顯微鏡下計數一定容積內的血細胞數。 稀釋血液有血細胞吸管法和試管法，本實驗採用後者。
實驗對象與用品 雞或家兔。血細胞計數板、專用蓋玻片、吸血管、顯微鏡、手撳計數機、血細胞稀釋液、拭鏡紙、毛筆。
方法步驟
(一)熟悉計數室
血細胞計數板系一長方形厚玻片，常用的改良牛氏(Improved-Neubauer) 計數板在中央橫溝的兩邊各有一計數室，兩計數室結構完全相同。計數室較兩邊的蓋玻片支柱低0.1毫米。因此，放上蓋玻片時，計數板與其間距即計數室空間的高為0.1毫米(圖8-1)。在低倍顯微鏡下可見計數室被雙線劃分成９個邊長為１毫米的大方格。四角的大方格又各分為１６個中方格，這是用來計數白細胞的。中央大方格被劃分為２５個中方格，每一中方格又劃分成１６個小方格(圖8－2稱２５×１６，也有的計數板為１６×２５的，小方格面積一致)。中央大方格的四角及中心５個中方格(１６×２５者則為四角上的中方格)為紅細胞或血小板計數范圍。
(二)紅細胞計數
先用試管稀釋法制備禽類血細胞懸液：將禽類紅細胞稀釋液Ⅰ、Ⅱ分別置水浴鍋中預熱到４１～４２℃，取Ⅰ液１mL於試管中，用吸血管加入新鮮雞血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混勻，置該水浴鍋中保溫５０s左右，置室溫，即為待檢的血細胞懸液。可用於充液計數。取干潔的計數板，置於水平的顯微鏡載物台上，蓋上蓋玻片，使兩側各空出少許。搖勻血細胞懸液，用滴管吸取，將滴管尖輕輕置於蓋玻片邊緣外，讓滴出的血細胞懸液憑毛細管作用吸入計數室內，剛好充滿計數室為宜(圖8－3)。靜置２min後計數，先用低倍鏡觀察，不均勻則拋棄。計數時用虹彩、集光器、反光鏡等調節入射光角度和強度，認清 計數室位置。採用「由上至下，由左至右，順序如弓」的順序，對壓邊線細胞採取「數上不數下，數左不數右」的原則(圖8～4)。依次計數並記錄５個中方格中分別有多少個紅細胞。
(三)血小板計數
採取血液並立即與抗凝劑混合(由於血小板具有趨向於凝集和粘附於異物表面的特性)。以血小板稀釋液(１０％EDTANa2 １０mL與０.８％NaCl９０mL組成)將血液稀釋２００倍，混勻後滴入血細胞計數室內，靜置１５min，待血小板下沉後。於高倍鏡下計數(同紅細胞 計數)。在高倍鏡下血小板呈橢圓形、圓形或不規則的折光小體分布於紅細胞間，注意與雜質相區別。也可用復方尿素稀釋液稀釋血液，應靜置２０min以上，待紅細胞充分溶解後再充液計數。
(四)計算
按計數室構造及血液稀釋倍數,將血細胞計數結果換算成每立方毫米中血細胞的個數。以每１００mL血液中的血紅蛋白量（g）乘以１０再除以紅細胞數（106/mm3）得紅細胞平均血紅蛋白量（MCN，單位μμg）。
(五)儀器洗滌
計數板、蓋玻片和測定管用清水沖洗，再用綢布或細布沾干。
要求與思考題
１.計算結果，報告中簡要說明計算過程。求出本組同學測定的均值並評價之。
２.了解各類稀釋液成分，分析各物質的作用。
注意事項
１.充液前應充分混勻血細胞懸液，充液要連續、適量，充液後應待血細胞下沉後再計
數。
２.計數板、蓋玻片、吸血管及測定管等用過後必須立即按要求洗滌干凈。
組織建議 將相同類型的計數板集中在一個組內，便於指導。本實驗屬於基本操作，各位朋友均應獨立操作得出結果。
附註：
1.本法可同時計數禽類白細胞數，計算方法也類似。
2.禽類血細胞稀釋液為：
Ⅰ液
中性紅 25.0mg
NaCl 0.9g
加蒸餾水至100.0mL
Ⅱ液
結晶紫 12.0mg
檸檬酸鈉 3.8g
福爾馬林 0.8mL
加蒸餾水至100.0mL
3.哺乳類紅細胞稀釋液可用生理鹽水或阿揚(Hayem)氏液(NaCl 1g，Na2SO4·10H2O 5g，HgCl2 0.5，加蒸餾水至200mL過濾)。白細胞稀釋液成分為冰醋酸0.1mL，1%龍膽紫1mL加蒸餾水至100mL，或直接用2%醋酸溶液。
4.血小板復方尿素稀釋液配方為：尿素10g，檸檬酸鈉0.5g，甲醛0.1mL，加蒸餾水到100mL，混合，待完全溶解後過濾。置冰箱內可保存1～2周。