蛋白質分子量測定的方法在哪裡查

A. 蛋白質分子量在什麼資料庫查

NCBI上可以查分子純寬量，還有其它的方也可以查。我推薦幾敏晌個吧：
Genecards: www.genecards.org
gentlas:genatlas.medecine.univ-paris5.fr
Uniprot:http://www.uniprot.org
如果不夠用，你聯系我我幫橋褲鋒你查吧。

B. 未知蛋白質分子量范圍,如何進行測定

方法1：SDS-PAGE電泳,通過加入的蛋白Marker各條帶遷移率和未知蛋白的條帶遷移率,再用軟體可計算出來.
方法2：凝膠過濾層析：用一系列已知分子量的標准品放入同一凝膠柱內,在同一條件下層析,記錄每一分鍾成分的洗脫體積,並以洗脫體積對分子量的對數作圖,在一定分子量范圍內可得一直線,即分子量的標准曲線.測定未知物質的分子量時,可將此樣品加在測定了標准曲線的凝膠柱內洗腫後,根據物質的洗脫體積,在標准曲線上查出它的的分子量.
另外還有離心沉降等等方法,反正有不少的方法

C. 大分子如蛋白質的分子量如何測定及其原理

凱氏派豎寬定氮法。求出氮的含塵亮量再轉化成蛋白質的含量：蛋白質的含量=氮的含量*6.25(100/16)這是我們課本上寫的，希望纖帆對你有用

D. 測定蛋白質分子量方法有哪些

1．凝膠過濾法

凝膠過濾法分離蛋白質的原理是根據蛋白質分子量的大小。由於不同排阻范圍的葡聚糖凝膠有一特定的蛋白質分子量范圍，在此范圍內，分子量的對數和洗脫體積之間成線性關系。因此，用幾種已知分子量的蛋白質為標准，進行凝膠層析，以每種蛋白質的洗脫體積對它們的分子量的對數作圖，繪制出標准洗脫曲線。未知蛋白質在同樣的條件下進行凝膠層析，根據其所用的洗脫體積，從標准洗脫曲線上可求出此未知蛋白質對應的分子量。

2．SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法

蛋白質在普通聚丙烯醯胺凝膠中的電泳速度取決於蛋白質分子的大小、分子形狀和所帶電荷的多少。SDS（十二烷基磺酸鈉）是一舉中燃種去污劑，可使蛋白質變性並解離成亞基。當蛋白質樣品中加入SDS後，SDS與蛋白質分子結合，使蛋白質分子帶上大量的強負電荷，並且使蛋白質分子的形狀都變成短棒狀，從而消除了蛋白質分子之間原有的帶電荷量和分子形狀的差異。這樣電泳的速度只取決於蛋白質分子量的大小，蛋白質分子在電泳中正虛的相對遷移率和分子質量的對數成直線關系。以標准蛋白質分子質量的對數和其相對遷移率作圖，得到標准曲線，根據所測樣品的相對遷移率，從標准曲線上便可查出其分子質量。

3．沉降法（超速離心法）

沉降系數（S）是指單位離心場強度溶質的沉降速度。S也常用於近似地描述生物大分子的大小。蛋白質溶液經高速離心分離時，由於比重關系，蛋白質分子趨於下沉，沉降速度與蛋白質顆粒大小成正比，應用光學方法觀察離心過程中蛋白質顆粒的沉降行為，可判斷出蛋白質的沉降速度。根據沉降速度可求出沉降系數，將S帶入公式，即可計算培運出蛋白質的分子質量。

E. 如何查詢已知蛋白的分子量

分子篩-高效液相色譜聯用
這兩個是實驗室主要應用的方法，如果是在家簡易測定，可以試試花百把塊幾十毫升分子篩，用個注射器裝柱，然後去弄點天然存在的較便宜的純蛋白（比如說雞蛋清的鹽析產物是較純的雞卵清蛋白、鹽析法提取的羊igg、等電點沉澱法制備牛奶運雀中的酪蛋白和人igm）鍵空，染色考馬斯亮藍g250後透析去除染料作為分子量標准，和目的蛋白同時過柱，用分子量和流出時間做稿悄瞎標准曲線，可以估算出你待測蛋白的相對分子量。暫時就記得那麼多了

F. 蛋白質含量的測定方法

蛋白質含量的十種測定方法如下：

三、雙縮脲法：

實驗原理：雙縮脲（NH3CONHCONH3）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。

紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。測定范圍為1~10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。

四、BCA法：

實驗原理：BCA檢測法是Lowry測定法的一種改進方法。與Lowry方法相比，BCA法的操作更簡單，試劑更加穩定，幾乎沒有干擾物質的影響，靈敏度更高（微量檢測可達到0.5μg/ml），應用更加靈活。蛋白質分子中的肽鍵在鹼性條件下能與Cu2+絡合生成絡合物，同時將Cu2+還原成Cu+。

二喹啉甲酸及其鈉鹽是一種溶於水的化合物，在鹼性條件下，可以和Cu+結合生成深紫色的化合物，這種穩定的化合物在562nm處具有強吸收值，並且化合物顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。故可用比色的方法確定蛋白質的含量。

五、Lowry法：

實驗原理：蛋白質在鹼性溶液中其肽鍵與Cu2+螯合，形成蛋白質一銅復合物，此復合物使酚試劑的磷鉬酸還原，產生藍色化合物，在一定條件下，利用藍色深淺與蛋白質濃度的線性關系作標准曲線並測定樣品中蛋白質的濃度。

六、考馬斯亮藍法：

實驗原理：考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度，是利用蛋白質―染料結合的原理，定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。考馬斯亮藍G―250存在著兩種不同的顏色形式，紅色和藍色。它和蛋白質通過范德華力結合，在一定蛋白質濃度范圍內，蛋白質和染料結合符合比爾定律。

此染料與蛋白質結合後顏色有紅色形式和藍色形式，最大光吸收由465nm變成595nm，通過測定595nm處光吸收的增加量可知與其結合蛋白質的量。蛋白質和染料結合是一個很快的過程，約2min即可反應完全，呈現最大光吸收，並可穩定1h，之後，蛋白質―染料復合物發生聚合並沉澱出來。

七、凱氏定氮法：

實驗原理：凱氏定氮法用於測定有機物的含氮量,若蛋白質的含氮量已知時，則可用此法測定樣品中蛋白質的含量。當蛋白質與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則轉變成氨，並進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為「消化」。

但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應液的沸點，並加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。

八、Lowry法測定試劑盒：

Folin酚試劑法包括兩步反應：第一步是在鹼性條件下，蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物；第二步是此絡合物將Folin試劑還原，產生深藍色，顏色深淺與蛋白質含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質。Folin試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。

此外，不同蛋白質因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度稍有不同。

九、BCA法測定試劑盒：

鹼性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，並與標准曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，TritonX-100，Tween不影響檢測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。

實驗中，若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

十、分光光度計法。

1、取八支（或者更多）干凈的10ml離心管，標記上號。

2、取100ulBSA，加PBS2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。

3、5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取10ml5×G250染色液，加入40ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4、按下表加入試劑（以每孔5ml計，多餘的用來清洗比色皿）。

G. 蛋白質分子量如何測定

優化蛋白質結晶條件，在體外監測蛋白質行為以及確定葯物傳輸系統都是可以實現的。利用X射線散射，可以研究蛋白質之間的相互作用(高階結構)，包括穩定性和聚集途徑，測定蛋白質的大小、分子量和折疊程度，分析脂質葯物傳遞系統中液晶的形成和結構，得到本質上無序的蛋白質和RNA的結構，並量化柔性區域的運動。SAXS非常適用於分析溶液中蛋白質的分子質量、折疊程度、回轉半徑、聚集、大小和形狀等。可以進行結構生物學研究的儀器有Nano-inXider，Xeuss 3.0和BioXolver。

H. 測定蛋白質分子量的常用方法

知道蛋白質分子量、氨基酸組成計算器
http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/

一般的方法：
SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量

[原理]

十二烷基硫酸鈉（Sodium dodecyl sulfate, 簡稱SDS）-聚丙烯醯胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量，是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在實驗基礎上發展起來的一項新技術。用這種方法測定蛋白質的分子量具有快速靈便，設備簡單等優點。

蛋白質的電泳遷移率在一般的電泳方法中，主要取決於它在某PH下所帶的凈電荷量、分子大小（即分子量）和形狀的差異性，而SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳對大多數蛋白質，主要取決於它們的分子量，與原有的電荷量和形狀無關。

SDS是一種陰離子表面活性劑，在一定的條件下，它能打開蛋白質氫鍵和疏水鍵，並按比例地結合到這些蛋白質分子上形成帶負電荷的蛋白質-SDS復合物，每克蛋白質一般結合1.4克SDS。SDS與蛋白質的定比結合使蛋白質-SDS復合物均帶上相同的負電荷，其量遠遠超過蛋白質原有的電荷量，因而掩蓋了蛋白質間原有的電荷差異。在水溶液中，蛋白質-SDS復合物具有相同的構象，近似雪茄煙形的長橢園棒（短軸均為1.8nm，長軸則隨蛋白質的分子量成正比變化），克服了蛋白質間原有的形狀差異。這樣蛋白質-SDS復合物在凝膠中的遷移率不再受原有電荷和形狀的影響，而只是蛋白質分子量的函數。蛋白質分子量與電泳遷移率間的關系可用下式表示：

lgMr = K – bm

式中 Mr為分子量；K為常數；b為斜率；m為遷移率。

因此，用本法測定蛋白質的分子量只需根據待測蛋白質在已知分子量的標准蛋白質的lgMr～遷移率的圖中的位置，就能得知分子量。

用本法測得的分子量，除單鏈蛋白質外，均不是天然蛋白質的完整分子量，而是組成這些蛋白質的亞基或肽鏈的分子量。本法對一些電荷異常，或構象異常，或帶有大輔基的蛋白質不適用，如組蛋白F1和某些糖蛋白等。對一些結構蛋白如膠原蛋白等也不適用。

SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳按照凝膠電泳系統中的緩沖液、pH值和凝膠孔徑的差異可分為SDS-連續系統電泳和 SDS-不連續系統電泳兩類；按照所製成的凝膠形狀和電泳方式又可以分為SDS-聚丙烯醯胺凝膠垂直管型電泳和SDS-聚丙烯醯胺凝膠垂直板型電泳兩類。

本實驗採用SDS-不連續垂直板型操作方法。通過實驗使學生掌握SDS-聚丙烯醯胺凝膠垂直板式電泳的原理及技術，包括制膠、灌膠、加樣、剝膠及固定染色等，學會用這些方法測定蛋白質分子量。

[方法與步驟]

一、加樣液的制備

1、標准蛋白質加樣液的制備 稱取細胞色素，胰凝乳蛋白酶原，胃蛋白酶，卵白蛋白，牛血清白蛋白各0.5～1mg，置小離心管（Eppendorf管）中，加入樣品溶解液1mL，充分溶解，如有不溶物應離心除去。沸水浴熱處理3min，冷卻備用。

2、待測蛋白質加樣液的制備

根據待測蛋白質樣品存在的狀況而定。

（1）固體

待測蛋白樣品，如為無鹽的純蛋白質固體制劑，加樣液的制備方法同標准蛋白質加樣液的制備；如為含鹽的純蛋白質固體制劑，應先加水充分溶解，對透析緩沖液透析12～16h，然後吸取0.5mL（蛋白濃度應為0.5～1mg/mL），置Eppendorf管中，並加入等體積濃樣品溶解液，沸水浴熱處理3min，冷卻備用。

（2）液體

待測蛋白樣品，如為無鹽的純蛋白質液體制劑，則加入等體積濃樣品溶解液，然後熱處理；如為含鹽的液體制劑，則需先透析。

二、凝膠的制備

1、凝膠板的准備

（1）洗板

將洗潔精用溫水稀釋後，用它浸透海綿擦洗玻板，然後用自來水洗凈，再用酒精將板擦乾。

（2）安裝制膠板

制膠前將玻板與塑料嵌條和凹型陶瓷板的邊緣對齊，下沿用密封膠帶封口，用塑料夾子或鐵夾子將兩端夾好，注意要確保密封，安放在固定架上。

2、分離膠和濃縮膠溶液的配製

組 分
分離膠/mL
濃縮膠/mL

凝膠貯備液
2.5
0.26

分離膠緩沖液（pH8.8）
1.9
—

濃縮膠緩沖液（pH6.8）
—
0.5

10%SDS
0.075
0.02

TEMED
0.026
0.02

雙蒸水
3.05
1.22

10％過硫酸銨
0.013
0.02

總體積
7.6
2

注意：①最後加入10%過硫酸銨溶液，混合製成凝膠液，迅速灌制凝膠。

②丙烯醯胺和甲叉雙丙烯醯胺均為神經毒劑，對皮膚有刺激作用。因此必須小心操作，不得吸入和接觸皮膚，聚合完全聚丙烯醯胺凝膠無毒。

3、制分離膠

將制膠板垂直放好，插上與相應厚度的樣品梳，在梳子下緣線1cm處做標記，卸下樣品梳。將配好的分離膠溶液緩慢加入制膠板之間，直至液面達到標記處。用滴管貼近膠液界面小心而又緩慢地覆蓋厚度約0.5cm的正丁醇層，以防止溶液蒸發並保證膠面平整。

4、制濃縮膠

分離膠聚合後，倒去正丁醇，用蒸餾水沖洗分離膠膠面兩次，用濾紙吸去殘液。用滴管將濃縮膠溶液加在分離膠面上，充滿制膠板，插入樣品梳。

（三）電泳

1、安裝電泳槽

濃縮膠聚合後，除去梳子、密封膠帶以及六個鐵夾。將制膠扳、電泳糟內芯、另一對制膠板依次放入槽內。兩制膠板的凹型陶瓷板均應與電泳槽內芯接觸。然後插入楔型板以固定兩套制膠板。如果每次電泳只用一塊膠板，必須用提供的有機玻璃板代替另一套制膠板。

2、加樣

在內外水槽加註緩沖液，使內外槽的水位均超過凹形板的缺口但低於塑料板的上沿。用微量加樣器在梳井內加樣。

3、電泳

蓋好上蓋，在80V～100V的電壓下電泳約3h，至溴酚藍指示的電泳前沿到達制膠板的下緣止，關掉電源。然後拔掉楔形板，取下制膠扳。

（四）染色、脫色

用刀片或薄板將白塑料板與陶瓷板輕輕撬開，用刀片沿分離膠與濃縮膠的交接處，將分離膠切下，並在分離膠的左上角切掉一小角，以標記樣品順序。然後手戴橡膠手套將分離膠小心移入染色器皿中。在染色器皿中加入100mL考馬氏亮藍染液（含0.25%考馬氏亮藍R-250，30％乙醇，10％乙酸的水溶液），加蓋，在搖床上染色2h。

將染液倒回貯存瓶（可反復使用）。在染色皿中加入100mL脫色液（10％乙酸，30％乙醇），振盪脫色至蛋白條帶清晰。

[結果和計算]

1、凝膠脫盡底色後，色帶清晰顯出。按實樣描下或攝下電泳圖譜。

2、根據各蛋白遷移距離和染料遷移距離的比值，求出各蛋白的相對遷移率mr，然後作出lgMr～mr關系圖，從圖中找出未知蛋白mr對應的分子量。