分區劃線方法步驟

⑴ 培養基倒平板培養後怎樣劃線分離

平板劃線法分離菌種實驗步驟

1、融化培養基

將裝有伊紅美藍瓊脂培養基的三角瓶放入熱水浴中加熱至沸，直至充分融化。

2、倒平板

待培養基冷卻至50℃左右後，按無菌操作法倒平板(每皿約倒15ml)，平置，待凝。

操作方法：右手持盛培養基的三角瓶置火焰旁邊，用右手手掌和小指將瓶塞輕輕地撥出，瓶口保持對著火焰；然後左手拿培養皿並將皿蓋在火焰附近打開一條稍大於瓶口的縫隙，迅速倒入培養基約15ml，加蓋後輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布在培養皿底部，然後平置於桌面上，待凝後即為平板。

3、作分區標志（操作熟練後此步驟可省略） 在皿底用記號劃分成4個不同面積的區域，使A<B<C<D，且各區的夾角應為120°左右，以便使D區與A區所劃出的線條相平行、美觀。

4、劃線操作

1)挑取菌樣：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量含菌試樣。

2)先劃A區：將平板倒置於酒精燈火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直於桌面，並讓平板面向火焰。右手持含菌的接種環，先在A區輕巧地劃3~4條連續的平行線當作初步稀釋的菌源。燒去接種環上的殘余菌樣。

3)劃其餘區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉至劃線位置，把接種環通過A區(菌源區)而移至B區，隨即在B區輕巧地劃上6~7條緻密的平行線，接著再以同樣的操作在C區和D區劃上更多的平行線，並使D區的線條與A區平行(但不能與A區或B區的線條接觸！)，最後，將左手所持皿底放回皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。

5、恆溫培養

將劃線後的平板至37℃倒置培養2~3天。

6、挑單菌落

良好的結果應在C區出現部分單菌落，而在D區出現較多獨立分布的單菌落。然後從典型的單菌落中挑取少量菌體至試管斜面，經培養後即為初步分離的純種。

7、清洗培養皿

將廢棄的帶菌平板作煮沸殺菌後進行清洗、晾乾。

⑵ 硬碟分區方法和步驟

新購買的機械硬碟、固態硬碟都需要先分區才能使用，新電腦也需要對硬碟進行分區之後才能安裝系統，這里詳細的說一下硬碟分區流程和注意事項，為初學者做一個參考。

工具/原料

• DiskGenius 分區助手

方法/步驟

• 1

  如果是新購買的移動硬碟、擴容的機械硬碟等直接連接到電腦主機上，運行DiskGenius軟體；如果是新電腦、加裝固態硬碟等原機器沒有系統的情況下硬碟分區需要進入WinPE環境運行DiskGenius，進行分區操作

  

• 分區全部對齊，磁碟就可以正常使用了！

注意事項

• 一個硬碟只能有一個主分區，主分區可以作為活動分區安裝系統，主分區外就是擴展分區，擴展分區可以分為若干個邏輯分區

• 如果是固態硬碟，一定要4K對齊，否則降低硬碟性能，差距非常大，普通機械硬碟最好也4K對齊，不過對性能影響有限

⑶ 土壤中自身固氮菌的分離與培養怎樣劃線

土壤中自身固氮菌的分離與培養劃線方法如下：平板劃線分離法，是用接種環在平板培養基表面通過分區劃線而達到分離微生物的一種方法。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次做「由點到線」的稀釋而達到分離的目的。方法如下:步驟一，倒平板，熔化已經配製好並滅過菌的瓊脂培養基，冷卻至45℃左右倒平板。水平靜置待冷卻凝固。
步驟二，將待劃線分離的平板倒置於煤氣燈的左側，貼上標簽（或做記號），若劃線時分區沒把握，可在皿底上預先分為四個區。
步驟三，接種環燒紅滅菌，並伸入菌種試管內冷卻，挑取少量斜面菌苔。
步驟四，左手拿培養皿底，此時皿底盡量與桌面垂直，然後將接種環上的菌種先在平板的A區劃3～5條平行線，再燒掉環上剩餘的菌種。
步驟五，將燒紅的接種環在平板培養基的邊緣冷卻。然後將平板轉動一定角度（約60°），用接種環通過A區向B區做來回平行劃線；同樣，由B區向C區劃線。最後由C區向D區劃線。區與區的線條間的夾角最好成120°，這樣可使D區的線條與A區線條相平行，並可避免此兩區線條接觸。最後將平板倒放在培養皿蓋中。

⑷ 連續劃線法操作步驟

連續劃線法步驟：從平板邊緣一點開始，連續作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環上的菌。接種環於酒精燈外焰燒至紅透，接種棒也要充分灼燒，最後再集中燒接種環至紅。

1、輕輕搖勻待接種試管，左手手心托待接種試管底側部，右手執接種環，右手小指拔下試管塞，於酒精燈附近將接種環伸進試管，稍候，再插入待接接種液中，蘸一下，取滿一環，抽出、燒塞、蓋蓋、放回試管架。

或將接種環通過稍打開皿蓋的縫隙伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環冷卻，然後以無菌操作接種環直接取平板上待分離純化的菌落。

2、靠近酒精燈處打開平皿蓋約30°，右手將環伸進平皿，將菌種點種在平板邊緣一處，輕輕塗布於瓊脂培養基邊緣，抽出接種環，蓋上平皿蓋，然後將接種環上多餘的培養液在火焰中灼燒，打開平皿蓋約30°伸入接種環。

3、待接種環冷卻後，再與接種液處輕輕接觸，開始在平板表面輕巧滑動劃線，接種環不要嵌入培養基內劃破培養基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前後兩條線重疊，劃線完畢，關上皿蓋。灼燒接種環，待冷卻後放置接種架上。

培養皿倒置於適溫的恆溫箱內培養（以免培養過程皿蓋冷凝水滴下，沖散已分離的菌落）。培養後在劃線平板上觀察沿劃線處長出的菌落形態，鏡檢後再接種斜面。

劃線分離主要有分區劃線法和連續劃線法兩種。

分區劃線法分離時平板分四個區，故又稱四分區劃線法。劃線時每次將平板轉動60~70°劃線，每換一次角度，應將接種環上的菌燒死後，再通過上次劃線處劃線。

其中第4區是單菌落的主要分布區，故其劃線面積應最大。為防止第4區內劃線與1、2、3區線條相接觸，應使4區線條與1區線條相平行，這樣區與區間線條夾角最好保持120°左右。

1、先將接種環沾取少量菌在平板1區劃3~5條平行線，取出接種環，左手關上皿蓋，將平板轉動60~70°，右手把接種環上多餘菌體燒死，將燒紅的接種環在平板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線的菌體為菌源，由1區向2區作第2次平行劃線。

2、第2次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60~70°，同樣依次在3、4區劃線。劃線完畢，灼燒接種環，關上皿蓋，同上法培養，在劃線區觀察單菌落。