1. 解剖老鼠的方法
把老鼠的嘴巴用鐵鉤鉤住，從嘴邊開始可以剖下一整張皮。再從喉部至腹部至肛門用刀輕輕劃開。
2. 小鼠灌胃 處死 解剖
目的：觀察「酒花素油劑」小鼠口服和大鼠皮膚用葯的毒性反應。方法：小鼠灌胃給予不同濃度的「酒花素油劑」(各劑量間比值為0.85)，觀察死亡情況，用Bliss法計算LD 50 。大鼠背部脫毛，塗以不同濃度的「酒花素油劑」，塗葯面積約占體表面積的10%，破損皮膚組用針尖劃破表皮。給葯後觀察大鼠的體重及中毒反應。結果：小鼠口服「酒花素油劑」後的LD 50 為557.06 mg/kg，中毒表現主要為肢體抽搐和呼吸困難。大鼠完整皮膚對濃度為臨床用濃度10倍的「酒花素油劑」能較好耐受，破損皮膚對7倍於臨床用濃度的「酒花素油劑」亦能較好耐受。結論：「酒花素油劑」口服為低毒性物質，完整皮膚和破損皮膚用葯均較為安全。
「酒花素油劑」為上海華光啤酒廠生產的，用於促進慢性瘡瘍及燒傷創口等癒合的外用制劑。為了考察「酒花素油劑」的安全性，本文擬觀察「酒花素油劑」一次給予小鼠口服後所產生的毒性反應及死亡情況，並觀察完整皮膚及破損皮膚的大鼠在短期內接觸「酒花素油劑」後所產生的毒性反應。
1 材料
1.1 動物：昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半；SD大鼠，體重170～230 g，雌雄各半，由第二軍醫大學實驗動物中心提供。
1.2 葯品：「酒花素」及中性植物油(溶劑)由華光啤酒廠提供。根據實驗要求，將「酒花素」溶於中性植物油中，配製成不同濃度的「酒花素油劑」。
2 實驗方法
2.1 小鼠口服LD50〔1〕
根據預試結果，在葯物劑量為366～970 mg/kg的范圍內，將小鼠按體重均勻分為7組，每組10隻(�♀各5隻)，各劑量間距為0.85，灌胃給葯體積為每10 g體重0.1 ml。另設一溶劑對照組，僅給中性植物油0.8 ml/只。
小鼠禁食12小時後灌胃給葯，給葯後即開始觀察動物的毒性反應情況，及時記錄死亡數。死亡動物立即進行解剖，觀察內臟器官的病變情況。未死動物連續觀察9天，9天後處死，解剖，觀察臟器變化。
用Bliss法計算LD 50 ，採用計算機「NDST程序」進行運算。
2.2 大鼠皮膚急性毒性實驗〔2〕
實驗動物分為完整皮膚和破損皮膚兩部分，每個部分又分為大、中、小三個劑量組，劑量間距為0.7，每組10隻大鼠。另設溶劑對照組，每組6隻大鼠。
大鼠在氯胺酮(90 mg/kg ip)麻醉下，進行背部脫毛(用剃刀仔細剪去背部的毛)，脫毛范圍約為4.5 cm×7 cm(約占體表面的10%左右)。在此脫毛區內均勻塗以不同濃度的「酒花素油劑」及溶劑，約0.6 ml/只，塗完後用無毒塑料薄膜覆蓋，綳帶包紮。破損皮膚組大鼠在背部脫毛區用針尖劃破表皮，以滲血為度，然後再塗以不同濃度的「酒花素油劑」。給葯後即開始觀察動物的全身毒性反應，死亡動物立即進行屍體解剖，肉眼觀察各臟器的病變情況，10天後處死大鼠，大體解剖，肉眼觀察全身各器官的變化情況。
3 結果
3.1 小鼠口服LD 50
小鼠灌胃給葯後，死亡動物約在0.5～2小時內出現呼吸急促、煩躁等表現，隨後出現肢體抽搐，死亡前有明顯的驚厥表現。死亡一般發生在給葯後的1～6小時內，個別發生在12～48小是內。死後立即屍檢可見，小鼠因死前的肌肉強直而表現為屍體僵硬，心臟停跳於收縮狀態。內臟重要器官(心、肺、肝、脾、腎及消化道等)未見充血、水腫及明顯的器質性變化。存活動物多數有一過性的呼吸急促表現，24小時內活動稍差，食慾減少。24小時(個別48小時)後逐漸恢復活動和攝食，一般情況良好，無其他不良反應的表現發生。連續觀察9天後處死小鼠，大體解剖未見肉眼可見的病理變化。溶劑對照組10隻小鼠給葯後無明顯的毒性反應出現，觀察10天後處死，大體解剖亦無異常發現。
各劑量組的死亡情況見表1，死亡率無明顯的性別差異。
用Bliss法計算得LD 50 =577.06 mg/kg,95%可信限范圍為505.74～658.43 mg/kg。
3.2 大鼠皮膚急性毒性實驗
各劑量組大鼠的死亡情況及給葯前後的體重變化情況見表2。
表1 小鼠口服「酒花素油劑」後LD 50 計算(Bliss法)
劑量(mg/kg)
對數劑量(X)
動物數(只)
死亡動物數(只)
死亡率(%)
機率單位(Y)
970
2.987
10
10
100
6.75
824
2.916
10
8
80
6.20
701
2.846
10
7
70
5.66
596
2.775
10
6
60
5.11
506
2.704
10
4
40
4.56
430
2.633
10
2
20
4.01
366
2.563
10
0
0
3.46
表2 大鼠皮膚用「酒花素油劑」後的毒性反應
組
別
葯物濃度(%)
動物數(只)
死亡動物數(只)
體重 (g,x±s)
用葯前 用葯後
完
整
皮
膚
A
53.67
10
0
206±19
210±24
B
37.57
10
0
207±21
220±20
D
溶劑
6
0
198±19
206±22
破
損
皮
膚
A
53.67
10
2
200±20
204±23
B
37.57
10
0
202±18
207±21
C
26.30
10
0
198±19
199±24
D
溶劑
6
0
206±22
208±20
在完整皮膚的大鼠中，兩個用葯組及溶劑對照組均無明顯的毒性表現，用葯後飲食、活動無明顯變化。各組動物給葯局部均未發現明顯的紅、腫等刺激反應，1周後脫毛區開始長毛。連續觀察10天後處死大鼠，大體解剖未見明顯的臟器異常變化。
破損皮膚大鼠用葯後，大劑量組在4～24小時內有2隻死亡，死前出現明顯的呼吸困難及輕度肌肉抽搐，死後屍體解剖無明顯的異常發現。另有兩只大劑量組及1隻中劑量組的大鼠在用葯後8～12小時內出現一過性的呼吸困難。其餘各用葯組及溶劑對照組的大鼠均未見明顯的毒性反應，僅少數動物在用葯當天食慾稍差。連續觀察10天，大鼠飲食、活動均無異常，體重變化亦不明顯。大鼠皮膚破損區創口第二天開始結痂，無明顯的紅腫及潰爛表現，亦無感染發生。創口約1周左右癒合，無明顯疤痕。觀察10天，部分大鼠脫毛局部已開始長毛，10天後處死，大體解剖未發現肉眼可見的異常變化。
4 討論
酒花素是從啤酒花中提取的有效成分，主要由蛇麻酮、草酮等組成。已有的研究資料表明，酒花素有一定的抗菌和促進肉芽組織增生的作用。本實驗的結果顯示，大鼠在用葯面積占體表面積10%的情況下，破損皮膚對濃度為26.30%的「酒花素油劑」能較好耐受，對37.57%的濃度亦能耐受，且破損皮膚創口癒合較快，無感染發生。該兩濃度分別為臨床用葯濃度的5倍和7倍(臨床用葯濃度為5%)。完整皮膚對於臨床用葯濃度10倍劑量的「酒花素油劑」亦能耐受，不出現明顯的中毒反應。作為溶劑的中性植物油用在破損皮膚和完整皮膚上均無明顯的毒性反應。小鼠口服該葯的LD 50 為577.06 mg/kg，屬低毒物質。以上結果提示，「酒花素油劑」臨床應用較為安全。
3. 如何解剖小鼠
器械：眼科剪刀、鑷子、泡沫板、針頭
1.摘眼球放血
2.脫頸椎處死
3.用針頭固定四肢於泡沫板上，腹部朝上。
4.鑷子捏起腹部皮膚，剪刀剪一小口，暴露腹壁。注意不要一刀剪破腹壁，這樣毛容易進入腹腔，裡面就不是無菌的了。
5.用手在小口處撕開皮膚，盡量暴露腹部。
6.鑷子夾起腹壁，剪開腹腔即可。
如果要求無菌的話，處死的小鼠先在75%酒精中浸泡5min，鑷子，剪刀都要消毒。