固體平板分區劃線步驟及培養方法

❶ 土壤中自身固氮菌的分離與培養怎樣劃線

土壤中自身固氮菌的分離與培養劃線方法如下：平板劃線分離法，是用接種環在平板培養基表面通過分區劃線而達到分離微生物的一種方法。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次做「由點到線」的稀釋而達到分離的目的。方法如下:步驟一，倒平板，熔化已經配製好並滅過菌的瓊脂培養基，冷卻至45℃左右倒平板。水平靜置待冷卻凝固。
步驟二，將待劃線分離的平板倒置於煤氣燈的左側，貼上標簽（或做記號），若劃線時分區沒把握，可在皿底上預先分為四個區。
步驟三，接種環燒紅滅菌，並伸入菌種試管內冷卻，挑取少量斜面菌苔。
步驟四，左手拿培養皿底，此時皿底盡量與桌面垂直，然後將接種環上的菌種先在平板的A區劃3～5條平行線，再燒掉環上剩餘的菌種。
步驟五，將燒紅的接種環在平板培養基的邊緣冷卻。然後將平板轉動一定角度（約60°），用接種環通過A區向B區做來回平行劃線；同樣，由B區向C區劃線。最後由C區向D區劃線。區與區的線條間的夾角最好成120°，這樣可使D區的線條與A區線條相平行，並可避免此兩區線條接觸。最後將平板倒放在培養皿蓋中。

❷ 培養基倒平板培養後怎樣劃線分離

平板劃線法分離菌種實驗步驟

1、融化培養基

將裝有伊紅美藍瓊脂培養基的三角瓶放入熱水浴中加熱至沸，直至充分融化。

2、倒平板

待培養基冷卻至50℃左右後，按無菌操作法倒平板(每皿約倒15ml)，平置，待凝。

操作方法：右手持盛培養基的三角瓶置火焰旁邊，用右手手掌和小指將瓶塞輕輕地撥出，瓶口保持對著火焰；然後左手拿培養皿並將皿蓋在火焰附近打開一條稍大於瓶口的縫隙，迅速倒入培養基約15ml，加蓋後輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布在培養皿底部，然後平置於桌面上，待凝後即為平板。

3、作分區標志（操作熟練後此步驟可省略） 在皿底用記號劃分成4個不同面積的區域，使A<B<C<D，且各區的夾角應為120°左右，以便使D區與A區所劃出的線條相平行、美觀。

4、劃線操作

1)挑取菌樣：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量含菌試樣。

2)先劃A區：將平板倒置於酒精燈火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直於桌面，並讓平板面向火焰。右手持含菌的接種環，先在A區輕巧地劃3~4條連續的平行線當作初步稀釋的菌源。燒去接種環上的殘余菌樣。

3)劃其餘區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉至劃線位置，把接種環通過A區(菌源區)而移至B區，隨即在B區輕巧地劃上6~7條緻密的平行線，接著再以同樣的操作在C區和D區劃上更多的平行線，並使D區的線條與A區平行(但不能與A區或B區的線條接觸！)，最後，將左手所持皿底放回皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。

5、恆溫培養

將劃線後的平板至37℃倒置培養2~3天。

6、挑單菌落

良好的結果應在C區出現部分單菌落，而在D區出現較多獨立分布的單菌落。然後從典型的單菌落中挑取少量菌體至試管斜面，經培養後即為初步分離的純種。

7、清洗培養皿

將廢棄的帶菌平板作煮沸殺菌後進行清洗、晾乾。