❶ 大鼠血漿能溶於水嗎
將血清從冷凍箱取出後，先置於2-8℃冰箱使之溶解畝碧，然後在室溫下使之全溶。旦局但必須注意的是，溶解迅遲舉過程中必須規則地搖晃均勻。
❷ 血清血漿如何提取
BIOG產品特點
◎操作簡便快速，可在30分鍾內獲得理想的DNA，適用於一次處理較多樣本的批量提取；
◎提取DNA純度高，無抑制劑，A260/A280為1.7-1.9；
◎採用自主研發的改性硅基磁珠，同樣的樣本量提取的DNA更多；
◎可用於小量（200μL）血清、血漿、胸腹水、腦脊液、滑膜液、水樣等液體樣本中游離DNA的提取。
BIOG操作步驟
1. 請自行准備：無水乙醇、異丙醇、1.5mL離心管。
2. 取出洗滌液，按70%比例加入無水乙醇，如6mL加入14 mL無水乙醇，12mL加入28 mL無水乙醇，混勻。
3. 取1.5mL離心管，尺卜加入200μL 裂解液、20μL 消化液、4μL DNA Carrier，再加入200μL樣本，振盪混勻，58℃溫育10 分鍾。
4. 取出離心管，冷卻到室溫，加入300μL異丙醇，充分混勻，再加入20μL磁珠復合蘆困鬧液（每次使用前須充分混勻），振盪混勻3min（注意不要顛倒混勻，以防磁珠粘附於管蓋內壁），靜置2min。
5. 將離心管置於磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附，開蓋，徹底吸棄上清液（注意槍頭不要接觸磁珠）。
6. 加入800μL配製後的洗滌陪罩液，將離心管從磁力架上取下，充分振盪2min，確保磁珠完全分散。將離心管置於磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附，開蓋，吸棄上清液（注意槍頭不要接觸磁珠）。
7. 將離心管從磁力架上取下，開蓋，乾燥約3-5min，至無明顯乙醇氣味。
8. 加入50 μL洗脫液，振盪至磁珠充分散開，室溫靜置2min，再振盪混勻1min。
9. 將離心管置於磁力架上，待磁珠完全吸附後，小心吸取上清液至一新的1.5mL離心管中，提取的核酸可直接用於下游實驗，或-20℃保存備用。
注意事項：
1. 裂解液含有刺激性化學物質，操作過程請做好防護措施，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻。2. 裂解液如有白色絮狀物析出屬正常現象，置於 37℃水浴中溶解即可，洗滌液在使用前應加入無水乙醇充分混合。
❸ 如何制備血清和血漿
全血不抗凝分離的是血清，抗凝分離的血漿
相對來說抗凝收集血漿量還是比較多一點的，且不易出現溶血現象的發生
收集好的全血分離血清（漿）時一般採用低溫低速離心效果比較好，速度太大會使紅細胞壓積，造成溶血，最終影響測定
如將收集好的全血，靜置一些時間（加抗凝劑一般靜置半小時左右，不加抗凝劑一般靜置一小時左右），然後採用低溫低速離心10分鍾（人血2000rpm左右、小鼠1000rpm左右、大鼠2500rpm左右），上層黃色液體為收集的血清或血漿，如上層液體出現紅色則出現溶血，應棄用
❹ 關於提取血漿中RNA
1. 請自行准備：無水乙醇、無RNA酶1.5mL離心管。
2. 取出洗滌液，按以下操作：
a) 洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇。
b) 洗滌液B：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。
c) 配製好的洗滌液如出現沉澱，可在37℃數枯搏溶解，搖敗枝勻後使用。
3. 取無RNA酶的1.5mL離心管，加入200μL樣本，4μLRNA Carrier混合均勻，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩渦震盪10秒，充分混勻，56℃水浴10 分鍾至完全裂解。
4. 加入1000μL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與後續實驗。
5. 將吸附柱放入收集管內，將760μL上述溶液轉入吸附柱內，靜置2 分鍾，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液.
6. 將剩餘760μL溶液轉移至吸附柱內，重復步驟5。
7. 將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液A至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液。
8. 將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液B至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鍾，棄收集管內廢液。
9. 將吸附柱放回收集管內，12,000 rpm 4℃離心2 分鍾，離去殘留的洗滌液。
10. 薯祥取出吸附柱，放入新的無RNA酶的1.5 mL 離心管內，加入30-50μL 洗脫液，靜置3 分鍾，12,000 rpm 4℃ 離心2 分鍾，收集RNA溶液。
11. -70℃保存，或直接用於下一步實驗。
注意事項
為防RNA酶污染，實驗過程中最好戴一次性干凈手套、口罩，使用處理過的無RNA酶的容器和無RNA酶的超純水 。
洗滌液含有刺激性化學物質
❺ 要做大鼠的實驗，用elisa試劑盒來檢驗血清內毒素含量、血漿酶DAO、血漿D-乳酸這三個數值，請問應該怎麼做呢
這三個指標ELISA都是可以測的褲稿，血清胡斗孝最好，血漿理論上來說還是有一定的影響的銷帆，雙抗體夾心法；
一般有150微升就差不多了,但是現假貨較多，價格又高，也不一定做出理想的效果；可以試試化學法，DAO和D-乳酸是肯定可以測的
❻ 實驗小白鼠2怎麼生產血清
同一隻小鼠需要多次采血
由於小鼠體重限制，一次取血後需要一定的恢復期以保證下次血液樣本的質量，嚴格遵守動物福利也是操作者的基本要求。小鼠的總血量一般是占體重的6-7%，一次性取血10%不會引起造血系統過度活化及血液成分的重建。（例：若20克小鼠，它的總血量約佔1.2-1.4毫升，即每次取120ul-140ul血液不會對小鼠有太大的影響）。
小鼠只需采單次采血
但如果想取小鼠的全血，一般能取體重的4%已經很不錯了。具體的參考計算：小鼠體重*6-7%（血液占體重百分比）*70%（循環血量佔全部血盯鏈量百分比）*90%（可以取到的循環血量比例）
常用的采血的方法
眼眶後靜脈叢采血
（大鼠 0. 4~0. 6 mL,小鼠 0. 2~0. 3 mL）取內徑為1.0-1.5mm的玻璃毛細管，臨用前折斷成2～2.5cm長的毛細管段，浸入1％肝素溶液中，乾燥後用。取血時左手抓住鼠兩耳之間的頸背部皮膚以固定頭部，輕輕向下壓迫頸部兩側，引起頭部靜脈血液迴流困難使眼眶靜脈叢充血，右手持毛細管由內眥部插入結膜，再輕輕向眼底部方向推進，輕輕旋轉毛細管以劃破靜脈叢，讓血液順毛細管流出，接收入事先准備的容器中。采血後紗布輕壓眼部止血。
摘眼球采血
此法常用於鼠類大量采血。采血時,用左手固定動物,壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用鑷子或止血鉗迅速摘除眼球，眼眶內很快流出血液。
尾尖采血
（小鼠可每次采血約0.1ml，大鼠約0.4ml）剪斷尾巴進行取血。注意，剪下來一點就可以，小鼠1-2mm，大鼠3-5mm，流出血液基則轎收集即可。過程中可以捋尾巴。血液可以用於塗片，試紙檢測血糖等。
心臟采血
（大鼠 1~1. 5 mL,小鼠 0. 5~0. 8 mL）心臟采血為無菌采血，采血量大，此方法需在麻醉狀態下進行，操作時，選擇胸部左側心臟博動最強處進針，緩慢回抽針筒可見血液流入針管。
後肢隱靜脈采血
隱靜脈采血常用於大小鼠的少量血液採集,單次采血的搏肆安全采血量為動物體重的0. 5%,間隔一天多次采血采血量為動物體重的0. 05%,隱靜脈采血無需麻醉,待動物固定後,後腿外側區域剃毛後暴露采血點,采血針刺入采血點,即可獲得血液樣本。圖片為隱靜脈的位置。
斷頭采血
左手拇指和食指從背部抓住鼠頸部皮膚，將鼠頭朝下，右手用剪刀剪斷鼠頸部約1/2-4/5，讓血液流入試管。但有由於過於血腥加上動物福利的原因，此方法不建議使用。
血清及血漿的制備
血清分離
經上述的方法取得血液後，在EP管中室溫靜置一小時以上（或37°水浴1小時，4°冰箱靜置2小時或者過夜）以3000rpm離心10分鍾，上清即為血清。可在-80°保存
❼ 求教用ELISA方法大鼠腦組織提取步驟
樣本暫時不渣嘩頌測時負80冷凍保存,一般可以放置6個月左右,負20可放3個月,（若被檢物質見光易分解則需避光保存）
制備好的勻漿液需當天進行測定（提取液不是被檢物質的最適環境）
1 准確稱取組織重量按重量（g）：體積（ml）=1：N的比例加N倍體積的生理鹽水（或PBS）（推如鄭薦N=9）,冰水浴勻漿（機械式,手動等,超聲不太推薦）,制備成一定濃度的勻漿液,離心（根據被檢物質的具休要求,推薦3000轉/分左右）,取上清待測
2 由於勻漿（提取）過程中會產生的一定的系統誤差,需對其進行較正可根據蘆喊測其上清液中蛋白濃度進行較正
❽ 怎樣提取外周血液中的基因組DNA
提取基因組DNA和細胞核DNA是不同的方法
提取細胞核要先把細胞破碎分離出細胞核，要在甘油或其他保護劑中進行
SDS十二烷基磺酸鈉：可破壞細胞膜、核膜，並使組織蛋白與DNA分離
CATB是一種抽提液，破壞細胞膜的~具體忘了~
DNA不溶於異丙醇，異丙醇可以析出DNA，產生白色絮狀沉澱，用槍頭挑出就可以了
以下是一些具體方法，希望有用
基因組DNA提取方法
制備基因組DNA是進行基因結構和功能研究的重要步驟，通常要求得到的片段的長度不小於100-200kb。在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為後續的實驗打下基礎。主要是CTAB方法，其他的方法還有1物理方式:玻璃珠法,超聲波法,研磨法,凍融法。2化學方式：異硫氰酸胍法,鹼裂解法3生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有:硅質材料、陰離子交換樹脂等
試驗步驟：
1、貼壁細胞用胰酶消化，離心收集。
2、細胞重懸於冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。
3、加入5mlDNA提取緩沖液，(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混勻。
4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,
5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，氯仿，異戊醇）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相
6、用等體積的氯仿，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。
7、2500rpm離心10min.轉上清於一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。
2500rpm,離心10min。棄上清。
8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃20min。
9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶於適量TE中。
外周血DNA提取技術
分離外周血白細胞提取方法：
試驗步驟：
1、取人肘靜脈血5ml，EDTA抗凝，2500rpm離心10min。
2、小心吸取上層血漿，分裝到3個0.5ml離心管中。
3、在血細胞中加入3倍體積的溶血液，搖勻，冰浴15min。
4、2500rpm離心10min，棄上清。
5、加入10ml溶血液，搖勻，冰浴15min。
6、3000rpm離心10min，棄上清。
7、倒置離心管，去掉殘液。
8、得白細胞，－80?C凍存。
試驗要求：
血至分離白細胞之間隔時間在室溫下放置不超過2h，4℃放置不超過5h，以防白細胞自溶。
氯仿法抽提外周血白細胞基因組DNA：
試驗試劑：
Ligsisbuffer：
133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最後加滅菌去離子水至1000ml，高壓滅菌。
ACD抗凝劑：檸檬酸1.68g檸檬酸鈉4.62g葡萄糖5.15g；最後加滅菌去離子水至350ml，高壓滅菌。
提取緩沖液（Extractionbuffer）：
10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml；最後加滅菌去離子水至100ml，高壓滅菌
試驗步驟：
1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分顛混至清亮。以4000rpm，離心5min。棄上清液。
2、沉澱中加入ligsisbuffer1500μl，充分勻漿。以6000rpm，離心5min。
3、徹底棄去上清，加入extractionbuffer500μl（裂解細胞），混勻置於37℃，水溶1h。
4、加入8μl的蛋白酶K，顛混，37℃過夜（或55℃，3h，但是37℃效果要好些）。
5、每管加入450μl飽和酚（取溶液下層）緩慢搖晃10min，以5500rpm，離心15min。
6、取上清，每管加入250μl飽和酚和250μl氯仿－異戊醇，搖勻10min，以5500rpm，離心15min。
7、取上清，每管加入500μl氯仿－異戊醇，搖勻10min，以5500rpm，離心15min。
8、取上清，每管加50μl的3M的NaAC＋，適量無水乙醇（預冷）至滿，搖勻放入-20℃保存2h以上。
9、以12000rpm，離心20min。去上清，加入70％乙醇500μl，以12000rpm，離心5min，去上清，50－60℃乾燥。
10、加入50μl滅菌去離子水，轉彈，混勻。
NaI提取法提取外周血白細胞基因組：
實驗步驟：
1、取外周抗凝血（全血）100ul於eppendorf管中，12000rpm離心12min。
2、棄上清，加雙蒸水200ul溶解，搖勻20s。
3、混勻後加6MNaI溶液200ul，搖勻20s。
4、加入氯仿/異戊醇（24：1）400ul，邊加邊搖，搖勻20s，12000rpm離心12min。
5、取上層液350ul，加入另一新eppendorf管中，加0.6倍體積異丙醇，搖勻20s，室溫放置15min，靜置後的反應體系15000rpm離心12min，使沉澱緊貼eppendorf管壁。
6、棄異丙醇，加70％乙醇1ml（不振動），以15000rpm離心12min。
7、棄乙醇，敞開eppendorf管蓋，烘乾（37℃恆溫箱）後，加1xTE溶液30ul，溶解DNA＞12h以上，製成的DNA液-20℃冰箱保存備用。
常用的外周血白細胞基因提取方法：
試驗原理：
苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白質的變性劑，反復抽提，使蛋白質變性，SDS(十二烷基磺酸鈉)將細胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白質或多肽或小肽分子，核蛋白變性降解，使DNA從核蛋白中游離出來。DNA易溶於水，不溶於有機溶劑。蛋白質分子表面帶有親水基團，也容易進行水合作用，並在表面形成一層水化層，使蛋白質分子能順利地進入到水溶液中形成穩定的膠體溶液。當有機溶液存在時，蛋白質的這種膠體穩定性遭到破壞，變性沉澱。離心後有機溶劑在試管底層(有機相)，DNA存在於上層水相中，蛋白質則沉澱於兩相之間。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白質。氯仿的作用是有助於水相與有機相分離和除去DNA溶液中的酚。抽提後的DNA溶液用2倍體積的無水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉澱DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉澱中的鹽，真空乾燥，用TE緩沖液溶解DNA備用。
試驗步驟：
1、將1mlEDTA抗凝貯凍血液於室溫解凍後移入5ml離心管中，加入1ml磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻，3500rpm離心15min,傾去含裂解紅細胞的上清。重復一次。用0.7mlDNA提取液混懸白細胞沉澱，37℃水浴溫育1h。
2、將上述DNA提取液混懸白細胞，37℃水浴溫育1h後，加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至終濃度為100-200ug/ml,上下轉動混勻，液體變粘稠。50℃水浴保溫3h，裂解細胞，消化蛋白。保溫過程中，應不時上下轉動幾次，混勻反應液。
3、反應液冷卻至室溫後，加入等體積的飽和酚溶液，溫和地上下轉動離心管5-10min，直至水相與酚相混勻成乳狀液。5000rpm離心15min，用大口吸管小心吸取上層粘稠水相，移至另一離心管中。重復酚抽提一次。加等體積的氯仿：異戊醇（24：1），上下轉動混勻，5000rpm離心15min，用大口吸管小心吸取上層粘稠水相，移至另一離心管中。重復一次。
4、加入1/5體積的3mol/LNaAc及2倍體積的預冷的無水乙醇，室溫下慢慢搖動離心管，即有乳白色雲絮狀DNA出現。用玻璃棒小心挑取雲絮狀的DNA，轉入另一1.5ml離心管中，加70%乙醇0.2ml，以5000rpm離心5min。洗滌DNA，棄上清，去除殘留的鹽。重復一次。室溫揮發殘留的乙醇，但不要讓DNA完全乾燥。加TE液20ul溶解DNA,置於搖床平台緩慢搖動，DNA完全溶解通常需12-24h。製成的DNA液-20℃冰箱保存備用。
真核細胞DNA的制備
一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是採用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨後用酚抽提而實現的。這一方法獲得的DNA不僅經酶切後可用於Southern分析，還可用於PCR的模板、文庫構建等實驗。
根據材料來源不同，採取不同的材料處理方法，而後的DNA提取方法大體類似，但都應考慮以下兩個原則：
1、防止和抑制DNase對DNA的降解。
2、盡量減少對溶液中DNA的機械剪切破壞。
試劑准備：
1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);1mMEDTA(pH8.0)。
2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);200mMNaCl;5mMKCl。
3、裂解緩沖液：250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。
4、20%SDS
5、2mg/ml蛋白酶K
6、Tris飽和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿
7、無水乙醇、75%乙醇
試驗步驟：
材料處理：
1、新鮮或冰凍組織處理：
1)取組織塊0.3-0.5cm3,剪碎，加TE0.5ml，轉移到勻漿器中勻漿。
2)將勻漿液轉移到1.5ml離心管中。
3)加20%SDS25ml，蛋白酶K(2mg/ml)25ml，混勻。
4)60°C水浴1-3hr。
2、培養細胞處理：
1)將培養細胞懸浮後，用TBS洗滌一次。
2)離心4000g×5min，去除上清液。
3)加10倍體積的裂解緩沖液。
4)50-55°C水浴1-2hr。
DNA提取：
1、加等體積飽和酚至上述樣品處理液中，溫和、充分混勻3min。
2、離心5000g×10min，取上層水相到另一1.5ml離心管中。
3、加等體積飽和酚，混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。
4、加等體積酚/氯仿，輕輕混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重復此步驟數次。
5、加等體積氯仿，輕輕混勻，離心5000g×10min，取上層水相到另一管中。
6、加1/10體積的3M醋酸鈉（pH5.2）和2.5倍體積的無水乙醇，輕輕倒置混勻。
7、待絮狀物出現後，離心5000g×5min，棄上清液。
8、沉澱用75%乙醇洗滌，離心5000g×3min，棄上清液。
9、室溫下揮發乙醇，待沉澱將近透明後加50-100mlTE溶解過夜。
植物組織中DNA的提取
試驗原理：
脫氧核糖核酸（deoxribonucleicacid，DNA）是一切生物細胞的重要組成成分，主要存在於細胞核中，鹽溶法是提取DNA的常規技術之一。從細胞中分離得到的DNA是與蛋白質結合的DNA，其中還含有大量RNA，即核糖核蛋白。如何有效地將這兩種核蛋白分開是技術的關鍵。DNA不溶於0.14mol/L的NaCl溶液中，而RNA則能溶於0.14mol/L的NaCl溶液之中，利用這一性質就可以將二者從破碎細胞漿液中分開。制備過程中，細胞破碎的同時就有Dnase釋放到提取液中，使DNA因被降解而影響得率，在提取緩沖液中加入適量的檸檬酸鹽和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白質變性而與核酸分離，再加入陰離子去垢劑0.15％的SDS，經過2h攪拌，或用氯仿－異醇除去蛋白，通過離心使蛋白質沉澱而除去，得到的是含有核酸的上清液。然後用95％的預冷乙醇即可把DNA從除去蛋白質的提取液中沉澱出來。
植物DNA的SDS提取法：
試驗試劑：
1、研磨緩沖液：稱取59.63gNaCl，13.25g檸檬酸三鈉，37.2gEDTA－Na分別溶解後合並為一，用0.2mol/L的NaOH調至pH7.0，並定容至1000ml。
2、10×SSC溶液：稱取87.66gNaCl和44.12g檸檬酸三鈉，分別溶解，一起定容至1000ml。
3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀釋10倍。
4、0.1×SSC溶液：用1×SSC溶液稀釋10倍。
5、Rnase溶液：用0.14mol/LNaCl溶液配製成25mg/ml的酶液，用1mol/LHCl，pH至5.0，使用前經80℃水浴處理5min（以破壞可能存在的Dnase）。
6、氯仿－異戊醇：按24ml氯仿和1ml異戊醇混合。
7、5mol/L高氯酸鈉溶液：稱取NaClO4．H2O70.23g，先加入少量蒸餾水溶解再容至100ml。
8、SDS（十二烷基硫酸鈉）化學試劑的重結晶：將SDS放入無水酒精中達到飽和為止，然後在70～80℃的水浴中溶解，趁熱過濾，冷卻之後即將濾液放入冰箱，待結晶出現再置室溫下涼干待用。
9、1mol／LHCl。
10、0.2mol/LNaOH。
11、二苯胺乙醛試劑：1.5g二苯胺溶於100ml冰醋酸中，添加1.5ml濃硫酸，裝入棕色瓶，貯存暗處，使用時加0.1ml乙醛液〔濃乙醛：H2O＝1：50（V／V）〕。
12、1.0mol/L高酸溶液（HClO4）。
13、0.05mol/LNaOH。
14、DNA標准液：取標准DNA25mg溶於少量0.05mol.L-1NaOH中，再用0.05mol/LNaOH定容至25ml，後用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中，加5.0ml1mol/LHClO4，混合冷卻後用0.5mol/LHClO4定容至刻度，則得100μg/ml的標准溶液。
實驗步驟：
1、稱取植物幼嫩組織10g剪碎置研缽中，加10ml預冷研磨緩沖液並加入0.1g左右的SDS，置冰浴上研磨成糊狀。
2、將勻漿無損轉入25ml刻度試管中加入等體積的氯仿－異戊醇混合液，加上塞子，劇烈振盪30s，轉入離心管，靜置片刻以脫除組織蛋白質。以4000rpm離心5min。
3、離心形成三層，小心地吸取上層清液至刻度試管中，棄去中間層的細胞碎片、變性蛋白質及下層的氯仿。
4、將試管置72℃水浴中保溫3min（不超過4min），以滅活組織的DNA酶，然後迅速取出試管置冰水浴中冷卻到室溫，加5mol/L高氯酸鈉溶液〔提取液：高氯酸鈉溶液＝4：1（V／V）〕，使溶液中高氯酸鈉的最終濃度為1mol/L。
5、再次加入等體積氯仿－異戊醇混合液至大試管中，振盪1min，靜置後在室溫下離心（4000rpm）5min，取上清液置小燒杯中。
6、用滴管吸95％的預冷乙醇，慢慢地加入燒杯中上清液的表面上，直至乙醇的體積為上清液的兩倍，用玻璃棒輕輕攪動。此時核酸迅速以纖維狀沉澱纏繞在玻璃棒上。
7、然後加入0.5ml左右的10×SSC，使最終濃度為1×SSC。
8、重復第6步驟和第7步驟即得到DNA的粗製品。
9、加入已處理的Rnase溶液，使其最後的作用濃度為50～70μg/ml，並在37℃水浴中保溫30min，以除去RNA。
10、加入等體積的氯仿－異戊醇混合液，在三角瓶中振盪1min，再除去殘留蛋白質及所加Rnase蛋白，室溫下以4000rpm離心5min，收集上層水溶液。
11、再按6、7步驟處理即可得到純化的DNA液。
植物DNA的CTAB提取法：
試驗步驟：
1、稱取新鮮葉片2-3g，剪碎放入研缽中，在液氮中研磨成粉末。
2、將粉末轉移到加有7ml經預熱的15×CTAB提取緩沖液15ml離心管中，迅速混勻後置於65℃水浴中，溫育30min。
3、取出離心管,冷卻至室溫，加入氯仿/異戊醇(24:1)，充分混勻，室溫下2300轉離心20min。
4、將上清轉移至另一新的15ml離心管中，加入1/10體積10%的CTAB和等體積的氯仿/異戊醇。充分混勻，2300rpm離心20min。
5、轉移上清至另一新的15ml離心管中，加入等體積1%的CTAB沉澱緩沖液，輕輕搖晃至形成DNA絮狀沉澱。1000rpm離心10min，使DNA沉澱於管底。
6、加入1.5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置於56℃水浴中過夜。
7、待DNA完全溶解後，加2-3ml4℃預冷的95%的冰乙醇使DNA沉澱，挑出DNA，置於15ml離心管中，用70%乙醇清洗30min。
8、離心機甩5s，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5min，倒出95%乙醇，在超凈工作台上吹乾。
9、將風乾的DNA直接在4℃保存備用或溶於100μlTE溶液中於-20℃保存。
細菌DNA的提取方法
針對一些不易於提取的細菌的方法:
試驗試劑：
抽提緩沖液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)
25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl
10MLiCl
2MLiCl
DEPC-water（抑制RNA酶活性）
3MNaAc(pH5.2)
96%乙醇
70%乙醇
試驗步驟：
1、抽提緩沖液65℃預熱。
2、加菌體到已經預熱的緩沖液（700ul）中混勻，65℃，10min。
3、加酚/氯仿/異戊醇（25：24：1），振盪，以12,000rpm，離心10min。
4、取上清，加氯仿/異戊醇（24：1）振盪，以12,000rpm，離心10min。
5、重復再作一次步驟4。
6、加入1/10體積的3M醋酸鈉和1.5倍體積的乙醇（或加入等體積的異丙醇），－20C下沉澱。
7、以2,000rpm，離心10min。
8、棄上清，以70％乙醇條洗沉澱，也可以再用100％乙醇洗，然後溶解於100ml水中。
較為常用的細菌DNA提取方法：
實驗步驟：
1、將菌株接種於液體LB培養基，37℃震盪培養過夜。
2、取1.5ml培養物12000rpm離心2min。
3、沉澱中加入567ul的TE緩沖液，反復吹打使之重新懸浮，加入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K，混勻，於37℃溫育1h.
4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混勻，再加入80ulCTAB/NaCl溶液，混勻後再65℃溫育10min。
5、加入等體積的酚/氯仿/異戊醇混勻，離心4-5min,將上清轉入一隻新管中，加入0.6-0.8倍體積的異丙醇，輕輕混合直到DNA沉澱下來，沉澱可稍加離心。
6、沉澱用1ml的70%乙醇洗滌後，離心棄乙醇．
真菌DNA提取總結的兩種方法：
第一種方法：
試驗步驟：
1、取真菌菌絲0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入4mL提取液，快速振盪混勻。
3、加入等體積的4mL的氯仿:異戊醇(24:1)，渦旋3～5min（此處是粗提沒有加酚）。
4、以4℃，1000rpm，離心5min。
5、上清再用等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提一次。以4℃，10,000rpm，離心5min。
6、取上清，加入2/3倍體積的-20℃預冷的異丙醇或2.5倍體積的無水乙醇沉澱,混勻,靜置約30min。
7、用毛細玻棒挑出絮狀沉澱,用75%乙醇反復漂洗數次,再用無水乙醇漂洗1次,吹乾，重懸於500ulTE中。
8、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃下處理1h。
9、用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，離心5min。
10、取上清，加入1/10倍體積的3MNaAc,2.5倍體積的無水乙醇,-70℃沉澱30min以上。
11、沉澱用75%乙醇漂洗，風干,溶於200ulTE中，-20℃保存備用。
DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH7.5），0.5MNaCl，0.01MEDTA，1％SDS，3MNaAc。
第二種方法：
試驗步驟：
1、真菌菌絲0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉。
2、加入3mL65℃預熱的DNA提取緩沖液，快速振盪混勻65℃水浴30min,期間混勻2-3次。
3、加入1mL5MKAc，冰浴20min。
4、等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm，4℃離心5min）。
5、取上清，加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇,混勻,靜置約30min。
6、用毛細玻棒挑出絮狀沉澱,用75%乙醇反復漂洗數次,再用無水乙醇漂洗1次,吹乾，重懸於500ulTE中。
7、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃處理1h。
8、用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，離心5min。
9、取上清，1/10V3MNaAc,2.5V體積的無水乙醇,-70℃沉澱30min以上。
10、沉澱用75%乙醇漂洗，風干,溶於200ulTE中，-20℃保存備用。
植物基因組提取(CATB法)
作者： 時間：2008-05-13 14:26:27 來源: 生物谷 瀏覽評論
一、實驗目的
掌握植物總DNA的抽提方法和基本原理。學習根據不同的植物和實驗要求設計和改良植物總DNA抽提方法。
二、實驗原理
通常採用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由於植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易於破碎，並減少研磨過程中各種酶類的作用。
十二烷基肌酸鈉(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化銨(hexadyltrimethyl ammomum bromide，簡稱為CTAB)、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate，簡稱SDS)等離子型表面活性劑，能溶解細胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑，能使蛋白質變性，並使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很強，經離心後即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質。上清液中加入無水乙醇使DNA沉澱，沉澱DNA溶於TE溶液中，即得植物總DNA溶液。
三、實驗材料
水稻幼葉
四、主要配方
2% CTAB抽提緩沖溶液: CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml滅菌, 冷卻後0.2-1% 2-巰基乙醇 （400ul） 氯仿-異戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml異戊醇，搖勻即可。
五、實驗步驟
1. DNA的提取
（1） 2%CTAB抽提緩沖液在65℃水浴中預熱。
（2）取少量葉片（約1g）置於研缽中，用液氮磨至粉狀；
（3） 加入700ul的2%CTAB抽提緩沖液，輕輕攪動；
（4） 將磨碎液分倒入1.5 ml的滅菌中，磨碎液的高度約占管的三分之二；
（5）置於65℃的水浴槽或恆溫箱中，每隔10 min輕輕搖動，40 min後取出；
（6）冷卻2 min後，加入氯仿-異戊醇（24：1）至滿管，劇烈振盪2~3 min，使兩者混合均勻；
（7）放入離心機中10 000 rpm離心10 min，與此同時，將600 µl的異丙醇加入另一新的滅菌中；
（8） 10 000 rpm離心1 min後，移液器輕輕地吸取上清夜，轉入含有異丙醇的內，將離心管慢慢上下搖動30 sec，使異丙醇與水層充分混合至能見到DNA絮狀物；
（9）10000 rpm離心1 min後，立即倒掉液體，注意勿將白色DNA沉澱倒出，將離心管倒立於鋪開的紙巾上； （10）60 sec後，直立離心管，加入720 µl的75%乙醇及80 µl 5 M的醋酸鈉，輕輕轉動，用手指彈管尖，使沉澱與管底的DNA塊狀物浮游於液體中；
（11）放置30 min，使DNA塊狀物的不純物溶解；
（12）10000 rpm離心1 min後，倒掉液體，再加入800 µl 75%的乙醇，將DNA再洗 30 min；
（13）10000 rpm離心30 sec後，立即倒掉液體，將離心管倒立於鋪開的紙巾上；數分鍾後，直立離心管，乾燥DNA（自然風干或用風筒吹乾）；
（14）加入50 µl 0.5 × TE(含RNase)緩沖液，使DNA溶解，置於37℃恆溫箱約15 h，使RNA消解；
（15）置於-20℃保存、備用。
2. DNA質量檢測
瓊脂糖電泳檢測，原理和方法見實驗二。
六、 注意事項
（1）葉片磨得越細越好。
（2）移液器的使用。
（3）由於植物細胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作應迅速，以免組織解凍，導致細胞裂解，釋放出DNA酶，使DNA降解。