1. 液相色譜柱應該怎樣清洗
1.高效液相色譜柱柱子的清洗
即使樣品和流動相已做過前處理,也仍難以完成避免柱子受到污染,因此必須對柱子行清洗。清洗應定期進行,如果在短期內分析許多樣品,則以每日清洗一次為宜,至少也應一周一次,防止有太多的雜質在柱上堆積。
反相柱的常規洗滌辦法是:分別取甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱體積(既對於一根4.6mmX25cm的柱來說,通常是50-60ml,而對於9.4mm內經X50cm的柱來說,通常是500-600ml) ,使之通過柱子。然後用流動相平衡(通常仍用20倍柱體積),柱一般將恢復正常。如果選擇性仍和以前不一樣,則表明還有其他雜質留在柱子里,這時應考慮更加嚴格的清洗:先用20倍柱體積的水,再用相同體積0.05mol/L硫酸,最後用流動相溶劑。酸洗常能洗下有機溶劑所不能洗下的剩餘雜質。在低pH值下做長期(一天或更長)清洗是不適宜的,但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,一般對健合相沒有損害。注意,強鹼不能用來清洗任何微粒硅膠柱(不論是健合相還是非健合相),因為硅膠骨架會溶解。對於嚴重污染的反相柱,只能採用再生的方法。
2.高效液相色譜柱柱頭空隙的處理
拆下不銹鋼燒結過濾器後,檢查柱床,常可見柱頭塌陷,此時先剔掉無規則床層和帶色填料,使柱床呈白色並完全水平,再使甲醇作糊狀填料勻漿液,將填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,重復數次,直到水平,完成了柱的再生。此時,如果柱頭孔隙深度小於1cm,可以採用下述局部重裝的辦法,否則,柱應當完全重裝或更換。