㈠ 酶活力測定的方式方法有哪些
測定酶活力,可用物理法,化學法或酶分析法等方法。常用的方法有:第一,在適當的條件下,把酶和底物混合,測定生成一定量產物所需的時間,此即終點法。第二,將酶和底物混合後隔一定時間,間斷地或連續地測定反應的連續變化,如吸收度的增加或減少。
第三,將酶與底物混合後,讓其反應一定時間,然後停止反應,定量測定底物減少或產物生成的量。後兩種方法稱為動力學法或反應速率法:按取樣及檢測的方式可稱為取樣測定法或連續測定法。
(1)定時法:(兩點法)
通過測定酶反應開始後某一時間段內(t1到t2)產物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開始的時間。
酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間,通過加入強酸、強鹼、蛋白醫學教育網整理沉澱劑等,使反應完全停止(也叫中止反應法)。加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產物的變化。
該法最基本的一點是停止反應後才測定底物或物的變化。
優點:簡單易行,對試劑要求不高。
缺點:難保證測定結果的真實性。
難以確定反應時間段酶促反應是否處於線性期。隨著保溫時間的延續,酶變性失活加速。
(2)連續監測法:
又稱為動力學法或速率法、連續反應法。
在酶反應過程中,用儀器監測某一反應產物或底物濃度隨時間的變化所發生的改變,通過計算求出酶反應初速度。
連續監測法根據連續測得的數據,可選擇線性期的底物或產物變化速率用於計算酶活力。
因此連續監測法測定酶活性比定時法更准確。
實際工作中,採用工具酶的酶偶聯法已經成為醫學教育網整理應用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。
(3)平衡法:
通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點法。
㈡ 土壤纖維素酶活性的測定方法
2g鮮土,加入100ml血清瓶中,8ml1%羧甲基纖維素,再加入2ml pH5.5的磷酸緩沖液,再加入0.6ml甲苯,72h(37℃)培養過濾,取2ml濾液,加入3ml3.5-二硝基水楊酸,水沸5min,定容到25ml,540nm處比色。