各種細胞培養的方法去哪裡看

① 細胞培養的方法有哪些

細胞培養首先分為原代培養和傳代培養.
原代培養需要從組織中消化、分離、純化出單細胞,然後繼續進行傳代、凍存；
傳代培養首先：
細胞復甦:
1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-38度,取出凍存的細胞迅速放入後交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
2.在無菌台內將完全培養基加入培養瓶內,然後用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養瓶內輕輕搖晃,使細胞均勻後置培養箱內培養,24h後換液；也可復甦當時離心（1000rpm 5min左右）後,完全培養基重懸培養,適時換液.
細胞傳代:
1.貼壁細胞:
對於貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和後加入的消化液,使強度減弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死細胞,50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,(根據配製強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鍾,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落後,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養基後,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然後收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養基重懸沉澱,加入完全培養基後繼續培養或實驗.
2.懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入完全培養基繼續培養,如要高濃度或需更換新培養基,可先離心（1000rpm,5min左右）後加入完全培養基,輕輕吹勻後,分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養.
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② 請教收集細胞培養上清液的方法

把要收集上清的細胞重新在一次性培養板中培養，如果是貼壁細胞的話，在收集前24小時，改用不完全培養基培養，即用不加血清的培養基。收集的時候，用移液槍吸取上清即可。

③ 腫瘤細胞培養方法哪位比較了解啊拜託各位大神

培養方法 腫瘤細胞培養成功關鍵在於：取材、成纖維細胞的排除、選用適宜的培養液和培養底物等幾個方面。在具體培養方法方面，腫瘤細胞培養與正常組織細胞培養並無原則差別，初代培養應用組織塊和消化培養法均可。(一)要點 1.取材： 人腫瘤細胞來自外科手術或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區，取材時盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。癌性轉移淋巴結或胸腹水是好的培養材料。取材後宜盡快進行培養，如因故不能立即培養，可貯存於4℃中，但不宜栽過24小時。 2.培養基： 腫瘤細胞對培養基的要求不如正常細胞嚴格，一般常用的 RPMIl640、 DMEM、Mc-Coy5A等培養基等皆可用於腫瘤細胞培養。腫瘤細胞對血清的需求比正常細胞低，正常細胞培養不加血清不能生長，腫瘤細胞在低血清培養基中也能生長。腫瘤細胞對培養環境適應性較大，是因腫瘤細胞有自泌(Autocrine)性產生促生長物質之故。但這並不說明腫瘤細胞完全不需要這些成分。按不同細胞需要不同的生長因子;腫瘤細胞與正常細胞之間、腫瘤細胞與腫瘤細胞之間對生長因子的需求都存在著差異。但大多數腫瘤細胞培養中仍需要生長因子。有的還需特異性生長因子〔如乳腺癌細胞等)。總之培養腫瘤細胞仍需加血清和相關生長因子培養更易成功。 3.成纖維細胞的排除： 成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細胞。而且成纖維細胞常比腫瘤細胞生長得快，最終能壓制腫瘤細胞的生長。因此排除成纖維細胞成為腫瘤細胞培養中的關鍵。(二)成纖維細胞排除法 1.機械刮除法： 是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭(用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲)、或裹少許脫脂棉製成，裝入試管中高壓滅菌後備用(也可用特製電熱燒灼器刮除)。刮除程序為： (1)標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位; (2)刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間; (3)用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞; (4)注入培養液繼續培養，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至完全除掉為止 2.反復貼壁法： 根據腫瘤細胞比成纖維細胞貼壁速度慢的特點，並結合使用不加血清的營養液，把含有兩類細胞的細胞懸液反復貼壁，使兩類細胞相互分離，操作方法與傳代相同。 (1)待細胞生長達一定數量後，倒出舊培養液，用胰酶消化後，Hanks 沖洗2次，加入不含血清的培養液，吹打製成細胞懸液; (2)取編號為此A、B、C三個培養瓶;首先把懸液接種入A培養瓶中。置溫箱中靜止培養5～20分鍾後，輕輕傾斜培養瓶，讓液體集中瓶角後慢慢吸出全部培養液，再接種入B培養瓶中後;向A瓶中補充少許完全培養液置溫箱中繼續培養; (4)培養B瓶中細胞5～20分鍾後，接處理A的方法，把培養液注入C培養瓶中;再向B瓶中補加完全培養基。當三個瓶內都含有培養液後，均在溫箱中繼續培養。如操作成功，次日觀察可見A瓶主要為成纖維細胞，B瓶兩類細胞相雜，C瓶可能主要為癌細胞。必要時可反復處理多次，直至癌細胞純化為止。 3.消化排除法： 此法曾用於乳癌細胞的培養，具體程序是： (1)先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1：1)混合液漂洗培養細胞一次，然後再換成新的混合液繼續消化，並在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶，到半數細胞脫落下來後，便立即停止消化; (2)把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養液置溫箱中培養;向原瓶內也補加新的培養液繼續培養。用此法處理後，成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落。經過幾次反復處理，可能把成纖維細胞除凈。 4.膠原酶消化法： 本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。 (1)可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發現成纖維細胞被除掉後，即終止消化; (2)用Hanks洗滌處理一次後，更換新培養液，繼續培養，可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈，可再次重復。 5.其它方法： 有人發現聚丙烯醯胺有抑製成纖維細胞生長的作用;也有人用聚蔗糖制備成比重1.025～1.085的密度梯度離心液，加入細胞懸液後，在23℃中800g離心 10分種。在比重1.025～1.050層為成纖維細胞，在比重1.050～1.085層為上皮細胞，再經過分離進行培養。最近也有人應用特殊化學物如SOD抑製成纖維細胞生長的方法。選用上述任何一種方法，都需進行試驗，取得必要經驗，找出適合的條件，才能獲得好的效果。 (三)提高腫瘤細胞培養存活率和生長率措施 根據人們的經驗，腫瘤細胞在體外不易培養，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。當腫瘤組織或細胞初代接種培養後，常出現以下幾種情況： 完全無細胞游出或移動; 有細胞移動和游出，但無細胞增殖，細胞長時間處於停滯狀態以致難以傳代; 有細胞增殖，傳若干代後停止生長或衰退死亡; 傳數代後細胞增殖緩慢，經過一段停滯期後，才又呈旺盛生長狀態，形成穩定生長的腫瘤傳代細胞系。 以上現象說明腫瘤細胞對體外生存條件有較高的要求，並需經過對新環境的適應才能生長，因此欲獲得好的培養效果，不能局限於一般培養 上面是我在生物幫上找到的，你可以到那裡查看完整的文檔，有詳細的介紹的，那裡有全面的生物產品和技術信息哦，可以看下 www.bio1000.com/zt/cell/201378.html 那裡應該可以找到相關介紹

④ 常用的植物細胞培養方法有哪些

固體培養和液體培養。
植物組織培養包括2個過程，脫分化和再分化。
1.外植體（被培養的組織塊--葉片碎片、莖尖、幼胚等或細胞--去壁的葉肉細胞）細胞恢復分裂，形成大量的細胞--愈傷。這個過程是脫分化。由於是已經成熟的細胞脫離了成熟細胞的狀態，回到類似胚胎階段的狀態，故稱脫分化。
2.愈傷組織的細胞經過誘導，分化形成根、莖、葉等器官甚至形成類似種子中的胚一樣的結構--胚狀體（體胚），這個過程就是再分化。

⑤ 細胞培養的具體步驟和要求以及注意事項

一、細胞復甦

將凍存細胞從液氮中取出後，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養基，輕輕吹打，接種於10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加人1ml DMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經高壓滅菌，保存於40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。

凍存液的配製：70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

注意事項

（1）進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（2）細胞污染的預防

①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，並在無菌實驗檢測陰性後才能使用。操作室及剩餘的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

②操作過程防止污染。

③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂後才能進入細胞間。

④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全櫃之外的物品，必須及時對手套進行消毒。

⑤進入細胞培養間後關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全櫃的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。

⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，並將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

⑦實驗操作時生物安全櫃的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區，以免造成不必要的污染。

⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

⑨不要從敞開的容器口上方經過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。

⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（3）防止細胞交叉污染

①在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，最好作上標記便於辨別。按順序進行操作，一次只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。

②在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。

③所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發生污染可重新復甦細胞，繼續培養。

(5)各種細胞培養的方法去哪裡看擴展閱讀：

細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸鹼度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖並維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。

不論對於整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。

細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以藉此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

⑥ 細胞培養的方法有哪些求詳解

細胞培養首先分為原代培養和傳代培養。
原代培養需要從組織中消化、分離、純化出單細胞，然後繼續進行傳代、凍存；
傳代培養首先：
細胞復甦:
1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-38度,取出凍存的細胞迅速放入後交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
2.在無菌台內將完全培養基加入培養瓶內,然後用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養瓶內輕輕搖晃,使細胞均勻後置培養箱內培養，24h後換液；也可復甦當時離心（1000rpm 5min左右）後，完全培養基重懸培養，適時換液。
細胞傳代:
1.貼壁細胞:
對於貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和後加入的消化液,使強度減弱.PBS清洗2-3次，去除血清和死細胞，50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,(根據配製強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鍾,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落後,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養基後,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然後收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養基重懸沉澱，加入完全培養基後繼續培養或實驗.
2.懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入完全培養基繼續培養,如要高濃度或需更換新培養基，可先離心（1000rpm,5min左右）後加入完全培養基,輕輕吹勻後,分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養.
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⑦ 細胞培養技術有哪些

司徒鎮強的《細胞培養》里有介紹，樓主可以看一下。。。

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⑨ 植物細胞培養的方法有哪些

植物組織培養一般分為以下幾種：

1、胚胎培養
指以從胚珠中分離出來的成熟或未成熟胚為外植體的離體無菌培養。

2、器官培養
指以植物的根、莖、葉、花、果等器官為外植體的離體無菌培養，如根的根尖和切段，莖的莖尖、莖節和切段，葉的葉原基、葉片、葉柄、葉鞘和子葉，花器的花瓣、雄蕊（花葯、花絲）、胚珠、子房、果實等的離體無菌培養。

3、組織培養
指以分離出植物各部位的組織（如分生組織、形成層、木質部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓部等），或已誘導的愈傷組織為外植體的離體無菌培養。這是狹義的植物組織培養。

4、細胞培養
指以單個游離細胞（如用果酸酶從組織中分離的體細胞，或花粉細胞，卵細胞）為接種體的離體無菌培養。

5、原生質體培養。
指以除去細胞壁的原生質體為外植體的離體無菌培養

組織培養的特點

1、培養條件可以人為控制
組織培養採用的植物材料完全是在人為提供的培養基和小氣候環境條件下進行生長，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災害性氣候的不利影響，且條件均一，對植物生長極為有利，便於穩定地進行周年培養生產。

2、生長周期短，繁殖率高
植物組織培養是由於人為控制培養條件，根據不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養條件，因此生長較快。另外，植株也比較小，往往20-30d為一個周期。所以，雖然植物組織培養需要一定設備及能源消耗，但由於植物材料能按幾何級數繁殖生產，故總體來說成本低廉，且能及時提供規格一致的優質種苗或脫病毒種苗。

3、管理方便，利於工廠化生產和自動化控制
植物組織培養是在一定的場所和環境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營養、激素等條件，極利於高度集約化和高密度工廠化生產，也利於自動化控制生產。它是未來農業工廠化育苗的發展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、防治病蟲等一系列繁雜勞動，可以大大節省人力、物力及田間種植所需要的土地

⑩ 動物細胞培養方法相關資料在哪裡能夠找到

1 圖書館有很多關於動物細胞培養的書
2 資料庫查文獻
3 相關網站，比如http://www.biomart.cn/experiment/430/488/490/index.htm