『壹』 全血分離獲得血清的方法及步驟 謝謝
材料與方法
1.1 血清採集 MG患者全血來自2004～2005年就診於遼寧中醫學院附屬醫院的門診患者。根據典型臨床表現、新斯的明試驗、低頻重復電刺激及單纖維肌電圖等確診，無其他自身免疫性疾病，未經其他免疫抑制治療，並參照1994年版《中醫病證診斷療效標准》辨證為脾腎虛型。正常人血清取自同時期健康志願者。-70 ℃冰箱冷凍保存備用。
1.2 主要試劑 固相pH梯度干膠條IPG strip（Amersham公司產品， 非線性pH 3～10， 7 cm）。3-〔3-（膽醯胺基丙基）二甲氨基〕丙磺酸鹽｛3-〔（3-cholamidopropyl） dimethylamino〕-1-propanesul-fonate， CHAPS｝，二硫蘇糖醇（DL-dithiothreitol， DTT），三丁基膦（tributyl phosphine， TBP），尿素，硫脲，碘乙醯胺（iodoacetamide， IAA），丙烯醯胺（acrylamide）、甲雙丙烯醯胺（N， N'-methylenebi-sacrylamide），四甲基乙二胺（N， N， N， N-tetram-ethyl-ethylenediamine， TEMED），過硫醯胺（am-monium persulfate， APS），三羥甲基氨基甲烷〔tris （hydroxymethyl） aminomethane〕、甘氨酸（glycine， Gly）和十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate， SDS）均為Bio-Rad公司產品。瓊脂糖為華美生物公司產品。其他試劑均使用國產分析純試劑。所有溶液均用MilliQ水配製。
1.3 主要儀器 高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司產品;EttanTMIPGphorⅡ，Amersham Biosci-ences公司產品;P-2000分光光度儀，Hitachi公司產品;SE-600電泳儀，Amersham公司產品;純水裝置，Millipore公司產品;GS-710光密度掃描儀，Bio-Rad公司產品;冷卻水循環系統，Cole-Parmer公司產品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer，美國Bruker-Daltonics公司產品;LCQ Deca XP Plus，美國Thermo Finnigan公司產品。
1.4 雙向電泳
1.4.1 血清總蛋白質的提取及定量 血清-70 ℃反復凍融4次後，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column處理去除高豐度蛋白。使用Agilent 5K超濾管進行濃縮除鹽，凍干回收的樣品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制劑）進行復溶，並採用考馬斯亮藍法進行蛋白質定量。
1.4.2 等電聚焦 自-20 ℃取出的膠條，室溫下平衡10 min，以500 μg上樣量在每份樣本中加入上樣緩沖液（8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP）以及標准蛋白質分子，上樣於泡脹槽中，加入礦物油覆蓋。程序設置如下:30 V 12 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，8 000 V 6 h。恆溫20 ℃。等電聚焦電泳後IPG膠條在平衡液1（Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚藍0.002%和DTT 100 mg）中於振盪器上振盪 15 min; 然後置入平衡液2（成分同平衡液1，用 400 mg 碘乙醯胺代替100 mg DTT）同樣於振盪器上振盪15 min。
1.4.3 SDS-PAGE垂直電泳 採用12.5%的均勻SDS2聚丙烯醯胺凝膠（水23.2 ml，30%丙烯醯胺溶液32.46 ml，1.5 mol/L Tris-HCl緩沖液pH 8.8 20 ml，10% SDS 0.8 ml，10% APS 0.4 ml，TEMED 3.76 μl，膠總體積80 ml）。將平衡後的IPG膠條移至凝膠的上方，膠條一端放入低分子量蛋白質標准，0.5%的瓊脂糖封膠。上下槽加入電極緩沖液（Tris 5 mmol/L，Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%）。初始電流為每塊膠40 mA，電泳20 min，然後以每塊膠60 mA電流，直至溴酚藍前沿。
1.4.4 銀染色 電泳結束後，採用硝酸銀染色法，通過固定，硝酸銀染色，顯影，停顯及脫色，至背景清晰。
1.5 圖像分析 每個樣品常規進行3次二維電泳，用GS-710光密度掃描儀對電泳後的膠圖分別進行掃描，所得掃描圖像輸入計算機，採用Image-master軟體對圖像進行背景消減、蛋白質點檢測和校正，獲取蛋白質點的位置坐標和表達量等分析。選取 Ratio ≥1.5的蛋白質點認為有差異。所有數據的統計分析均採用SPSS 12.0軟體，統計學分析採用 t 檢驗。
1.6 基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜分析 用手術刀片切下膠上目標條帶，進行切膠、膠上胰蛋白酶酶解 20 h ，抽提酶解肽段，Zip Tip脫鹽後點樣，行基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS）分析（飛行管長2.7 m，加速電壓 20 kV ，反射電壓23 kV）。將第1級質譜得到的肽片段質量指紋圖譜、肽質量指紋圖譜與第2級質譜得到的肽序列信息一起用來檢索蛋白質資料庫，找出匹配的蛋白質。
1.7 資料庫檢索 將質譜鑒定所得的肽質量指紋譜（peptide mass fingerprinting， PMF）數據於Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）軟體搜索相應的庫。搜索使用的資料庫為IPI human蛋白庫（SEQUEST結果過濾參數為:當Charge+1，Xcorr≥1.9;當Charge+2，Xcorr≥2.2;當Charge+3，Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1）以及NCBI上 Homo sapiens的非冗餘蛋白庫（rendant data-base）。檢索參數為胰蛋白酶解;氨基酸固定修飾方式為脲甲基半胱氨酸;模式為單同位素峰;肽片斷最大誤差控制在100 ppm;肽片斷最大分子量誤差為±0.5 Da;每個肽允許有1個不完全裂解位點。
2 結果
2.1 脾腎虛型重症肌無力患者血清雙向電泳圖譜 的建立及分析 經2-DE技術及銀染色後，得到了兩組血清的雙向凝膠電泳圖，並於相同的條件下重復實驗3次。在正常對照組細胞蛋白質組雙向電泳圖譜上可觀察到1 463±179個蛋白點，而脾腎虛型重症肌無力組可見到1 508±89個蛋白點
『貳』 請教最簡單的動物血血清提取方法，聽老師說，將動物血放進冰箱冷凍，再讓其自然融化，表面一層就是血清
不對，最簡單最快的方法：取一潔凈的試管或一支一次性注射器，將從動物靜脈上采血3到5毫升置於試管或直接將一次性注射器抽出去一些留點空間，靜置於室溫或稍熱一些的環境下讓其自然凝固很快就會有清亮透明漂亮的血清析出。用吸管輕輕地分離於潔凈的小瓶置於冰箱冷藏就行了…要是冷凍再融化就會有部分溶血的呈現出紅色。 （要斜一點放置，盡量讓其與空氣接觸面大一點，析出來的就多一點；還有一點就是要靜置，不能搖晃。否則就會有溶血出現。） 雞的血清很好分離，又快又多，牛的很慢。
『叄』 血清是怎樣製作的
1、采血：達到放血完全，應選擇前腔動脈或靜脈放血，注意放血部位的消毒和器具的消毒。
2、析出血清：採用靜置自然析出方法，將析出的血清收集到經消毒的生理鹽水瓶內，一般裝到生理鹽水瓶容量的三分之二，為了更完全的分離血清，過夜後還會有血清析出，繼續收集。
3、殺滅病毒的處理：將收集好的血清，瓶口向上放入水浴鍋56℃水浴2小時，病毒經高溫後失活，而在該溫度時，抗體效價不下降。
4、殺滅細菌，每毫升加2000單位的鏈黴素和2000單位的青黴素，充分搖均，封口即可使用。
5、存放，不立即使用時，應冷凍保存。
『肆』 誰知道血清的分離制備方法和步驟，謝謝！
相信樓主分離血清是用於檢測，而不是用於治療。我告訴你一個簡單實用的方法。我這個方法使用的器械主要就是一次性注射器。采血量看你需要的血清量來定，一般據我觀察，釋出的血清約為全血量的三分之一到二分之一這樣。也就是你采5ml血可能得2.5ml左右的血清。當然了，必須說清楚的是能不能釋出血清，因方法和豬個體的不同，成功率也就不同，我這個方法的成功率在95%左右。小豬采血在豬的前腔靜脈采，直接使用注射器的原裝針頭，大豬則一般換12×25的針頭採用耳背靜脈方法采血。血采出來之後保留一段空氣在注射器內，蓋上針頭蓋，將注射器針頭朝上倒立放置或呈45°角倒立放置，防止受到猛烈振動。將採好的血放置在25℃～50℃的環境中約2小時，血清就釋出在上層，這時你就可以小心地將血清推出。主要注意避免采血時受到污染，避免將採得的血放置在過低的溫度，溫度過低很難釋出血清，注意留一段空氣在注射器內（留多少空氣你自己看情況定，多少都要留一段），注意針口朝上。
『伍』 如何從全血中提取血清
最方便的方法
抽出血，一隻放著，自然分離！！！
有條件的話用離心機，更加快！！！
『陸』 怎樣從動物身上提取血清（常規方法）
采血（不加抗凝劑），靜置直到血液凝固，然後放到37度半小時，4度過夜，效果還行
『柒』 如何在血清中提取DNA
.dna提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用rnp和dnp在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1m
氯
納提取化鈉抽提,得到的dnp粘液與含有少量辛醇的
氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間，而dna位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將dna
鈉鹽沉澱出來.
也可用0.15
mnacl液反復洗滌細胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取dna
時,加入適量去污劑,如sds可有助於蛋白質與dna
的分離。在提取過程中為抑制組織中的dnase對dna
的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15mnacl,0.015m檸檬鈉,並稱ssc溶液,提取dna.
（2）.陰離子去污劑法:
用sds或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取dna
.由於細胞中dna與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取dna.
（3）.苯酚抽提法:
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了dnase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與dna
聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相，而dna溶於水相。離心分層後取出水層，多次重復操作，再合並含dna
的水相，利用核酸不溶於醇的性質，用乙醇沉澱dna
。此時dna是十分粘稠的物質，可用玻璃漫漫繞成一團，取出。此法的特點是使提取的dna保持天然狀態
.
（
4）.水抽提法:
利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去rna，然後將沉澱溶於水中，使dna充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6m.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66%
٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得dna樣品.此法提取的dna中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入sds.
『捌』 血清RNA提取方法
血清RNA提取，biog的具體操作步驟如下： 1. 請自行准備：無水乙醇、無RNA酶1.5mL離心管。2. 取出洗滌液，按以下操作：a) 洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇；35mL加入15mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇。b) 洗滌液B：9mL加入21mL無水乙醇；15mL加入35mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。c) 配製好的洗滌液如出現沉澱，可在37℃溶解，搖勻後使用。3. 取無RNA酶的1.5mL離心管，加入200μL樣本，4μLRNA Carrier混合均勻，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩渦震盪10秒，充分混勻，56℃水浴10 分鍾至完全裂解。4. 加入1000μL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與後續實驗。5. 將吸附柱放入收集管內，將760μL上述溶液轉入吸附柱內，靜置2 分鍾，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液.6. 將剩餘760μL溶液轉移至吸附柱內，重復步驟5。7. 將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液A至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液。8. 將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液B至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液。9. 將吸附柱放回收集管內，12,000 rpm 4℃離心2 分鍾，離去殘留的洗滌液。10. 取出吸附柱，放入新的無RNA酶的1.5 mL 離心管內，加入30-50μL 洗脫液，靜置3 分鍾，12,000 rpm 4℃ 離心2 分鍾，收集RNA溶液。11. -70℃保存，或直接用於下一步實驗。
『玖』 動物的血清的提取一共有幾種方法 分別是啥最大提取量的方法是啥 真心求教
一種直接離心。8000----16000轉每分鍾至少10分鍾，取上清液，
第二等它自然系出，夏天可放陰涼處30分，冬天凝固後放溫箱37度一小時，
第二種量大