菌種分離方法及步驟

Ⅰ 食用菌菌種分離有哪些方法

菌種分離：
有擔孢子分離、組織分離（子實體、土壤中的菌根、菌素等）和基內分離（菇木）3種方法

Ⅱ 怎樣分離特定菌種

菌種分離就是用無菌操作技術將所需的食用菌與其他雜菌分開，讓其在適宜的條件下生長繁殖而得到純種。分離通常是在無菌條件下經分離技術進行的，是菌種製作程序中的一個非常重要的技術環節，其菌種質量的好壞，菌性的優劣與它有直接關系。菌種分離一般有孢子分離法、組織分離法和菇（耳）木分離法3種，其中組織分離法操作簡便，能保持菇種特有的優良性狀，一般不必做出菇實驗，所以採用較多。

Ⅲ 如何進行菌種的分離與篩選（需要詳細的步驟）

用選擇培養基。比如青黴素培養基選擇出能抗青黴素的細菌

Ⅳ 平菇組織分離的方法和步驟如下

平菇母種沒長滿能用，平菇母種繁殖技術。一、平菇組織分離技術組織分離是采菇體的部分組織進行繁殖母種的方法。盡管平菇的任何部分都能分離培養出母種，但是多年的實踐經驗表明，選用菌柄和菌褶交接處的菌肉最好。平菇組織分離的方法和步驟如下： 1、種菇選擇：一般選擇在適宜出菇期出菇早、出菇整齊、特徵典型、無病蟲害、產量高的栽培袋，從中選擇菌肉肥厚、大小適中、顏色正常、尚未散孢、長至七八分成熟的優質菇作種菇。 2、種菇消毒：用0.1%升汞溶液或75%酒精浸泡或擦拭，無菌水沖洗，吸干表面的水分。 3、切塊接種：將分離種菇沿菌柄中心縱向掰成兩半，用解剖刀在菌蓋和菌柄交界處劃成田字形，取黃豆粒大一小塊菌肉組織，接在PDA培養基上。 4、培養純化：溫度控制在22℃~25℃之間，培養1~2天，長出白色絨毛狀菌絲體，4~5天通過篩選，挑出菌絲潔白、清晰、生長整齊、健壯的試管母種繼續培養，將有雜菌、長勢纖弱的淘汰。7~10天菌絲長滿斜面。 二、平菇孢子簡易分離法筆者將多孢子分離與組織分離有機結台，使退化品種的優良特性得以恢復。現簡升如下，以供同行參考。制備培養基馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，VB1微量，瓊脂18g，水1000mL，pH值自然。按常規方法制試管斜面。選擇種菇選取生長健壯，八成熟，無病蟲害的平菇一朵，用鋒利小刀在其上切取菇形美觀的菇肉組織一片待用。收集孢於及培養純化在無菌條件下，撥出斜面試管口的棉塞，用試管口從菇種菌褶處頂穿菇種片，使一小片菇種陷入管口以內，迅速塞好棉塞。於24－26℃條件下恆溫培養6小時後取出。在酒精燈火焰附近去掉棉塞，用消毒小鉤鉤出管內的小片菇種，將棉塞連同試管口在火焰上灼燒後，迅速塞上棉塞，於24～26℃恆溫培養1周，待孢子萌發，井長成成片菌絲後，切取生長迅速、無雜菌污染的菌絲團轉管。待菌絲長滿管後備用。組織分離將孢子分離所得試管菌種，按常規方法接入棉子殼培養基的原種瓶中(750mL)，待菌絲長滿瓶後自然出菇。選取菇體健壯、菇形正常，無病蟲害的菇體組織分離後得純菌種，經栽培出菇試驗後便可用於生產。三、平菇菌種的復壯－組織分離使用組織分離復壯平菇菌種，簡便易行、效果明顯，很適宜一般種植戶。其操作技術要點是： 1.在菇床、菌牆或菌袋中選擇出菇早、無雜菌病毒侵染、株型緊湊、圓整肉厚、色澤美觀、七八成熟的第一潮菇的肥壯菇體作種菇； 2.在種菇中部取最大的3-4張菇片，用70%的酒精輕擦表面後置於接種箱內消毒； 3.將菇片縱向撕開，在菇蓋與菇柄交界處取一米粒大小的菇肉組織接於PDA培養基上。每隻菇片可接數支試管，每次應多分離幾支試管，方便選優； 4.將試管置於適溫下培養； 5.培養期間每天都要檢查發菌情況，從中選擇菌絲濃白粗壯、邊緣整齊、長速正常、無綠、黃及漿糊狀等雜菌斑點的，表現最好的分離種轉接於木屑麩皮培養基上，於適溫下培養； 6.菌絲發滿後，在接種箱內去掉棉塞，用蠟封口，用黑膜包裹後於4-9℃的冰箱內保藏； 7.在下一個生產季節與原始保藏種作對比試驗，擇優作為生產用種。每季都如此復壯，能逐步提高菌種各方面的性狀，使發菌加快，抗逆抗雜性增強，質量明顯提高。 8.有條件的可以先採用孢子分離法進行分離培養，並栽培出菇，然後從中選擇較好的菇體（種菇選擇標准同上），再採用上述方法進行組織分離，其復壯效果更好。注意：孢子分離的母種不能直接應用到生產中。

Ⅳ 如何純化菌種

菌種在分離、保藏和生產過程中，極易遭致雜菌污染，因此必須對染有雜菌的菌種進行提純，方能用於生產。根據污染的類型和程度，需採用不同的純化措施。
（1）排除細菌或酵母菌污染
在菌種培養中，用肉眼仔細觀察培養基表面，不難發現被細菌或酵母菌污染的分離物常出現黏稠狀的菌落。取被純化物接種在無冷凝水、硬度較高（瓊脂用量2.3%～2.5%）的斜面上，再降低培養溫度至15～20℃，利用某些大型真菌在較低的溫度下，菌絲生長速度比細菌蔓延速度快的特點，用尖細的接種針切割菌絲的前端，轉接到新的試管斜面培養基中培養，連續2～3次就能獲得所要的純菌絲。也可打破試管，挑取內部長有基內菌絲的瓊脂塊，移入無冷凝水的培養基上，該法適於被好氣性細菌污染的母種。
（2）排除黴菌污染
黴菌和細菌不同，它和食用菌菌絲很相似，也有氣生菌絲和基內菌絲。分離的方法主要是抑制雜菌生長，拉大食用菌菌絲生長和雜菌菌絲生長的范圍差，從食用菌菌落前端切割，移植入新培養基。雜菌發現越早，分離的成功率越大。嚴格地說，在斜面培養基上的非接種部位發現的白色菌絲，應認為是雜菌菌落，應馬上提純。若有色孢子已出現，一方面易使分生孢子飄散，另一方面其基內菌絲早已蔓延，可能和食用菌菌絲混生一起。如黴菌剛出現孢子且尚未成熟、變色，則可採用前端菌絲切割法提純。轉管時先將菌絲接種在斜面尖端，當長滿斜面後，及時將原接種點連同培養基一起挖掉；如黴菌菌落顏色已深，說明孢子已成熟，稍一振動孢子就會飄滿培養基，若再行上法意義不大。如菌絲蔓延范圍較大，可將0.2%升汞溶液或1%多菌靈處理過的濕濾紙塊覆蓋在黴菌的菌落上，可抑制黴菌生長，防止孢子擴散，後用滅菌接種鏟將表層鏟掉，隨之用接種針鉤取基內菌絲移入新的培養基，如此2～3次。
（3）限制培養
取直徑7～10毫米、高4～6毫米的玻璃環或不銹鋼環，經酒精燈火焰灼燒後趁熱放到斜面培養基中央，將環的一半嵌入培養基內，然後將染有細菌的接種塊放入環內進行培養。細菌生長會被限制在環內，而食用菌菌絲則可越過環而長到環外的培養基上，轉管後即可得到純化。
（4）覆蓋培養
在污染了細菌的食用菌菌絲斜面上傾注一層厚約2毫米的培養基，培養一段時間，當食用菌菌絲透過培養基形成新的菌落時，即可切割轉管。最好進行二次覆蓋。
（5）基質菌絲純化培養
對棉塞長有黴菌的試管斜面，可將試管打碎，取出培養基，用0.1%升汞浸泡2分鍾，用無菌水淋洗，再用無菌濾紙吸干。取一段2厘米的培養基從中部切開，在斷面上用無菌刀片切成米粒大小的塊，移入新的斜面上進行培養。
（6）葯物處理
菌種提純時，可向培養基中注入選擇性強的抗菌制劑，如加入 5～10毫克/升的多菌靈（MBC）、涕必靈（TBZ）或托布津等，可有效地防止菌霉混生；在每毫升培養基中加入30～40毫克鏈黴素、20～30毫克四環素、金黴素，或50毫克高錳酸鉀，可以有效地防止細菌混生；加入灰黃黴素（20單位/毫升），可抑制真菌生長。
（7）破碎菌絲
從試管中取出已污染的培養基，放在0.1%升汞水中處理2分鍾，用無菌水沖洗，無菌紙吸干，再放入有玻璃珠的無菌水內，經組織破碎，稀釋後注入平板培養，取其單個菌落純化培養。

Ⅵ 菌種鑒定常用的分離方法有哪些

菌種質量檢測的目標包括菌絲形態、菌落特徵以及子實體形態等方面。質量檢測常用方法如下：

（1）建立標準的培養和觀察方法

對於一個栽培品種各菌種的質量檢測，實際上是以該品種典型的生物學特性（包括形態特徵、生理生態特性、栽培習性）為參照標准進行比較，以檢驗菌種是否存在品種退化、菌種老化、病菌侵染、雜菌污染和品種混雜等質量問題。同時，菌種質量檢測不僅要考慮從哪些方面來評價一個菌種的質量優劣，也要考慮用怎樣的標准方法對菌種質量進行評價的問題。因為一定的結果來源於一定的方法和一定的條件。方法和條件不同，結果就失去了可比性，也就無法鑒別，因此，需要建立標准。這些標准包括：培養基、培養條件（溫度、濕度、pH、光照等）、菌種的菌齡等。

（2）連續觀察

在菌種生長過程中，要連續觀察，一切不正常的現象只有在生長過程中才能表現出來。而當菌種長滿培養基表面後，其不正常現象往往會被菌種的過齡而掩蓋。

（3）宏觀檢查

對食用菌母種、原種及栽培種的宏觀檢查要根據其培養特徵來進行（參見前述有關內容），這是菌種生產者及使用者普遍使用的方法，簡單易行，但需要有多年的從業經驗與技術沉澱。如被檢菌種表現出菌落生長速度不一致、氣生菌絲變稀疏或出現扇變菌落、菌落上過早出現色素、或不同特徵的菌落混雜共存、或菌落上出現黑褐色、青灰色、黃褐色或紅色的孢子堆，均可以確定該菌種存在質量問題。優質菌種外觀菌絲潔白、密集粗壯，生長速度一致，齊發並進。

在生產實踐中，廣大菇農和專業工作人員總結出「純、正、壯、潤、香」的質量檢查方法。這種應用感官識別菌種優劣，是經驗的總結，能大致、快速地鑒定出菌種的優劣。具體方法是：

「純」指菌種的純度高，無雜菌感染，無斑塊、無抑制線，無「退菌」、「斷菌」現象等。

「正」指菌絲無異常，具有親本正宗的特徵，如菌絲純白、有光澤，生長整齊，連結成塊，具彈性等。

「壯」指菌絲發育粗壯，長勢旺盛，分枝多而密，在培養基上恢復、定植、蔓延速度快。

「潤」指菌種含水量適中，基質濕潤，與瓶壁緊貼，瓶頸略有水珠，無干縮、鬆散現象。

「香」指具該品種特有的香味，無霉變、腥臭、酸敗氣味。

通過檢測各種食用菌菌絲生長的色澤、速度、均勻度等特徵是否正常，來判斷菌種生長是否正常、是否可用，但辨別不了是否優質高產。

（4）顯微鏡檢查

對菌絲體進行顯微觀察，可以確定菌絲粗細、分枝、隔膜、鎖狀聯合等特性是否均一，是否與該栽培品種的典型特徵一致（參見前述相關內容）。具有不同形態特徵的菌絲體存在於同一菌種體中，表明該菌種存在質量問題；如果出現菌絲體重寄生現象，常表現出不同特徵的菌絲體相互纏繞，或菌絲體中空變細，或在寄生點出現吸器等不正常現象。

鏡檢的方法是：挑取少量菌絲，置載玻片中央的水滴上，用解剖針或接種針撥散，蓋上蓋玻片，也可加碘酒或美藍等染色後進行鏡檢。正常的菌絲一般透明、分枝狀，有橫隔和明顯的鎖狀聯合；異宗結合的食用菌，如僅有單核菌絲，不具結實性，不宜作菌種用；雙核菌絲中，鎖狀聯合多而密，則結菇力強，一般可認為是好菌種。如：

①雙孢菇 觀察雙孢菇單孢子萌發後的菌絲生長形態。凡菌絲潔白、健壯，保存時間較長時菌絲顏色不變，較耐28℃以上氣溫，生長在基質上平貼培養基表面，氣生菌絲不多的，為同化能力較強，產量較高的菌株。相反，菌絲生長初期好，很快變黃變稀，如蜘蛛絲一樣，長出培養基表面菌絲較多的菌株產量較低。

②香菇 觀察香菇的雙核菌絲，在斜面培養基上生長速度達到1.2厘米/天以上的，菌絲不十分粗壯和潔白，鎖狀連合頻繁，鎖狀連合在菌絲間相距較近，且在觀察面上分布均勻，一般均是高產和抗雜能力較強的菌株。香菇出菇的密度與鎖狀連合有一定關系。

③草菇 觀察草菇菌絲，發現菌絲分枝角度大的，出菇率高，產量高。菌絲分枝角度小、平行排列的，產量低。

各種食用菌的菌絲生長是否正常、是否可用，一般都以色澤、速度、均勻度等特徵加以檢測，但這並不能說明其是否優質高產。

（5）拮抗試驗

也稱對峙反應。同一種食用菌，經分離或雜交，將選育出許多不同的菌株，這些菌株的菌絲在形態上很難區別。如不同編號的香菇菌種，都是白色絨毛狀菌絲，鏡檢時均具有鎖狀聯合等。在當前菌種管理工作尚不十分健全的情況下，「同名異種」、「同種異名」的現象普遍發生，要識別異同，可採用「拮抗試驗」加以區別。具體方法是：

用1支20毫米×200毫米的無底試管，中央部位裝入長 5～7厘米的木屑麩糠培養基，兩端壓平並蓋棉塞，滅菌後，兩端各接入兩株受檢的菌種 1小塊，25℃左右條件下培養，當兩端菌絲往中央生長並相互接觸後，把試管移至20℃、約300勒克斯的漫射光下繼續培養，觀察菌絲接觸區有無對峙反應。若無褐色的帶線出現，表示兩個受檢菌株的基因極相似或相同，是相同的菌株，僅編號不同，即同種異名。如果受檢菌株間形成帶線，則表示是不同的菌株。

用平板進行拮抗試驗測試，方法是在無菌的PDA培養基平板上各接入2個或多個被檢菌株的菌種，在上述條件下培養，觀察菌絲相接觸部分有無帶線，以區別相同或不同的菌株。也可用菌種瓶（袋）進行拮抗測試（圖2-11）。

圖2-11 拮抗現象

（6）菌絲長速測定

在適宜的條件下，若菌絲生長迅速、粗壯有力、濃密整齊，一般為優質菌種。若菌絲生長緩慢、中斷或長速極快、稀疏無力、參差不齊和易枯黃萎縮，則為不良菌種。菌絲生長速度測定，可在PDA平板中心接種培養，測量菌落兩個直交直徑，取其平均值。同理，還可在原種、栽培種瓶（袋）壁上劃線測定。

（7）菌絲生長量測定

將等面積的菌苔接入無菌的液體培養基內，在相同的條件下，進行搖床振動培養，經過一定時間後，過濾收集菌絲，反復沖洗干凈後置容器內，80～100℃烘箱中烘乾至恆重後稱重。凡菌絲增殖快、重量重的為優質菌株，而增殖慢、重量輕的為不良菌株。

（8）耐高溫測定

以雙孢菇為例，把菌種置於20～22℃下培養，待菌絲長到1/2試管斜面時，每一菌株取出2～3支試管，置於35℃溫度下，經24小時作抗熱性試驗，然後放到22～23℃下培養，觀察菌絲恢復情況。若菌絲恢復萌發快，仍健壯、旺盛生長，則表明該菌株具有耐較高溫的優良性狀；如果菌絲生長緩慢，出現發黃倒伏，萎縮無力，則為不良菌株。

（9）均一性測定

將母種接種於標准培養基的平板上，並置於標準的環境條件下，每批做30～50個重復，進行長勢和長速的連續觀察記錄。均一性好的品種，每個重復之間長勢和長速幾乎沒有肉眼可見的差異。如果長勢和長速不一，則表明原始的母種的遺傳均一性不良，不宜作生產用種。

（10）純度測定

菌種純度高低是鑒定菌種質量好壞的關鍵環節。優質菌種要求同一管、瓶或袋內只含有所需要的菌種菌絲體，而不能含有其他種類的雜菌。這里所說的雜菌包括細菌、放線菌、酵母菌和各種黴菌，以及含有兩種食用菌菌絲體或同一種食用菌的兩個品種菌絲。凡是被雜菌污染的菌種都是不純菌種，必須予以淘汰。在三角瓶內裝入淺層液體培養基，滅菌後接入經搗散的菌種，25℃條件下培養，約1周觀察，若有氣泡和菌膜發生，並具酸敗味，說明菌種不純，混有雜菌；如果無上述現象則菌種純正無雜。

（11）長勢測定

菌絲長勢包括菌絲生長的狀態和速度。凡是菌絲生長迅速、整齊濃密、健壯有力的菌種為優良菌種。如果菌絲生長緩慢，或長速特快、稀疏無力、參差不齊、易於衰老，則表明是劣質菌種。在鑒別菌絲長勢時，必須注意，在不同培養基上、不同培養條件下，同一種食用菌菌絲的長勢不同，因此，判斷食用菌的菌種長勢，應採用相同的培養基，這樣，結果就可靠一些。在外界環境條件相同的情況下，菌絲生長旺盛、生長量多、生長速度快的要好於菌絲生長弱、生長量少、生長速度慢的菌種。還有一種方法是在三角瓶內裝入淺層液體培養基，滅菌後接入經搗散的菌種，25℃條件下培養，約1周觀察浮在液面的菌種。如果菌絲向旁邊迅速生長、健壯有力、邊緣整齊，且不斷增厚，說明該菌株生長勢強；若表面生長慢、稀疏、菌絲層薄，說明長勢弱，不宜用於生產。

（12）抗霉性測定

以木耳為例：制備平板，在平板的一邊分別接入不同的木耳菌株，每一菌株3個重復，在26～28℃下培養。待木耳菌絲長到平板一半左右時，在平板的另一邊接上木黴菌絲，繼續培養。之後注意觀察木黴菌絲與木耳菌絲的交界處，出現拮抗線的表示木耳菌株抗霉能力強，木黴菌絲無法長過去，為抗霉能力強的菌株。如果木黴菌絲很快蓋過木耳菌絲，說明這個木耳菌株的抗霉能力差或沒有抗霉力。

（13）出菇試驗

對引進或分離的同一品種的若干菌株進行出菇對比試驗，必須是在各級菌種的培養基成分、培養溫度、培養時間及栽培條件基本一致的情況下進行。出菇試驗可按菇類的常規栽培方法進行，數量可少些。為使試驗准確，每一菌株設3～4個重復，以避免試驗的偶然性。在位置排放上盡可能按菌名拉丁文排列，以相同的措施管理，在管理過程中對環境因子的變化、管理措施及生長歷程、品種本身性狀等要詳細全面記錄。以香菇為例記載內容如下：

①母種菌絲生長情況，如菌絲濃淡、生長快慢、菌苔韌性等。

②原種、栽培種中菌絲生長情況，如菌絲萌動、吃料、生長快慢；菌種表面有無菌皮或菌皮厚薄，白色顆粒狀物有無或多少；培養基轉色情況等。

③栽培階段應記載：菇木轉色快慢、顏色深淺；出菇快慢、菇生長密度；子實體經濟性狀，包括菇的大小、厚度、色澤、圓整程度、菌柄長度、粗細等；轉潮快慢；對水分的敏感程度；產量及產量分布；出口菇比例等。

通過對記載資料分析，選出綜合性狀符合要求的菌株，供大面積生產或出售。

出菇試驗因季節推遲或其他原因，可採用一種較簡單的方法來彌補，即直接將接有各菌株並已發好菌的瓶（袋）裝菌種，小心地敲破瓶頸或打開塑料袋口，使培養料外露（如果是雙孢菇，則要覆土調好土粒的濕度），置最適宜的溫、濕度條件下進行出菇（耳）管理，觀察記載各項指標，最後進行評比。但這種方法的結果只能提供參考。

（14）栽培指標

採用一定的栽培規模，通過不同地區、不同原料、不同栽培方式，進行多次反復栽培觀察，詳細記錄、評比後，具有優質、高產、高抗、高效和遺傳性、穩定性強的菌株，才是優質和可推廣的品種。其鑒定的內容、方法和指標有：

①吃料能力鑒定 將菌種接入最佳配方的原種培養料中，置適宜的溫、濕度條件下培養，1周後觀察種菇（耳）菌絲的生長情況。如果菌種塊能很快萌發，並迅速向四周和培養料中生長伸展，則說明該品種的吃料能力強；反之，菌種塊萌發後生長緩慢，遲遲不向四周的料層深處伸展，則表明該品種對培養料的適應能力差。對菌種吃料能力的測定，不僅用於對菌種本身的考核，同時還可以作為對培養料選擇的一種手段。

②成活率 將菌種接在適宜的培養基上，若菌絲能很快恢復、定植和蔓延生長，成活率很高，是質量好的菌種；反之，接種後恢復慢，成活率不高是質量差的菌種。

③出菇快慢 一般說，高溫型的出菇快，低溫型的出菇慢，中溫型的介於兩者之間。而以菇的質量來說，高溫型的質量差，低溫型的質量好。但同一溫型食用菌品種的不同菌株，其菌種接種後若菌絲分解培養料能力強，培養前後培養料失重大，出菇快而多，總產高，即是好菌種；否則為劣質菌種。

④菇峰間隔 在一個生產周期中，子實體發生可分數潮次，產菇最多時稱菇峰，最低時稱菇谷，每個菇峰和菇谷構成一潮菇。凡菇潮多，間隔時間短，說明菌絲分解能力強，供子實體發生的養分積累多，因此轉潮快，是好的菌種；反之，菇潮間隔時間長，或不明顯，零星出菇，產量低，即為劣質菌種。

⑤乾燥率 鮮菇經干制後乾燥率高，說明轉化率高，子實體含水分低，為優質菌種。

⑥生物學效率 生物學效率，指每100千克乾料可產多少千克鮮菇。生物學效率高，則菌種質量好，反之為劣質菌種。

（15）經濟指標

高產不一定高效、豐產不等於豐收，要佔領市場，獲得較高利潤，還必須具備商品的要求，如產品的色、香、味、形，檔次，上市時間，貨架期和保質期等。凡是鮮菇上市時間早，產量高、品質好、檔次高、含水量低，不易變色、變質、破碎、失重，無農葯殘毒、殘臭，符合食品衛生標准和得到的利潤高等，均表示經濟指標高，則為優質菌株；而上市有效時間短，易變色、變味、變質，含水量高，失水嚴重，易破碎，利潤低的菌種均為劣質菌種。如香菇以大小適中、肉厚、色深、邊緣內卷，柄短細為優良；雙孢菇以色白、子實體大小適中，菌柄短，不易開傘等為優良；銀耳以色白、開片好、蒂頭小、松泡率高為優良等。

Ⅶ 採用組織分離法培育菌種要經過哪些步驟

菌棒分離法，包括耳（菇）木分離法和代料基質分離法，通常稱之為「基內菌絲分離法」。菌棒分離法是獲得膠質菌的常用方法。菌棒分離法的主要步驟如下：

（1）耳木分離法

耳木的採集，必須在木耳、銀耳出耳盛期，在已經長過子實體的耳木上，選擇菌絲生長旺盛，周圍無雜菌的部分，用鋸截取一小段，先把耳木表面的雜物洗凈，然後風干或充分晾乾，使耳木乾燥。在分離之前，先把耳木通過酒精燈火焰，重復燎過多次，燒去表面的雜菌孢子，再用75%酒精表面消毒。組織塊必須從耳木中菌絲蔓延生長的部位選取，用無菌解剖刀挑取一小塊耳木組織，接入PDA培養基上，挑取的組織塊越小越好，可減少雜菌污染，提高分離成功率。培養基高壓滅菌後加入廣譜抗菌素（每毫升培養基加鏈黴素或青黴素50～100單位），抑制細菌生長。認真檢查組織分離獲得的菌絲體，淘汰雜菌。挑取菌落邊緣菌絲，接種到新的培養基上，獲得純培養。

（2）代料基質分離法

選擇子實體發生早、產量高、無病蟲害的栽培瓶或栽培袋，待子實體長至八成熟時，從中篩選出最佳的一瓶（或袋），去掉子實體，然後用75%的酒精消毒整個栽培瓶（或袋），同時將接種工具和待接培養料一起放入接種箱內，用甲醛熏蒸消毒。分離時，去掉料面老菌絲，用接種針挑取小塊長有菌絲的培養料，接入試管內，適宜溫度下培養。選取菌絲生長良好的試管轉管純化。

Ⅷ 分離篩選微生物菌種的基本程序

流程
4.1 優良糖化酶菌株的分離與篩選
融化培養基→倒平板→打散孢子團粒→梯度稀釋→塗布平板→培養觀察→滴加碘液→挑菌落→接種→培養→糖化酶活力測定→菌種保存
4.2 酸乳製品中的乳酸菌的分離
制培養基→倒平板→梯度稀釋→塗布平板→培養觀察→挑菌落→接牛乳管→培養觀察→傳代培養→挑選凝乳管→乳酸測定→菌種保存
5 步驟
5.1 優良糖化酶菌株的分離與篩選
（1）融化澱粉察氏培養基，稍冷後倒平板與斜面數個。
（2）取種曲少許，加入10mL帶玻璃球的無菌生理鹽水的三角瓶中，用力振盪打散孢子團粒，使之形成均勻的孢子懸浮粒。然後將其用無菌紗布過濾於無菌試管中。
（3）將上述濾液以10倍稀釋法知釋至10-7，取後3個稀釋度的稀釋液各0.2mL，於澱粉察氏培養基平板上用無菌塗布器分別依次塗布2至3個皿，30℃培養1~2d。
（5）性能測定：測定各菌落的糖化酶活力。
5.2 酸乳製品中的乳酸菌的分離
（1）制備BCG牛乳營養瓊脂培養基。
①稱取脫脂奶粉10g，溶於50mL水中，加入1.6%溴甲酚綠酒精溶液0.07mL，0.075MPa壓力下滅菌20min。
②另取瓊脂2g，溶於50mL水中，加酵母膏1g，溶解後調pH值至6.8，0.1MPa壓力下滅菌20min。
③趁熱將上述兩液以無菌操作混合均勻，倒平板6個，待凝固後，置37℃培養24h，若無雜菌生長，即可使用。
（2）將樣品以10倍稀釋法稀釋至10-7，取其中10-7、10-6 2個稀釋度的稀釋液各0.1~0.2mL，分別置於上述各營養平板上，用無菌塗布器依次塗布2至3個皿，置43℃培養48h，如出現圓形稍扁平的黃色菌落及其周圍培養基亦為黃色者初步定為乳酸菌。
（3）將典型菌落轉至脫脂乳發酵管，43℃培養8~24h，若牛乳管凝固，無氣泡，呈酸性，鏡檢細胞桿狀或鏈球狀，革蘭氏染色呈陽性，則將其連續傳代若干次，43℃培養，挑選出在3~4h能凝固的乳管，保存備用。
（4）乳酸菌的鑒定及生物量的測定。

Ⅸ 菌種分離的一般過程

1. 將液體的混合菌液通過在選擇性培養基上劃線（或塗版，視菌液濃度和活性而定），分離出單菌落。
2. 挑取單菌落液體培養，鑒定。

Ⅹ 純種分離的方法有哪些簡述菌種分離和篩選的步驟

稀釋法，平板劃線法，常用的就是這兩種
篩選就用不同的培養基，加不同的抗生素