滅菌釜安裝方法求回答

① 分光光度計測磷

水中磷檢測方法－分光光度計／維生素丙法 一、方法概要水樣以硫酸、過硫酸鹽消化處理，使其中之磷轉變為正磷酸鹽之形式存在後，再加入鉬酸銨、酒石酸銻鉀，使其與正磷酸鹽作用生成一雜多酸 － 磷鉬酸(phosphomolybdic acid)，經維生素丙還原為藍色復合物鉬藍(molybdenum blue)，以分光光度計於波長 880 nm 處測其吸光度定量之。水樣如未經消化處理，所測得僅為正磷酸鹽之含量。二、適用范圍本方法適用於地面水體、地下水、海域水質及廢(污)水中磷之檢驗。採用1公分樣品槽時檢量線范圍為 0.02 ～ 0.50 mg P / L；採用 5 公分樣品槽則為 0.005 ～ 0.050 mg P / L。方法偵測極限為0.006 mg P / L。三、干擾（一）高濃度之鐵離子或砷酸鹽濃度大於 0.1 mg As / L 時，產生干擾，可以亞硫酸氫鈉排除干擾。（二）六價鉻、亞硝酸鹽、硫化物、矽酸鹽產生干擾。（三）水樣含有較高之色度或濁度時，可於水樣中添加除維生素丙與酒石酸銻鉀以外之所有相同試劑，並測定其吸光度，作為空白校正值。四、設備及材料（一）玻璃器皿：所有之玻璃器皿先以(1 + 1)之熱鹽酸溶液清洗，再以蒸餾水淋洗之。（二）pH 計。（三）加熱裝置或高壓滅菌釜。（四）分光光度計，使用波長 880 nm，附 1、5 公分之樣品槽。五、試劑（一）試劑水：不含足以形成干擾之污染物之蒸餾水。（二）酚?指示劑：溶解 0.5 g酚?(phenolphthalein)於 50 mL 95 ％ 乙醇或異丙醇(isopropylalcohol)，加入 50 mL 蒸餾水。（三）硫酸溶液，11 N：緩慢將 310 mL 濃硫酸加入於 600 mL 試劑水，冷卻後稀釋至 1 L。（四）硫酸溶液，5 N：緩慢將 70 mL 濃硫酸加入於 300 mL 試劑水，冷卻後稀釋至 500 mL。（五）硫酸溶液，1 N：緩慢將 14 mL 濃硫酸加入於 300 mL 試劑水，冷卻後稀釋至 500 mL。（六）過硫酸銨：試葯級，結晶狀。（七）氫氧化鈉溶液，1 N：溶解 40 g 氫氧化鈉(NaOH)於試劑水，稀釋至 1 L。（八）酒石酸銻鉀溶液：在 500 mL 量瓶內，溶解 1.3715 g 酒石酸銻鉀於 400 mL 試劑水，稀釋至刻度。貯存於附有玻璃栓蓋棕色瓶中，並保持 4 ℃ 冷藏。（九）鉬酸銨溶液：溶解 20 g 鉬酸銨於試劑水中，再定量至 500 mL。貯存於塑膠瓶並保持 4 ℃ 冷藏。（十）維生素丙溶液，0.1 M：溶解 1.76 g 維生素丙(ascorbic acid)於試劑水中，再定量至 100 mL。使用當天配製。（十一）混合試劑：依次混合 50 mL 5N 硫酸溶液，5 mL 酒石酸銻鉀溶液，15 mL 鉬酸銨溶液及 30 mL 維生素丙溶液使成 100 mL 混合試劑，每種試劑加入後，均需均勻混合，且混合前所有試劑均需保持於室溫，若混合後產生濁度時，搖湯數分鍾使濁度消失，本試劑不穩定，應於使用前配製。（十二）磷標准儲備溶液：在 1,000 mL 量瓶內，溶解 0.2197 g 無水磷酸二氫鉀於試劑水，稀釋至刻度；1.00 mL ＝ 50.0 &mug P。（十三）磷標准溶液(Ⅰ)：在 1,000 mL 量瓶內，以試劑水稀釋 10.0 mL 磷標准儲備溶液至刻度；1.00 mL ＝ 0.50 &mug P，適用於 1 cm 樣品槽。（十四）磷標准溶液(Ⅱ)：在 1,000 mL 量瓶內，以試劑水稀釋 100 mL 磷標准溶液(Ⅰ)至刻度；1.00 mL ＝ 0.05 &mug P，適用於 5 cm 樣品槽。（十五）亞硫酸氫鈉溶液，溶解 5.2 g 亞硫酸氫鈉於 1.0 N 硫酸溶液中，再以 1.0 N 硫酸溶液定量至 100 mL。六、采樣及保存以 1 ＋ 1 熱鹽酸洗凈之玻璃瓶採集水樣，添加硫酸至 pH 值 ＜ 2，於 4 ℃ 暗處冷藏，保存期限為七天。若為檢測正磷酸鹽，則無須添加硫酸，且須於 48 小時內進行檢測。七、步驟（一）總磷(包括正磷酸鹽、聚(焦)磷酸鹽及有機磷，【orthophosphate、condensed phosphate and organically bound phosphate】)1.取 50 mL 水樣或適量水樣稀釋至 50 mL，置於 125 mL 之三角燒瓶，加入一滴酚?指示劑，如水樣呈紅色，滴加 11 N 硫酸溶液至顏色剛好消失，再加入 1.0 mL 11 N 硫酸溶液。2.加入 0.4 g 過硫酸銨。3.置於已預熱之加熱裝置上，緩慢煮沸 30 ～ 40 分鍾或直至殘留約 10 mL 液體時(注意勿使水樣乾涸)；或將水樣置於高壓釜中，以 120 ℃，1.0 ～ 1.4 Kg / cm2 加熱 30 分鍾。4.冷卻後以蒸餾水稀釋至約 30 mL(注 1)，以 1 N 或適當濃度之氫氧化鈉溶液調整 pH 至 7.0 ± 0.2 後稀釋至 50.0 mL。若使用高壓釜消化，則冷卻後以 1 N 或適當濃度之氫氧化鈉溶液調整 pH 至 7.0 ± 0.2 後稀釋至 100 mL(注 2)。5.加入 8 mL 混合試劑，混合均勻，在 10 ～ 30 分鍾時段內以分光光度計，讀取 880 nm 之吸光度，由檢量線求得磷含量(&mug)。（二）正磷酸鹽1.取 50.0 mL 水樣或適量水樣稀釋至 50.0 mL，置於 125 mL 之三角燒杯，加入 1 滴酚?指示劑，如水樣呈紅色，滴加 5 N 硫酸溶液至顏色剛好消失。2.依上述(一)5. 步驟操作之。（三）檢量線制備分別精取 0.00，5.00，10.0，20.0，30.0， 50.0 mL 磷標准溶液(I)或(Ⅱ)(或其他適合之濃度)稀釋至 50.0 mL，依水樣相同之步驟操作，讀取 880 nm 之吸光度，繪制磷含量(&mug)- 吸光度之檢量線。八、結果處理磷濃度(mg P / L)＝ 檢量線求得磷含量(&mug)/ 水樣體積(mL)九、品質管制（一）檢量線：檢量線之相關系數應大於或等於 0.995。（二）空白分析：每十個樣品或每批次樣品至少執行一次空白樣品分析，空白分析值應小於方法偵測極限之二倍。（三）重覆分析：每十個樣品或每批次樣品至少執行一次重覆分析。（四）查核樣品分析：每 10 個或每一批次之樣品至少執行一個查核樣品分析，並求其回收率。（五）添加標准品分析：每十個樣品或每批次樣品至少執行一次添加標准品分析。十、精密度與准確度國內某單一實驗室進行試劑水添加標准品分析結果表一。十一、參考資料（一）American Public Health Association, American Water Work Association ＆ Water Pollution Control Federation, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th ed, Method 4500 - P E, pp4 &ndash 146 ~ 4 - 147, APHA, Washington, D.C. USA, 1998.（二）U.S. Environmental Protection Agency. Environmental Monitoring and Support Laboratory. Methods for Chemical Analysis of Water and Wastewater, Method 365.2, 365.3. Cincinnati, Ohio. USA, 1983. 注一：若水樣含砷或高濃度鐵，加入5mL亞硫酸氫鈉溶液，混合後置於 95 ℃ 水浴中 30 分鍾(保持水樣溫度為 95 ℃ 20 分鍾)冷卻之。注二：水樣中和後如呈渾濁，添加 2 ～ 3 滴 11 N 硫酸溶液混合均勻，視需要過濾再行稀釋。注三：廢液分類處理原則 － 本檢驗廢液依一般無機廢液處理。 表一 國內某單一實驗室進行試劑水添加標准品分析結果水樣基質添加濃度平均測定值測定次數回收率(％)相對誤差(％)試劑水0.0050.005171020.03試劑水0.010.00917910.09試劑水0.030.031471050.06單位：mg P/ L ，採用5 cm樣品槽

② 濕熱滅菌器的溫度驗證要怎麼進行

設計要求出發，演化成為目前國內廣泛採用的濕熱溫度驗證的大容量注射劑實驗方法和實驗器具,也是溫度驗證程序設計的基本要求。使用其作功能測試步驟及參考設備如下：前提： 濕熱滅菌設備的安裝測試合格，現場和公用工程外接條件完備。即通常講（DQ， IQ）已經結束後，位置在OQ運行確認。溫度驗證程序設計基本要求；濕熱滅菌的基本程序設計基本要求源於US.FDA在上世紀70年代中期提出的，且在80年代施行的：「關於大容量注射劑GMP技術性原則」五個方面要求：在滅菌工序應能確保產品達到F0 ≥ 8；滅菌前，待實驗的容器中有最高帶菌量，污染菌應具有最強的耐熱性；每一個滅菌釜的每種裝載方式及每種規格容器的驗證實驗均至少使用10支熱電偶進行熱分布實驗；用待實驗容器灌注粘度相類似的產品進行熱穿透實驗，找出容器中升溫最慢點的位置，至少使用10個容器，每個均加入適當的生物指示劑並且插有熱電偶。當滅菌釜的參數已經達到熱分布實驗已經證實的可重現狀態，溫度達到設定的滅菌溫度時，開始測定F0 值，直到開始冷卻止；當產品達到滅菌溫度直到開始冷卻的過程，溫度變化必須保持在 ±0.5℃以內。目的:探討預真空壓力滅菌器定期進行溫度驗證的必要性,幫助醫療機構選擇合適的方法對其進行溫度驗證.方法:給出預真空滅菌器的溫度性能要求和驗證方法,並進行實例分析.結果:滅菌室容積不同時,檢驗負載和測溫點的布置差異較大.結論:在排除影響溫度性能因素的基礎上,醫療機構應定期對預真空滅菌器進行溫度驗證.

③ 有關大腸桿菌、金色葡萄糖球菌等有關醫療監測的檢測指標和方法啊

檢測原理：
大腸菌群是一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，該菌主要來源於人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中的大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。
2.儀器設備與器具：
2.1 恆溫培養箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接種針。
2.4 顯微鏡。
2.5 超凈工作台。
2.6 玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 滅菌釜。
2.9 培養皿（直徑為90mm）、試管，經121℃、30分鍾滅菌。
2.10試管夾、酒精燈、秒錶、載玻片 3.培養基及試劑：
3.1 乳糖膽鹽發酵管：按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.2 伊紅美蘭瓊脂平板： 按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.3 乳糖發酵管： 按照製造廠家使用說明進行配製，滅菌。
3.4 革蘭氏染色液。
3.4.1 結晶紫染色液：
結晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸銨水溶液 80ml
將結晶紫溶解於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。
3.4.2 革蘭氏碘液：
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300ml
將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300 ml。
3.4.3 沙黃復染液：
沙黃 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸餾水 90ml
將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。
3.5 生理鹽水。
4.檢驗程序：
檢樣
↓
稀釋
↓
乳糖膽鹽發酵管，36±1℃，24±2hr

↓ ↓
不產氣 產氣
↓ ↓
大腸菌群陰性 伊紅美蘭瓊脂平板，36±1℃，24±2hr
↓
報告 ↓ ↓
革蘭氏染色 乳糖發酵管，36±1℃，24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-，無芽孢桿菌 產氣 不產氣
↓ ↓
大腸菌群陰性 大腸菌群陰性
↓ ↓ ↓
報告 大腸菌群陽性 報告

5.測定方法：
5.1 檢樣稀釋：
5.1.1 以無菌操作將檢樣25ml(或25g)放於含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌塑料燒杯中，經充分振搖成1：10均勻稀釋液。
5.1.2 用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的 試管中，振搖成1：100稀釋液。
5.1.3 重復5.1.2的操作，使成1：1000稀釋液。
5.2乳糖膽鹽發酵試驗：根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計，選擇二個稀釋度，每一稀釋度接種3管，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發酵管。1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發酵管。然後置於36±1 ℃培
養箱內，培養24±2hr，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌
群陰性；如有產氣者，則可按以下程序進行。
5.3分離培養：將產氣的發酵管分別接種於伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養24hr後取出，觀察菌落形態，並作革蘭氏染色。
5.4證實試驗：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1～2個進行革蘭氏染色同時接種乳糖發酵管，置於36±1℃溫箱內培養24±2hr，觀察產氣情況。乳糖發酵管產氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。
5.5報告：根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每100ml(g)大腸菌群的最可能數。
食品中金黃葡萄球菌的檢測方法
金黃色葡萄球菌是一種引起人類和動物化膿感染的重要致病菌，也是造成人類食物中毒的常見致病菌之一。本菌廣泛分布於自然界，如空氣、土壤、水及其它環境中。在人類和動物的皮膚及外界相通的腔道中，也經常有本菌存在。據報導，在正常人群中的帶菌率可達30%~80%，其中皮膚帶菌率為8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的帶菌率在40~50%以上，因此其可通過各種途徑和方式，尤其是經工作人員的手和上呼吸道而污染食品。由於致病金黃葡萄球菌能產生腸毒素，故一旦細菌污染食品，並在合適的溫度環境下，細菌可以大量繁殖並產生腸毒素，從而引起消費者食物中毒。
由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒，在世界各國都極為普遍。特別是在北美及歐洲等地區發病率更高。在上述這些國家中，每年有金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病例，僅次於沙門氏菌，而在細菌性食物中毒病例排到第2~3位，有此而造成的經濟損失也相當慘重，在我國由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒病例也時有報導，所以目前世界各國都把金黃色葡萄球菌列為食品衛生的法定檢測項目。
我國對金黃色葡萄球菌目前採用的方法是以國家標准GB.4789-10-84及檢驗檢疫系統行業標准SN.0172-92作為依據。整個檢測過程獲得最終結果須時5天左右，既費時又費力，並造成貨物積壓，也影響貨物的及時出運，並使貨主的倉儲成本提高，造成較大的經濟損失。
多年來很多食品微生物實驗室都在探索和尋找一些准確性高，並快速的檢測方法，最近我們分別從美國3M公司和法國生物梅里埃公司獲得兩種快速檢測致病性金黃色葡萄球菌的培養基，其名稱為：
① Petrifilm RSA. Count Plate（由美國3M公司研製生產），是一種薄膜型快速檢測金黃色葡萄球菌的計數平板。
② Baird-parker + RPF Agar.（由法國生物梅里埃公司研製生產的用Baird-Parker瓊脂加免血漿纖維蛋白原的金黃色葡萄球菌檢測計數平板）。
原理：Petrifilm. RSA. 測試薄膜是由二部分組成。第一部分是由黃金色葡萄球菌培養基片，此培養基中含有經修正的Barid-Parker，營養成分加上以冷水可溶解的膠質。第二部分是一種耐熱核酸酶（TNase）反應片，含有DNA及甲苯胺蘭 ( Toluidine Blue - O )及四唑指示劑 (Tetraeolium)。此指示劑有助於菌落的計數及確定葡萄球菌耐熱核酸酶的存在。
耐熱去氧核糖核酸（deoxyribonulcas Dnase）為產毒金葡菌之典型特徵，此酶非常耐熱，在100℃加熱30min，不易喪失活性，在130℃之下，其D值為16.6min，此酶之分子量為16800，等電點PH為9.6,耐熱去氧核糖酸與檢測血漿凝固酶相似，是一種鑒定金黃色葡萄球菌的方法，在Petrifilm. RSA 檢測片上，耐熱DNA酶反應看起來，呈粉紅色環帶包圍著一個紅色或蘭色的菌落。
Petrifilm.RSA檢測片，必須與Peyrifilm耐熱核酸酶反應片一起使用，單獨使用將不會顯示菌落，因為具有輔助計數菌落的指示劑是在反應片上，而不是在Petrifilm.RSA檢測片上。
Baird-parker + RPF agar，這一培養基中含有豐富的營養成分，其中以氯化鋰代替亞碲酸鉀，使菌落顏色呈黑色，RPF補充有兔血漿和牛纖維蛋白原，以便檢測凝固酶活力，胰酶可以抑制全部或部分圍繞凝固酶陽性菌落周圍沉澱暈環纖維蛋白的溶解，因此凡存在血漿凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌，將在培養基中呈現有暈環的黑色菌落，即可確認，並作計數。

實驗實施
材料和方法：
本次實驗採用以下3種試劑：
1. 美國3M公司提供的Petrifilm. Rapid. S. aureus Count Plate.
2. 法國生物~梅里埃公司提供的Baird-Parker + RPF agar .
3. 實驗室自配Baird-Park瓊脂（英國Oxoid）及新鮮兔血漿。

菌種來自美國菌種保存中心（America TyP Culture Collection）。金黃色葡萄球菌共10株菌株，其菌號分別為：
ATCC 27661 ATCC 27664 ATCC 13565 ATCC 51704
ATCC(K) 12600 ATCC(R) 65389 ATCC 25923 ATCC 29213
ATCC 8095 ATCC 12598
非金黃色葡萄球菌菌種5株，其菌號分別為：
ATCC 51813 （大腸桿菌）、ATCC 624 （無乳鏈球菌）、ATCC 51816 （陰溝腸桿菌）、ATCC 6051 （枯草桿菌）、ATCC 49214 （腸炎沙門氏菌）、自然食品檢樣，任意購自市場。
本次實驗是以同一測試樣品經均質並通過無菌生理鹽水作10倍遞增稀釋後取1至2個稀釋度同時接種上述三種培養基作平行實驗，在取得最終結果後相互進行比對。
上述三種培養基的接種方法是按生產商所提供的使用說明進行操作，另外Baird-Parker Agar 培養基是按SN0172-92標准進行操作。
A、 本次實驗共測試已知標准菌種共15株，其中葡萄球菌10株，其他菌種5株（包括大腸桿菌、陰溝腸桿菌、腸炎沙門氏菌、枯草桿菌和無乳鏈球菌）。
B、 測試自然食品檢樣共101隻（其中包括肉11隻、肉類14隻、水產品17隻、牛奶25隻、蔬菜22隻、豆製品12隻）。

結果：
A、 被檢菌種10株，金黃色葡萄球菌在三種培養基上都能檢出生長情況良好，同一稀釋度的菌液，除個別菌株外在3種培養基計數檢測結果基本都在一個數量級上，無顯著差異。而5株非金黃色葡萄球菌的菌株在三種培養基上全部不能生長。
B、 自然食品檢樣共接種101隻，每一檢樣同一稀釋濃度分別同時種三種培養基，最終共檢出金黃色葡萄球菌45隻，佔全部檢樣的44.5％，其中Petrifilm RSA 檢出陽性結果為42隻，佔全部陽性檢樣的93.3％，Baird-Parker＋RPF Agar. 檢出陽性結果26隻，佔全部陽性檢樣的57.7％。Baird-Parker. Agar 檢出陽性結果32隻，佔全部陽性檢樣的71.1％。

討論
1. 用15株標准菌在3種培養基中的檢測，10株金黃色葡萄球菌以同一濃度接種，結果生長良好，其最終計數基本一致，定位在同一數量級，5株非金黃色葡萄球菌接種上述三種培養基全部不長，說明上述三種培養基對金黃色葡萄球菌選擇良好。
2. 以101隻自然樣品同一均質稀釋液，同時接種三種培養基，從最終結果來看，對金黃色葡萄球菌的陽性檢出率為44.5％
3. 從檢測程序來年，Petrifilm. RSA及Baird-Parker＋RPF. Agar. 都在樣品接種後28~30h觀察結果，並不必再做證實試驗，而如以Baird-Parker Agar檢測，須在接種後48h觀察平板，並挑取可疑菌落轉種到營養肉湯中，在經18-24h後做血漿凝固酶或耐熱DNA酶試驗進行證實，最終計數，前後約須80h。
4. 從本次試驗中觀察，使用上述三種培養基對食品中金黃色葡萄球菌含量的直接計數檢測，其樣品接種液的含量擬控制在100個/ml以內，比較容易分清並計數，如菌量過濃，則將會影響最後的讀數，因此對新送的被檢樣品，如在不了解污染的情況下一般必須要做2個以上的稀釋度，同時分別接種，才能獲得較為滿意的結果。
而在Baird-Parker＋RPF Agar及Baird-Parker. Agar接種時必須將1ml樣液作三隻平板塗布（0.3、0.3、0.4ml）這樣就會造成手續繁瑣試劑消耗較大，但Baird-Parker. RPF. 培養基也可以1ml樣液作傾注培養，並作計數。
5. 在整個測試過程中，我們發現，按使用說明對Petrifilm. RSA. 及Barid-Parker＋RPF. Agar，操作規定在接種24h後觀察結果，此時往往由於菌落長得經較小，特徵瓜不明顯，但如果繼續放置一夜以後金葡萄菌落特徵明顯，並可能會經第一天觀察數量有所增加，這樣可以提高檢測結果的可信度。
6. 由於對上述兩種培養基的試用期間我們尚未獲得供應商的報價，故無法測算每一樣品的測試成本價格。但可以予計上述兩面種快速檢測培養基的耗材費用要高於常規經典方法（Baird-Parker Agar）的費用。
7. 通過本次實驗，我們感到使用美國3M公司生產的Petrifilm. RSA Plate培養基和法國生物－梅利埃公司生產的Baird-Parker RPF. Agar培養基檢測中的金黃色葡萄球菌。可以比目前常規檢測方法時間可縮短一半。並可以明顯節省大量人力。這完全符合實驗室快速檢測的要求，尤其是對基層較簡陋的實驗室條件中，更顯其使用方便的優越性。