采核酸的步驟和方法

A. 核酸檢測是怎麼做的

1、核酸檢測是分子生物學檢查，一般是用於檢測病原體的核酸。這種檢測方法直擊病毒的RNA或DNA結構，檢測血液中是否存在病毒核酸，診斷有無病原體感染。
2、病毒的特點就是形態非常小，在普通光學顯微鏡下看不到，肉眼更是無法直接觀察。但每種病毒都有其獨特的基因序列，通過檢測病人體內的病毒核酸，就可判斷病人體內是否存在病毒。
3、核酸檢測原理：以病毒獨特的基因序列為檢測靶標，通過PCR擴增，使我們選擇的這段靶標DNA序列指數級增加，每一個擴增出來的DNA序列，都可與我們預先加入的一段熒游標記探針結合，產生熒光信號，擴增出來的靶基因越多，累積的熒光信號就越強。而沒有病毒的樣本中，由於沒有靶基因擴增，因此就檢測不到熒光信號增強。所以，核酸檢測，其實就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中是否有病毒核酸。

B. 核酸檢測過程

檢測時，醫生會用一個像棉簽一樣的拭子去擦拭扁桃體和咽隱窩附近的分泌物，也可以通過鼻腔取鼻咽後部的分泌物，然後放到試管裡面，再交給檢驗部門做相應的病毒核酸的檢查。因此，咽拭子采樣前應提前漱口。

核酸檢測需要經過取樣、留樣、保存、核酸提取、上機檢測五個步驟。

第一步需要採集人體的分泌物，用鼻拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽後壁及雙側咽扁桃體處；

第二步需要醫務人員進行留樣，將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後立即旋緊管蓋；

第三步需要將樣本管放入密封袋中保存好並及時送檢；

第四步便將需樣本送進實驗室進行核酸提取；

第五步便進行熒光PCR核酸檢測，將提取物進行熒光PCR擴增反應。

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核酸檢測的原理

目前的病毒核酸檢測試劑盒，多數採用熒光定量PCR方法。檢測原理是以病毒獨特的基因序列為檢測靶標，通過PCR擴增，使我們選擇的這段靶標DNA序列指數級增加，每一個擴增出來的DNA序列，都可與我們預先加入的一段熒游標記探針結合，產生熒光信號，擴增出來的靶基因越多，累計的熒光信號就越強。

所以，核酸檢測其實就是通過檢測熒光信號的累積來確定樣本中否有病毒核酸。

C. 核酸檢測具體步驟

1、核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。

2、逆轉錄合成cDNA。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。

3、PCR擴增反應PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。

4、擴增產物定性分析；擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的戚粗分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。

5、結果判定和完成報告單：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。

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檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，

包含一對特異性引物以及一個Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅檔仔態熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信行源號被淬滅基團吸收；

如反應體系存在靶序列，PCR反應時探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發出熒光。

每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環數與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。不同生產企業的產品會依據自身產品的性能確定本產品的陽性判斷值。

D. 核酸檢測方法有哪些

核酸檢測採用咽拭子檢測，有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。

口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽塗擦，刷取咽喉部位上皮細胞的檢測。受檢測者只要放鬆心情，張口發出「啊——」的聲音就可以了，檢測過程並沒有創傷風險，是非常安全的檢測。

檢測時可能會有惡心、想要嘔吐的不適感覺，不過這些不適症狀通常只需要半分鍾到兩分鍾左右就可以完全緩解了。鼻咽拭子采樣是將一根細棉簽深入鼻孔，從下鼻道深入抵達鼻咽後壁，然後捻轉棉簽取樣。棉簽進入鼻腔的深度約為鼻尖到耳垂的距離。

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核酸檢測相關知識：

核酸檢測是檢測病毒的方法，它可以更早發現感染。現在臨床中對乙肝、丙肝、艾滋病都開展了核酸檢測，可以在抗體產生前檢測到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通過咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測來判斷是否感染，以及推測是否具有傳染性。

季節性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過咽拭子檢測可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成份，從而判斷被檢測者是否屬於感染者。

新冠病毒的核酸檢測已經是比較成熟的檢測方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鍾就可以採集到標本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發現感染者，甚至在感染者出現症狀前就可以檢測到陽性。

感染者經過隔離治療後咽拭子檢測陰性說明病毒已經清除，不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無症狀感染者解除隔離的標准之一。

E. 核酸檢測流程

核酸檢測流程並不復雜，通常帶上身份證過去檢測就可以了，但有些人因為不知道核酸檢測流程，導致在核酸檢測前吃東西了，喝酒了等等，從而影響核酸檢測的結果，這就不太妥當了，接下來我們來具體了解一下核酸檢測流程吧。

核酸檢測流程和時間

在醫學中核酸檢測是比較常見的，那麼核酸檢測流程和時間是什麼呢？

核酸檢測流程為：刷健康碼，測體溫進入門診大廳。憑身份證/市民卡在「門診綜合服務中心」窗口實名掛號開單繳費。到相關的功能科旁或1樓大廳核酸采樣處采樣。至於檢測結果的時間可能需要二十四小時左右出來的，比較快的話可以在幾個小時之內出來的，一般就是4到6個小時。

而正常情況下做核酸檢測的整個過程大概需要1~2分鍾左右的，其實一般問題都不大的，其實跟報告是沒什麼關系的，而一般材料的時間大概就是在10秒鍾左右的，那要准備、或者是取完了之後，其實這個過程大概就需要二三十秒，動作慢一點的可能就一兩分鍾就可以了。

核酸檢測流程和要求

做核酸檢測可以檢查出不少病毒，那麼核酸檢測流程和要求有哪些呢？

核酸檢測流程為標本採集、標本轉送、標本簽收及錄入、提取核酸、配製試劑、加樣、上機檢測。通常標本在緊密包裝下被護送到實驗室後需求實驗室簽收，錄入信息系統。到達實驗室時可以直接用於檢測的不是樣品，而是需要進行預處理以在擴增前從樣品中提取核酸的樣品。

在醫護人員取樣做核酸之前，做核酸的地點通常都會安排相應的填寫流程。要做核酸的居民一定要在排隊的過程中，提前做好相關內容的填寫，以免輪到自己的位次是因為信息填寫不完整影響整個隊伍的檢測效率。還有做核酸檢測的人，得注意壓一壓跳脫的性子。排隊過程中，盡量保持安靜，也是對醫務人員、基層防疫人員的尊重。

核酸檢測流程及注意事項

做核酸檢測有好幾個步驟的，一般核酸檢測流程及注意事項什麼樣呢？

核酸檢測是針對新型冠狀病毒中一段特異性的基因序列作為靶標，通過PCR擴增技術，將這個目標片段不斷的擴增，達到可以用儀器檢測到的信號。收到樣本手工處理後，需要進行核酸提取，檢測人員是直接面對新冠病毒，暴露風險很高。核酸提取成功後，加入制備好的反應體系，經過PCR擴增，目標序列片段呈指數級增加，而每一個經擴增出來的DNA序列，都可以與預先所加入的一段熒游標記探針相結合，從而產生熒光信號，而擴增出來的靶基因越多，所累積的熒光信號就越強，通過專門儀器收集識別熒光信號供專業人員判斷擴增產物中有無新冠病毒特有的核酸片段，做出核酸檢測陽性或陰性報告。

有人進行核酸檢測前，管不住自己的嘴巴。一身酒氣煙味就去做檢測，這樣對醫護人員很不友好。一方面吸煙喝酒會給檢測結果帶來干擾，使核酸檢測的結果出現嚴重的偏差；另一方面會極大幹擾排隊人群和醫務工作者的情緒。

核酸檢測流程需要帶什麼

做核酸檢測流程是需要一定證件的，那麼核酸檢測流程需要帶什麼呢？

做核酸檢測一般都需要帶身份證。被檢測人員要攜帶身份證等有效證件，出示健康碼，有序排隊領取體檢條形碼，間隔距離至少1米以上，采樣完畢，立即離開，避免人員聚集。去醫院做核酸檢測沒帶身份證的話，一般可以用其他證件（戶口本、醫保本及醫保卡、市民卡、出生證、護照、港澳台證等）掛號進行核酸檢測，具體情況要看各個醫院機構的規定。

一般待檢人員在工作人員的引導下，填寫檢測申請單並掃碼進行線上信息錄入，領取核酸取樣所需的壓舌板和采樣拭子。線上信息提交後，待檢人員會收到一條確認簡訊，經現場工作人員核查身份信息，繳納檢測費用後，就可以進入檢測點進行取樣。

F. 核酸檢測步驟

常規核酸檢測樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。權重過程如下：

在獲得患者樣本後，應盡快進行檢測。如果樣品需要運送到不能立即測試，他們應當根據指令和打包在低溫送到一個特殊的測試機構測試。檢測機構收到樣品後，應從樣品中進行核酸提取，核酸提取試劑應使用經批準的《產品規范》規定的核酸提取試劑盒。

病毒RNA需要首先轉錄成cDNA，然後擴增檢測。PCR擴增和檢測應使用批準的產品規范中規定的熒光定量PCR儀。通過熒光定量PCR獲得的樣本Ct值，可以判斷患者樣本是否含有新型冠狀病毒。

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目前臨床核酸檢測主要採用咽喉拭子檢測。步驟是讓被測者用淡鹽水漱口，去除口腔中的細菌，然後將標簽貼在標本容器上。

通知檢查員咽拭子培養的目的和方法，點燃酒精燈，檢查人員收取的張開嘴巴，頭發啊，完全暴露的喉嚨，培養管長消毒棉簽輕輕動作敏感和擦兩邊的齶扁桃體拱門和咽分泌物，抽樣已經完成，在試管口在酒精燈火焰消毒，然後插入試管擦洗，插入後及時檢驗。

核酸檢測是目前診斷病原體最重要的依據，是診斷病原體的重要依據。例如，對於目前COVID－19的檢測，病毒核酸檢測仍是診斷的金標准。