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哪裡可以找到aoac分析方法

發布時間:2024-07-04 23:04:31

Ⅰ ORAC和抗氧化是什麼

ORAC是氧化自由基吸收能力(Oxygen Radical Absorbance Capacity)的縮寫,氧化自由基吸收能力又稱為抗氧化能力。
ORAC分析方法是根據自由基破壞熒光探針,使熒光強度產生變化原理,以維生素E水溶性類似物Trolox為定量標准,使用熒光微孔板分析儀進行分析。熒光強度的變化大小反映自由基破壞的程度。在抗氧化劑存在時,它可以抑制由自由基引起的熒光變化。抑製程度反映了它對自由基的抗氧化能力。

博思維科實驗室是ORAC高效測試方法的發明者及專利持有者。至今為止,唯一一家公司能為客戶提供全套總抗氧化能力測試。ORAC分析方法,受到美國農業部(USDA)、美國國立衛生院(NIH)、美國宇航局(NASA)及美國哈佛大學(Harvard University)等眾多科技研究機構的認可。同時在產品研發、生產、銷售的工業領域中,作為衡量產品抗氧化能力的標准分析方法已受到業內的廣泛認同,並成為各進出口企業實行國際標准化質量控制的依據。美國官方分析化學師協會(AOAC)已將其批准為國際AOAC標准方法。
ORAC(Oxgen Radical Absorbance Capacity)指氧自由基吸收能力,即測試食品葯品中抗氧化物的含量的國際通用標准單位。ORAC的含量超高,抑制自由基的抗氧化能力就越強。
對於一個未知樣品,ORAC化學方法測試出樣品的理論抗氧化值,並測出對各種自由基作用的具體數值,以尋找研發方向。然後通過ORAC生物細胞方法測試其生物利用度(被人體細胞所吸收的值),以驗證其真實的效果。最後進行動物臨床或人體臨床,證實樣品(產品)的實際效果。通過這種循序漸進、符合邏輯的研發方案步驟,企業可以安全、有效的研發出符合預期的新產品,建立起一套扎實的數據支撐體系。ORAC已建立從化學層面、生物細胞層面、臨床層面縱向立體的分析方法 。

Ⅱ 涔寵剛鑲嫻嬪畾鐨凙OAC娉曟槸浠涔

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Ⅲ 軟骨藻酸的檢測方法

該法是根據美國公職化學家協會(AOAC)所標定的麻痹性貝中毒(PSP)的小鼠生物分析法加以變化的,是最早用於DA檢測的一種經典方法。其原理是將毒素注射入小白鼠體內,根據注射後小鼠的存活時間和中毒症狀來評價毒性,一般用半致死劑量表示。1987 年該方法首次應用於加拿大DA 中毒事件中DA 的測定,結果顯示該方法適於檢測貝類組織中高濃度的DA(高於30μg/g),DA 濃度較低時無法檢測(低於20μg/g)。
該法更加註重研究DA的毒性效應和毒理研究。這是一般其他方法無法取代的,而且採用小白鼠生物檢測法可以檢測一些未知的毒性物質,通過半數致死劑量來評價該物質的毒性效應,因此小白鼠生物檢測法在各個國家仍有很廣泛的應用。但是,該方法的檢出限較高,適用於檢測貝類組織中高濃度的DA(300-1000μg/g),不適用於DA含量低於20μg/g組織的檢測。
小白鼠生物檢測法方法檢測周期大於24h,特異性較差,干擾因素較多,樣品處理為粗略提取,樣品批次單一。小白鼠生物檢測法檢測DA是最早使用的一種方法,但是其試驗結果受外部影響因素較為復雜,試驗結果與小白鼠的品系和試驗者本身操作有很大關系,並且小白鼠生物檢測法一般要有至少1d的檢測周期,該方法的檢出限較低。此外,小白鼠生物法僅能測定毒性的大小,無法確定毒素的組成和各成分的含量。小白鼠生物檢測法最大的局限性是小鼠本身造成結果的高變異性和低敏感性,而且對鼠種的要求較高。 高效液相色譜法(HPLC)是檢測DA應用最廣的方法,已被多國列為國家標准方法,中國國家標准中規定使用反相高效液相色譜法檢測海產雙殼類貝肉、貝柱、外套膜及其製品(不包括鹽漬製品)中的DA含量,該方法檢測限為1μg。生物分析法注重的是樣品毒性的分析,其專一性和靈敏度低,而高效液相色譜法則能靈敏、快速、准確地確定各種毒素成分,被廣泛用於研究和確認實驗。HPLC檢測DA是利用其在242nm處具有最大吸收值的特徵使用紫外或二極體檢測器進行檢測,或者將DA衍生後通過熒光檢測器進行分析,或使用質譜進行檢測。高效液相色譜的檢測器有紫外檢測器、熒光檢測器和質譜檢測器,由於貝類提取液中干擾組分復雜,光度檢測往往不能提供化合物的充分結構信息,因此會引起假陽性的結果。高效液相色譜法檢出限低,方法成熟,但儀器昂貴、笨重,一次只能測定一個樣品,不適合快速現場檢測。對設備條件要求較高,也不能大量用於基層的日常監測工作。
軟骨藻酸HPLC曲線參考文獻。
DA-HPLC檢測DA的方法主要有兩大類,一種方法是貝類樣品被提取後,經濃縮純化後進行HPLC配紫外檢測器(HPLC-UVD)分析。由於DA在242nm的紫外光譜區有最大吸收峰,因此反相高效液相色譜(RP-HPLC)-UV可有效而快速地對樣品進行分離和檢測,其基本原理是使用酸性流動相以抑制羧基的電離作用,並選用C18鍵合硅膠柱分離DA及其衍生物。HPLC-UVD法特別適用於分析貝類組織內的DA含量,其檢測限在10-80ng/ml之間,且依提取和提純方法的不同而異,如粗提取物未經提純,其檢測限約為1μg/g,適用於毒素含量超過20μg/g的檢測。水中DA的檢測與樣品量及藻類的含量和種類等因素有關。另一種方法是針對海水和硅藻中DA進行的甲氧基芴甲酸(9-fluorenylmethyloxycarbonyl,FMOC)衍生化/HPLC配熒光檢測器(HPLC-FLD)法,該法在DA分子上引進了熒光基團而使FLD檢測的靈敏度提高,對海水中DA的檢測限為1.5pg/ml。Hummert等提出了柱切換系統,它能有效降低提取物中的干擾,直接分析粗提的樣品,省去了復雜的樣品預處理過程。流動相的配比影響DA的保留時間,隨著流動相中乙腈比例的減小,DA保留時間增加,DA色譜峰對稱性增強,DA與DAC′5非對映異構體分離度增大。中國報道用RP-HPLC-UVD測定貝類中DA,經甲醇:水(1:1)溶液提取,強陰離子(stronganion exchange,SAX)固相萃取柱凈化,C18反相色譜柱分離,流動相為乙腈:水(13:87),242nm波長下檢測,最低檢出限為0.2μg/g,在1.0-25.0μg/ml范圍內有良好的線性關系,平均回收率為(97.23±2.43)%。流動相採用甲醇:水(22:78,pH2),最低檢出限為10ng(1.0μg/ml),檢測范圍50-250ng(5-25μg/ml),DA的回收率可達(99.9±2.4)%。另有報道流動相為甲醇:乙腈:三氟乙酸(80:20:0.1),最低檢出限為10ng(1.0μg/ml),在1-40μg/ml范圍內線性關系良好。
高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)特別適用於貝類組織中DA含量的測定,尤其適用於毒素含量超過20μg/g的情況。Lawrence等人建立[以及Quilliam等改進的HPLC-UV法採用了反相C18柱在242nm處檢測DA,該方法已被英國、愛爾蘭等國定為標准方法。後來,又有一些研究人員對此方法進行了改進。López-Rivera等建立了一種不需要固相萃取預處理檢測DA的HPLC-UV法,通過等梯度淋洗以及控制流動相pH來分離化合物,結果表明,最佳pH為2.5,方法檢測限為25ng/mL。該方法快速、靈敏,能成功檢測大批量貝類樣品。HPLC-UV法已經被很多研究人員用來檢測貝類等動物組織中的DA含量。Costa等用HPLC-UV法檢測了葡萄牙海岸的兩種章魚E.cirrhosa和E.moschata體內DA的含量,結果表明,DA含量超過了100μg/g,其中,E.moschata體內毒素含量更高,表明DA可能通過食物鏈由這種章魚體內進入更高級消費者如人類體內,潛在危險性更大。中國對DA的檢測大多採用HPLC-UV法,張一兵等在借鑒國外方法的基礎上應用高效液相色譜-紫外可見檢測法(HPLC-UVD)進一步優化了DA的高效液相色譜-紫外檢測法,選定pH2的甲醇/水=22∶78(V/V)為流動相,LC-SAX作為濃縮純化柱,檢出限為10ng,回收率達到92%-94%。陳西平等採用該方法檢測了部分水及水生動物中DA的含量,回收率達到70%-93%,檢出限為10ng。結果表明,雖然在海水及地面淡水中未檢出DA,但部分海洋貝殼動物體內有檢出。因此,隨著海洋污染的加劇,現階段中國的DA污染問題不容忽視,應加強對其污染狀況的監測。
高效液相色譜-質譜(HPLC-MS)聯用技術可以不使用衍生試劑和毒素標准品,相比其他檢測器,具有很大的優勢。然而本方法對設備條件要求較高。Lawrence等建立的高效液相色譜-電噴霧離子阱質譜法(HPLC/ESI-MS)法是一種高靈敏度、高選擇性的方法,被應用到了環境中各種介質的檢測中,並被後人不斷改進,但是這種方法對樣品預處理的要求較高。宋琍琍等參考了這種方法來測定DA殘留。樣品經50%甲醇提取,LC-SAX 柱凈化,然後選用電噴霧離子源進行測定分析,該方法的定量限為0.02μg/g。Pardo等採用加壓濕法萃取(PLE)來提取DA,然後用液相色譜-電噴霧電離雙質譜(HPLC-ESI-MS-MS)法來檢測DA,電離源採用電噴霧可以提高分析信號,方法經過優化後回收率在81%至95%之間,他們用此方法成功檢測了46個西班牙超市裡的貝類樣品,表明該方法能進行大批量檢測。Wang 等採用LC-MS 對水樣和浮游植物中的DA 進行了定性和定量分析,樣品預處理採用C18柱進行固相萃取,結果表明,酸性條件有利於在C18 柱上保留親水性的DA,加標水樣的回收率超過了90%,浮游植物樣品的回收率則接近98%,方法檢測限為0.03ng/mL。Iglesia等也採用LC-MS法檢測了海水中的DA及它的異構體,但樣品預處理採用的是固相萃取盤,該方法的檢測限為0.02ng/mL,回收率為92.1%-110.6%,用此方法能檢測海水中的痕量DA。Vale等利用HPLC-MS的方法,以1+1的甲醇溶液作為洗脫液,對葡萄牙魚類和貝類體內的軟骨藻酸含量進行測定,結果表明在春季樣品中DA含量最高;在分析的眾多樣品中,蛤仔和鳥蛤被軟骨藻酸污染最為嚴重,紫貽貝和牡蠣等物種受污染較輕。陳燕青等利用HPLC-MS法測定蝦夷扇貝和長牡蠣中軟骨藻酸的殘留,樣品經濃度50%甲醇提取,LC-SAX柱凈化,3ml0.1mol/L甲酸溶液洗脫,電噴霧離子源(ESI),在正離子、多反應監測方式(MRM)模式下進行定性與定量,該方法的檢出限達0.01μg/g,線性范圍為0.02-10.00μg/g。
高效液相色譜-熒光檢測法是使用衍生劑將DA衍生成含熒光基團的物質,用熒光檢測器進行檢測,在DA分子上引入熒光基團可使方法的靈敏度提高。檢出限可達到pg/ml。Maroulisb等利用柱後衍生法測定DA,加入4-氯-7-硝基-2,1,3-苯並氧雜惡二唑(NBD-Cl)與DA上的氨基反應生成熒光基團,提高了熒光檢測檢測器(FLD)的靈敏度,熒光檢測器激發波長設為469和529nm,檢出限低至25μg/kg。James等使用NBD-F來衍生化DA,用等梯度淋洗程序分離化合物,激發波長為470nm,發射波長為530nm,方法檢測限高於1ng/mL,貝類組織中DA的回收率>95%,當用強陰離子交換SPE柱萃取DA時,檢測限達到6ngDA/g貝類組織。Chan等參考了這種方法來檢測DA,但他們改進了樣品預處理方法,即在SPE柱中加入TiO2,可以更好地吸附DA,並探討了最佳pH,結果表明,吸附的最佳pH為4,解吸時pH則為11,吸附平衡時間為2小時,最佳吸附劑裝載量為0.67mgTiO2/ngDA。Maroulis等採用NBD-Cl柱後衍生DA進行檢測,成功測得了貝類組織中DA含量為75μg/kg的樣品,該方法檢測限低至25ppb,能實現全自動化分析,對樣品預處理要求低,干擾少。由於大多數衍生試劑價格昂貴、不穩定,且其分解產物可能出現在色譜圖中,同時衍生試劑的變質也可能導致毒素的不完全衍生化,因此熒光檢測法的實際應用很少。 免疫分析法(ELISA)是基於抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法,即根據抗原-抗體反應,採用特異性貝類毒素的抗體來檢測DA。免疫分析法主要包括酶聯免疫法、放射性免疫法、熒光免疫法等,具有方便、快速的特點,但缺點是費用較高,而且各毒素之間的交叉反應低,不能全面體現出樣品的毒性。檢測DA所採用的免疫分析方法主要是酶聯免疫吸附法(ELISA)。ELISA是利用抗原-抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結合,通過酶作用於底物後的顯色反應判定結果,是應用最廣泛的免疫學檢測技術,由於其實驗結果可用目測,也可用酶標儀測定光密度值以反映抗原含量,所以有易定性定量的雙重優點。Engvall和Perlmann於1971年最先應用該法進行IgG定量測定,並命名為Enzyme linked immunosor-bentassay(ELISA)。由於ELISA方法靈敏,特異性強不需要特殊設備,被廣泛應用於各種抗原和抗體測定。將ELISA應用於DA的檢測中,利用原-抗體反應,採用特異性貝類毒素的抗體來檢測DA。
Yu等採用匙孔血藍蛋白(KLH)和小牛血清蛋白(BSA)為載體,進行直接酶聯免疫測定,結果表明,藍貽貝樣品的檢測限<25ng/g,回收率為81.1%,Yu等還將實驗結果用HPLC方法進行了驗證,最終發現15種被污染的貝類樣品中有10種樣品的DA含量<50ng/g。Maucher等結合ELISA技術使用血液採集卡來提取小鼠血液中的DA,這種方法可以避免DA在血液中被清除。一般說來,在4小時內,99%的DA會從血液中被清除,但使用該方法後,DA在24小時內仍然能被檢測到。該方法靈敏度高,用血液採集卡提取樣品方便,因此可用此方法來監測海洋哺乳動物體內的DA含量。Tsao等採用單克隆抗體ELISA檢測法檢測DA,並建立了基於單克隆抗體的膠體金免疫條檢測法,免疫條檢測法的檢測限為5ng/mL,在十分鍾內就可完成檢測。Tsao等的實驗結果表明,用免疫條檢測得到的結果與用ELISA方法得到的結果有很好的吻合性,可以用來快速檢測貝類樣品中的DA。另外,Shaw等建立了基於基因工程單鏈抗體(scFv)競爭ELISA檢測方法,相比傳統方法,這種方法具有很多優勢,基因工程單鏈抗體(scFv)可以在大腸桿菌中快速、大量地得到表達,且容易和其他小分子融合,形成融合蛋白以用於檢測或其它用途。用該方法檢測天然扇貝組織得到的數據與標准HPLC方法檢測的結果基本相符。大多數ELISA法採用的都是直接法,而許道艷等則以DA-OVA為包被抗原,利用抗原抗體反應,建立了間接競爭酶聯免疫吸附技術分析檢測海水樣品和海洋貝類中DA的方法。結果表明,該方法最低檢出限為10μg/L,海水樣品平均回收率為102.2%,貝類樣品平均回收率為111.5%。ELISA方法能夠進行批量檢測,但特異性較差,因而主要用於DA的初步篩選。由於DA標准品昂貴,且DA分子量太小,因此制備免疫抗原較困難,從而限制了免疫方法在DA分析中的應用。 液質聯用(LC-MS/MS)技術幾乎可以分析所有的貝毒。液質聯用依賴於高效液相色譜把貝毒成分通過離子化帶到質譜中。電噴霧電離源(ESI)和大氣壓化學電離源(APCI),這兩種技術都已經應用於貝毒分析。由於食品(動物組織)的背景非常復雜,樣品間差異又相當大,採用LC-MS(MS/MS)技術測定食品中貝類毒素的關鍵是樣品的前處理。國外文獻方法多採用甲醇-水溶液提取,然後固相萃取法進行凈化與濃縮,最常用的固相萃取柱有Cl8烷基鍵合硅膠柱,CN柱和離子交換柱,最常用的是陰離子交換柱,非鍵合硅膠柱也有很好的純化和萃取效果。此外還有溶劑提取方法、液相色譜制備法和超臨界流體萃取法等。食品(水產品)中的貝類毒素殘留量甚微,一般為μg/kg水平。2005年方曉明等利用液相色譜四極桿-飛行時間質譜(LC/Q-TOFMS)聯用技術對貝類樣品的失憶性貝毒進行了研究。樣品經甲醇/水(體積比為1:1)提取,經SAX固相萃取柱凈化後,用Zorbax Eclipse XDB-18柱(250mm×2.1mm,3.5μm)色譜分離,以乙腈/水含0.05%甲酸水溶液作流動相,梯度淋洗,流速為0.20mL/min。Q-TOFMS選擇電噴霧正離子模式,以[M+H]+作為前體離子進行TOFMS掃描。結果表明:樣品加標的平均回收率為87.8%-94.6%,相對標准偏差為8.4%-11.9%,檢測低限(LOQ)為0.1μg/g。由於Q-TOFMS具有高解析度,能進行精確測定而不降低靈敏度,因此本方法作為對貝類樣品中失憶性貝毒的確證分析方法具有高靈敏度和選擇性。2003年HollandPT等用LC-MS/MS的方法測定了貝類中軟骨藻酸和其異構體的含量,以甲醇/水(體積比為1:1)作為提取劑,以乙腈/水(體積比為1:1)作為稀釋劑,經SPE固相萃取後,用C18柱色譜分離。選用了4種不同的貝類,當軟骨藻酸在樣品中的含量為1μg/g貝-2μg/g貝時,軟骨藻酸的回收率為93%(RSD大於7%)。2007年PardoO等用甲醇/乙腈(體積比為9:1)作為提取劑,經PLE萃取後,通過電噴霧電離(ESI)界面與質譜聯用(ESI-MS-MS)分析測定軟骨藻酸。使軟骨藻酸在0.05-5μg/mL范圍內具有良好的線性關系,相關系數r=0.999;當方法檢出限為0.2μg/g,回收率為81%;當方法檢出限為0.5μg/g,回收率為95%。此方法成功應用於46個貝類樣品的檢測中。2007年WangZH採用離子碎片的方式,使用多反應器,以甲醇/水(體積比為1:1)作為提取劑,以乙腈/水(體積比為1:1)作為稀釋劑,用4mL0.15%甲酸洗脫,經SPE固相萃取後,用C18柱色譜分離,當檢測濃度為30pg/mL,使得回收率從90%提高到98%,建立了一種定量和定性的方法。

Ⅳ 牛奶抗生素檢測有什麼好方法

牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測方法 隨著奶牛飼養業的發展,抗生素在預防和治療奶牛疾病方面得到廣泛的應用。生鮮牛奶中抗生素的來源主要是:第一,治療泌乳期病牛時使用的抗生素會從奶牛體內移行到乳腺殘留進入牛奶中,資料表明治療後的奶牛,其擠出的牛奶5天內都有抗生素殘留;其二,為了預防奶牛疾病並提高產量,在奶牛飼料中添加抗生素也會造成牛奶中抗生素的殘留;第三,由於牧場管理不善,擠奶、儲奶沒有嚴格的衛生制度和配套的設施,人為添加或造成牛奶抗生素的污染。 牛奶中含有抗生素,不僅對人的健康造成很大的危害,而且對乳品加工企業帶來經濟損失(因無法生成酸奶和乳酪)。因此必須嚴格控制牛奶中抗生素殘留,除了要做好科學飼養、精心管理;正確擠奶和預防疾病外,還要規范抗生素的使用,按國標中有關規定,用葯後的奶牛5天後所產的牛奶才可作為原料乳,並且要檢測其殘留。世界糧農組織(FAO)、世界衛生組織(WHO)、歐盟(EC)及美國的食品和葯品管理局(FDA)等對食品中抗生素最大殘留量都有明確的規定,我國也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准(GB4689.27—94)。 目前,鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類:生物測定法(微生物測定法、放射受體測定法)、免疫法(放射免疫法、熒光免疫法、酶聯免疫法)、理化分析法(波譜法、色譜及聯用技術)。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測方法。 TTC法 TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准(GB4689.27—94)的檢測法,屬生物檢測法。其測定原理基於抗生素對微生物的抑製作用。如果牛奶中含有抗生素,則加入菌種(嗜熱鏈球菌)經培育2.5~3小時後,加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發生還原反應,所以樣品呈無色狀態;如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色.這樣實驗後樣品顏色不變的為陽性,樣品染成紅色的為陰性。 TTC法的具體操作步驟: 1.菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳為培養基,在36±1℃培養箱中培養15小時後,再以脫脂乳以至於1:1稀釋待用; 2.取待檢樣液9mL,在80℃水浴加熱5分鍾後冷卻到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小時,加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養30分鍾; 3.若樣液顏色不變為陽性,呈紅色為陰性;若陽性的樣液,再置於水浴中培養30分鍾,不顯色的為陽性,呈紅色為陰性. TTC法測定各種抗生素的靈敏度為:青黴素:4ppb,鏈黴素:500ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:5000ppb.它具有費用低,易開展的優點;缺點是耗時長,要求操作人員需有一定專業知識且實驗過程中菌液的制備、水浴過程式控制制都要求嚴格遵守操作規程,否則易出現假陽性,以致出現檢驗結果的不穩定性。 Delvotest? sp法(戴爾沃檢測法) 該法最早在香港傳到廣東的,其使用是基於20世紀80年代初香港要求廣東出口的生奶必須「無抗」且要求採用Delvotest法檢測。該方法也是生物測定法,其試劑是由荷蘭DSM公司生產並由AOAC認證。原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5~3小時後會產酸,酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變為黃色;若牛奶樣品中不含抗生素,培養後樣品呈黃色,如樣品中含有抗生素, 嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產酸,指示劑將不變色. Delvotest? sp 法的操作步驟: 1.以無菌操作將一片營養葯片夾放入小試管內; 2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品注入小試管內; 3.把小試管放入已預熱至64℃的水浴箱或恆溫器中培養; 4).定時3小時取出觀察顏色變化.如果底部2/3的固體介質是黃色,則為陰性, 如果底部2/3的固體介質是紫色,則為陽性. Delvotest? sp 法具有廣譜性,可檢測到?-內醯胺類抗生素在內的更多抗生素,如磺胺類、四環素類、大環內酯類、氨基糖苷類、氯黴素等,其中對青黴素和磺胺類抗生素特別靈敏. 其靈敏度為:青黴素:3ppb,鏈黴素:300ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便,嚴格實用,容易判斷,結果可靠,費用適中等優點;但也易出現假陽性,實驗證明:當牛奶樣品中添加微生物防腐劑(如乳酸鏈球菌素—Nisn)或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時,便可影響嗜熱芽胞菌生長而使實驗為陽性。 Snap?法 該方法是酶聯免疫法,由美國IDEXX公司生產其檢測分析儀及其試劑盒,均獲得AOAC認證,它利用了竟爭酶聯免疫技術。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活,加入含待測抗原的溶液和一定量的酶標記抗原在45℃±5℃共同保溫,使樣品內的抗生素與內置抗生素標志物竟爭與固定的抗體結合,然後進行洗滌和顯色,內置抗生素標志物與固定的抗體結合形成的復合體,通過酶的作用分解可形成有色物質,通過測定色度並與參照物對照,就可以確定結果是陽性或陰性。 Snap?法操作步驟: 1.加入乳樣於樣品管中,搖勻,加熱樣品和檢測板5分鍾; 2.加入乳樣於樣品孔中,當激活圓環開始退卻時,按Snap鍵; 3.反應4分鍾,由Snap?讀數儀讀取並列印結果.檢測讀數小於1.05時判為陰性,大於1.05時判為陽性. Snap?法是一種將酶化學反應的敏感性和抗原抗體免疫反應的特異性相結合的方法,其敏感性和特異性好,檢測的靈敏度以普遍使用的?-內醯胺類計:青黴素:5ppb,阿莫西林:10ppb,氨苄西林:10ppb,頭孢西林:8ppb.其他抗生素如四環素等的檢測,則需購買相應的試劑來檢測. Snap?法檢測結果快速准確, 9分鍾內即可檢測出牛奶中?-內醯胺類、四環素類、磺胺類等抗生素的殘留含量,且有半定量的讀數,可監控牧場用葯的情況;檢測儀器穩定性良好,結果重現性高,整個檢測過程簡單方便;但需購置專用儀器和試劑,成本較高。 高效液相色譜檢測法 它是一種理化檢測方法,是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應來測定其含量.檢測的過程採用了氣相色譜理論,通過高壓液相和高靈敏度的檢測器,分離速度快、效率高和操作自動化。一般要經過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟,能檢測抗生素的具體含量,敏感性較高,但檢測程序復雜,費用較高,需購買色譜儀等檢測設備,不適合小型檢驗室。 傳統的抗生素檢測方法不少,有的操作煩瑣,有的實驗條件要求高,有的檢驗時間太長;這些不僅會給乳製品生產企業造成經濟上和時間上的損失,而且檢測結果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響.鑒於牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公共衛生問題,乳品企業及牧場應重視和加強檢測工作,應用一些簡單、快速和准確性高的方法來監控產品的質量,保證消費者的健康。 納米膠體金層析法 該方法是基於競爭法膠體金免疫層析技術,將檢測液加入試紙卡上的樣品孔,檢測液中的抗生素與金標墊上的金標抗體結合形成復合物,若抗生素在檢測液中濃度低於100ng/mL,未結合的金標抗體流到T區時,被固定在膜上的抗生素BSA偶聯物結合,逐漸凝集成一條可見的T線;若抗生素濃度高於100ng/mL,金標抗體全部形成復合物,不會再與T線處抗生素BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區被C區的二抗捕獲並形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發生,即試紙有效. http://www.quicking.cn/chinese/content.asp?MoleType=3&ChannelID=3&id=174 膠體金法操作步驟: 1.將採集的牛奶樣品進行編號,置於常溫(20-30℃)室內。(低溫牛奶流動性差,不適合進行試紙層析測試) 2.搖勻牛奶,用吸管取1mL加入到離心管中,7000rpm離心3-4分鍾至分離出脂肪層。脂肪層下5mm處液體(脫脂牛奶)即為待測液。 3.取出試紙條,用吸管吸取3滴待測液滴於加樣孔中, 4.5分鍾後判斷結果,10分鍾後的結果無效。 http://www.quicking.cn/chinese/content.asp?MoleType=3&ChannelID=3&id=156 結果解釋 陰性:C線顯色,T線肉眼可見,無論顏色深淺均判為陰性。 陽性:C線顯色,T線不顯色,判為陽性。 無效:C線不顯色,無論T線是否顯色,該試紙均判為無效。 保存和穩定性 4-30℃陰涼乾燥處保存,不可冷凍,避免陽光直曬,生產日期起18個月內有效。 納米膠體金層析法適用於樣品的初篩,檢測時間短,出結果速度快,且能在常溫下保存18個月之久,操作簡單,無需任何專業的技術,沒有檢測環境的需求不管是奶農還是奶站工作人員還是專業的檢測人員,都可以方便使用。

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