㈠ pod媧繪ф祴涓嶅嚭鏉
pod媧繪ф槸嫻嬪緱鍑烘潵鐨勩俻od錛屽嵆榪囨哀鍖栫墿閰訛紝瀹冪殑媧繪ф祴瀹氭柟娉曟槸錛氱О鍙1g椴滄牱錛屽姞0.1mol/LTris-HCl紓烽吀緙撳啿娑詫紝1300g銆4鈩冧笅紱誨績20min錛岄噰鐢ㄥ垎鍏夊厜搴︽硶嫻嬪畾涓婃竻娑蹭腑鐨勯叾媧繪с
㈡ pod測定方法
0.5 g葉片加入50 mmol L-1磷酸緩沖液（pH7.8，含2％的聚乙烯吡咯烷酮），研磨，4℃ 8000 r/min離心20 min，上清液定容至5 ml。 POD活性測定按Kraus和Fletcher(1994)方法進行3 ml反應混合液中含0.2％愈創木酚0.95 ml，50 mmol L-1 PBS（pH7.0）1 ml，酶液0.05 ml，0.3％過氧化氫1 ml。記錄1 min內470 nm下的光吸收值變化。
㈢ 鍦ㄤ粈涔堟儏鍐典笅鎵嶆祴鎶楁哀鍖栭叾媧誨姏
鎶楁哀鍖栭叾錛圫OD銆丳OD銆丆AT錛夋椿鎬ф祴瀹氭柟娉 涓銆 瓚呮哀鍖栫墿姝у寲閰訛紙SOD錛夋椿鎬ф祴瀹氾紙姘钃濆洓鍞戝厜鍖栬繕鍘熸硶錛 1銆佽瘯鍓傜殑閰嶅埗 銆 錛1錛0.05mol/L 紓烽吀緙撳啿娑(PBS錛宲H7.8)錛 A 姣嶆恫錛0.2mol/L 紓烽吀姘浜岄挔婧舵恫: 鍙 Na2HPO4路12H2O錛堝垎瀛愰噺 358.14錛71.7g錛 B 姣嶆恫錛0.2mol/L 紓烽吀浜屾阿閽犳憾娑詫細鍙 NaH2PO4路2H2O錛堝垎瀛愰噺 156.01錛31.2g銆 鍒嗗埆鐢ㄨ捀棣忔按瀹氬瑰埌 1000ml銆 0.05mol/L PBS錛坧H7.8錛夌殑閰嶅埗錛氬垎鍒鍙 A 姣嶆恫(Na2HPO4) 228.75ml錛孊 姣嶆恫(NaH2PO4) 21.25ml錛岀敤钂擱忔按瀹氬硅嚦 1000ml銆 鍙傝冩枃鐚錛 鍙傝冩枃鐚錛氭潕鍚堢敓涓葷紪錛氭嶇墿鐢熺悊鐢熷寲瀹為獙鍘熺悊鍜屾妧鏈.楂樼瓑鏁欒偛鍑虹増紺撅紝2000錛267鍀268銆 錛2錛14.5mM 鐢茬～姘ㄩ吀婧舵恫錛氬彇 2.1637g Met 鐢ㄧ７閰哥紦鍐叉恫錛坧H7.8錛夊畾瀹硅嚦 1000ml銆 錛3錛30?M EDTA-Na2 婧舵恫錛氬彇 0.001gEDTA-Na2 鐢ㄧ７閰哥紦鍐叉恫瀹氬硅嚦 100ml銆 錛4錛60?M 鏍擱粍緔犳憾娑詫細鍙 0.0023g 鏍擱粍緔犵敤紓烽吀緙撳啿娑插畾瀹硅嚦 100ml錛岄伩鍏変繚瀛樸 錛5錛2.25mM 姘钃濆洓鍞(NBT)婧舵恫錛氬彇 0.1840g NBT 鐢 PBS 瀹氬硅嚦 100ml錛岄伩鍏変繚瀛樸 閰舵恫鍒跺囷細 錛堝彲瑙嗘儏鍐佃皟鏁達級 鏍峰搧 錛堟柊椴滃彾鐗囨垨鏍圭郴錛夋礂鍑鍚庣疆浜庨勫喎鐨勭爺閽典腑錛 閰舵恫鍒跺囷細鍙 0.2g 鍔犲叆 1.6ml 50mmol/L 棰勫喎鐨勭７閰哥紦鍐叉恫 錛坧H7.8錛 鍦ㄥ啺嫻翠笂鐮旂（鎴愬寑嫻嗭紝 杞鍏ョ誨績綆′腑鍦 4鈩冦 12000g 涓嬬誨績 20min錛屼笂娓呮恫鍗充負閰舵恫銆 2銆侀叾媧繪ф祴瀹 銆 錛1錛 鍙嶅簲娣峰悎娑查厤鍒(浠 60 涓鏍蜂負鍑)錛 鍒嗗埆鍙 Met 婧舵恫 162ml錛 EDTA-Na2 婧舵恫 0.6ml錛 紓烽吀緙撳啿娑 5.4ml錛孨BT 婧舵恫 6ml錛屾牳榛勭礌婧舵恫 6ml,娣峰悎鍚庢憞鍖錛 錛2錛夊垎鍒鍙 3ml 鍙嶅簲娣峰悎娑插拰 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錛2錛17mM 瀵規皚鍩鴻嫰紓洪吀婧舵恫錛氱О鍙 1.1776g 瀵規皚鍩鴻嫰紓洪吀鐢ㄥ皯閲忓啺閱嬮吀姘存憾娑詫紙鍐 閱嬮吀錛氭按=1錛3 閰嶅埗錛夊姞鐑婧惰В鍚庡畾瀹硅嚦 400ml錛 錛3錛7mM偽-钀樿兒婧舵恫錛氱О鍙 0.4008g偽-钀樿兒鐢ㄥ啺閱嬮吀姘存憾娑詫紙鍐伴唻閰革細姘=3錛1 閰嶅埗錛 瀹氬硅嚦 400ml銆 2銆丱2.-鍚閲忕殑嫻嬪畾 錛1錛夋牱鍝佹恫鎻愬彇鏂規硶鍚 SOD 嫻嬪畾錛 錛2錛夊彇 0.5ml 鎻愬彇娑詫紙閰舵恫錛 錛堝彲瑙嗘儏鍐佃皟鏁寸敤閲忥級涓鍔犲叆 0.5ml PBS錛0.05M錛宲H7.8錛 錛 1ml 1mM 鐩愰吀緹熻兒婧舵恫鍚庢憞鍖銆 錛3錛夊湪 25鈩冧笅淇濇俯 1 灝忔椂錛 錛4錛 渚濇″厛鍔犲叆 1ml 17mM 瀵規皚鍩鴻嫰紓洪吀錛 鍐嶅姞鍏 1ml 7mM 偽-钀樿兒錛 娣峰悎鍚庡揩閫熸憞鍖錛 錛5錛 25鈩冧笅淇濇俯 20min 鍚庡湪 3000脳g 涓嬬誨績 3min 鍚庨┈涓婅繘琛屾祴瀹 鍦 錛堟垨緗浜庡啺綆卞緟嫻嬶級 錛 錛6錛変互瀵圭収綆¤皟闆訛紙鐢ㄦ按璋冮浂錛 錛屽彇綺夌孩鑹叉按鐩告恫嫻嬪畾 OD530 鍊礆紙嫻嬪畾錛 錛 錛7錛塐2.-鍚閲忕殑璁＄畻錛氱敱嫻嬪緱鐨 OD530錛屾煡 NO2-鏍囧噯鏇茬嚎寰楀埌[NO2-]錛涙牴鎹緹熻兒涓 O2.- 鐨勫弽搴斿紡錛歂H2OH錛2O2.-錛婬+ NO2-錛婬2O2 錛婬2O 璁＄畻[O2.-]錛屽嵆[NO2-]脳2=[O2.-]錛涘啀 鏍規嵁鏍峰搧涓庣緹鑳哄弽搴旂殑鏃墮棿鍜屾牱鍝佷腑鐨勮泲鐧借川鍚閲忥紝奼傚緱 O2.-浜х敓閫熺巼錛堜互 nmol min-1mg-1 錏嬬櫧琛ㄧず錛屼篃鍙浠 nmol min-1g-1 椴滈噸琛ㄧず錛 銆 O2.-浜х敓閫熺巼=錛圕脳V錛/錛坱脳W錛 錛坣mol min-1g-1 椴滈噸錛 C 涓烘爣鍑嗘洸綰誇笂鏌ュ緱鐨勬祿搴(umol/L)錛沄 涓烘祴瀹氭椂鎵鍙栨彁鍙栨恫鐢ㄩ噺(鍙剁豢浣撶█閲婂悗鐨勪綋 縐)錛泃 涓哄弽搴旀椂闂(60min)錛沇 涓烘牱鍝侀矞閲(鍙剁豢浣撳疄闄呰川閲 g) 鍙傝冩枃鐚錛 錛6錛 鍙傝冩枃鐚錛氱帇鐖卞浗錛岀綏騫垮崕錛庢嶇墿鐢熺悊瀛﹂氳錛1990錛 錛55鍀57 浜斻佷笝浜岄啗鍚閲忕殑嫻嬪畾 1銆佽瘯鍓傞厤鍒訛細 10%TCA錛100g 涓夋隘涔欓吀 鈫 1L 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