魚細胞培養方法步驟

1. 什麼是sl培養基它的配方是什麼

SL培養基（選擇性培養基）：酪朊水解物(胰蛋白酶解酪蛋白鬧尺洞)胰酶解酪腖10 g
酵母提取物 5g
葡萄糖 20g 檸檬困慧酸二銨 2 g
吐溫80 1.0ml 3-水醋酸鈉 25g
磷酸二氫鉀 6g 7-水硫酸鎂 0.58 g
7-水硫酸鐵 0.03g 4-水硫酸錳 0.15g
瓊脂 15 g 溶解在500ml水中 可以再加10ml/L的亞胺環液枯己酮能排除酵母菌的生長

2. 動物細胞傳代培養的操作步驟

1.觀察培養基是否正常，細胞狀態如何，細胞密度如何，決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。
2.加熱PBS、versene、培養基，(提前做好) 瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。
3.打開超凈台(先開風機，後開照明)，用75%乙醇清潔檯面，點燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個，置於架子上。
4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在專用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
5.取待傳代的細胞。打開versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時距離酒精燈心遠些，不要把渣滓帶進去。把試劑拿入檯子的時候，盡量平穩，不要讓試劑碰到瓶口。
6.用吸量管吸取舊的培養基，置離心管中，吸量管加入versene，然後將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時都不要對著細胞。
7.打開胰酶，然後將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶後，盡快放平，使細胞消化時間一致。
8.將細胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，打開PBS. 之後拿出來鏡下隨時觀察。使用二次消化法，去除容器中殘余的細胞。別忘了用舊培養基中和。
9.取細胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之後(細胞變圓，但不漂起)，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養基加埋辯入細胞，吹打，至所有細胞從培養鍵慶皿底部脫落下來。用PBS洗細胞，稿液握versene對細胞有毒性，且不能被血清中和。然後吸取至離心管中，800 rpm離心5分鍾。
10.吸量管吸取適量培養基加入新的培養皿中。
11.細胞離心畢，用吸新培養基的管棄去上清，先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養皿中培養基適量，加入離心管，小體積混勻，將細胞重懸，尖吸管吹勻。
12.擦計數板，用槍吸10ul的液體，計數。不要把槍伸到離心管內。
13.吸量管吸取細胞懸液，加入新的培養皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超凈台。

3. 動物細胞培養的原理。

動物細胞培養原理是細胞增殖。動明慶宴物細胞培激銀養就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶），放在適宜的培差磨養基中，讓這些細胞生長和增殖。細胞培養是指細胞在體外條件下的生長，動物細胞在單獨細胞培養的過程中不再形成個體。

4. 細胞培養的具體步驟和要求以及注意事項

一、細胞復甦

將凍消襲餘存細胞從液氮中取出後，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10mlDMEM培養基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM完全培養基，輕輕吹打，接種於10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加人1mlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。

加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10mlPBS（經高壓滅菌，保存於40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。

凍存液的配製：70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

注意事項

（1）進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有禪棗瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火拿滾焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（2）細胞污染的預防

①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，並在無菌實驗檢測陰性後才能使用。操作室及剩餘的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

②操作過程防止污染。

③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂後才能進入細胞間。

④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全櫃之外的物品，必須及時對手套進行消毒。

⑤進入細胞培養間後關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全櫃的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。

⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，並將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

⑦實驗操作時生物安全櫃的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區，以免造成不必要的污染。

⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

⑨不要從敞開的容器口上方經過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。

⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（3）防止細胞交叉污染

①在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，最好作上標記便於辨別。按順序進行操作，一次只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。

②在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。

③所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發生污染可重新復甦細胞，繼續培養。

(4)魚細胞培養方法步驟擴展閱讀：

細胞培養（cellculture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸鹼度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖並維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。

不論對於整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。

細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以藉此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

5. 動物細胞培養的一般步驟是什麼 動物細胞培養的步驟簡介

1、復甦，把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化後（大概1-1.5分鍾），拿出來噴點酒精放到超凈工作台里。把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鍾。把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝搭搭有10ml培養差瞎基的10cm培養皿中前後左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到CO2培養箱中培養，細胞貼壁後換培養基。3天換一次培養基。

2、傳代，培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。把原有培養基吸掉。加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鍾。細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鍾。倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。根據細胞種類知慶拿把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。

3、凍存，把細胞消化下來並離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鍾，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然後放到液氮灌中保存。凍存液的配製：70%的完全培養基 20??%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

6. 求助魚的巨噬細胞分離培養

求助魚的巨噬細胞分離培養
吞噬細胞功能檢測的臨床應用 試驗原理是將人巨噬細胞與雞紅細胞(chicken red blood cell，CRBC) 混合後孵育，通過計算巨噬細噬 CRBC 百分率和吞噬指數判斷人巨噬細胞的 吞噬功能。通過觀察 CRBC 消化程度，反映巨噬的消化功能。 一、中性粒細胞功能檢測的臨床意義 趨化能力顯著下降見於 Chediak-Higashi 綜合征、Lasy 白細胞綜合征、 慢性皮膚黏膜白色念珠感染、糖尿病、燒傷等。正常新生兒中性粒細胞趨 化能力亦明顯低下。吞噬能力明顯低下者見於補或抗體缺陷症時。酶代謝 能力顯著降低見於慢性肉芽腫、6 磷酸葡萄糖脫氫酶(G-6-PD)高度缺陷。 NBT 試驗不僅是檢測中性粒細胞的胞內殺菌能力的試驗，還作為疾病的 鑒別指標。正常人外血中性粒細胞 NBT 陽性率約為 10％，全身性細菌性感 染在 NBT 試驗陽性率明顯增高；病毒性感或無感染的低熱患者陽性率一般 在 10％以下。器官移植病人術後因細菌感染伴發熱時，NBT 陽性升高；而 因排斥反應發熱者，NBT 則正常。故發熱患者在暫無條件查清病因或檢測報 告較遲時，可用 NBT 試驗對發熱病因作過篩性鑒別。 二、巨噬細胞功能檢測的臨床意義 單核巨噬細胞系統具有直接吞噬和殺傷病原體和腫瘤細胞的功能，還 具有參與抗原加工、遞呈免疫調節的重要作用，檢測巨噬細胞吞噬功能對 於判斷巨噬細胞的功能，了解機體的特異性和非特性免疫狀態有重要作用。 巨噬細胞吞噬功能低下，主要見於原發和繼發的吞噬細胞功能缺陷、 胃癌、腸癌等多種腫瘤病，腫瘤病灶中浸潤的巨噬細胞與腫瘤的擴散與轉 移呈負相關，檢測這兩個指標有助於判斷機體抗腫的能力。

7. 魚的肌細胞可以進行傳代培養嗎

一般不瞎襲用魚的肌細胞進行傳代培養，因為它皮族的分裂能力低。通常選擇魚類的胚胎組磨握兄織和幼魚的各種組織作為培養材料。

8. 動物細胞貼壁培養的方法有哪些

動物細胞貼壁培養的方法有組織塊培養法和消化培養法。

貼壁細胞培養方法操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭乾凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻
片，用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗要點及說明 ：

1．本方法適用於貼壁細胞培養，而不適用於懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃製造，並經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾乾。

貼壁培養的優點：

• 容易更換培養液；細胞緊密黏附於固相表面，可直接傾去舊培養液，清洗後直接加入新培養液。

• 容易採用灌注培養，從而達到提高細胞密度的目的；因細胞固定表面，不需過濾系統。

• 當細胞貼壁於生長基質時，很多細胞將更有效的表達一種產品。

• 同一設備可採用不同的培養液/細胞的比例。

• 適用於所有類型細胞。

  
  

貼壁培養的缺點：與懸浮培養法相比

• 擴大培養比較困難，投資大；

• 佔地面積大；

• 不能有效監測細胞的生長；

9. 生物實驗操作步驟

觀悄脊察小魚尾鰭內血液的流動
材料用具：
尾鰭色素少的活的小魚，顯微鏡，培養皿，滴管，棉絮（紗布）。
方法步驟：
1、取尾鰭色素少的小活魚，用浸濕的棉絮把小金魚頭部的鰓蓋和軀幹部包裹起來，露出口
和尾部。
注意：為了控制小金魚的跳動，最好用浸濕的棉絮從小魚頭部的鰓蓋、軀幹部一直包裹到尾
鰭，只露出口和尾鰭。
2、把小金魚放在培養皿中，使尾鰭平貼在培養皿上。
注意：小魚在培養皿中會跳動，應等魚安定後，將載玻片蓋在尾鰭上。
3、將培養皿放在載物台上，用低倍顯微鏡觀察尾鰭血管內血液的流動情況。
注意：觀察時最好用低倍鏡。因為用低倍鏡觀察時，雖然物像較小，但視野較亮。
4、找到管徑最小的血管，注意觀察血液在這種血管中的流動情況。
5、注意觀察管徑最小的血管是由什麼血管分支而來的，它最終又匯入什麼血管中。

注意：
（1）觀察過程中，應常用滴管往棉絮上滴碰運逗水（滴水過多，影響觀察），讓笑賣魚鰓始終保持濕潤，
盡量使小魚少受傷害。如果時間過長，可以把小魚放回魚缸，另取一條小魚觀察。實驗後，
將小魚放回魚缸。
（2）在冬天用顯微鏡觀察小魚尾鰭內的血液流動情況時，應在實驗前將小金魚放在30℃左
右的溫水中浸浴2～3分鍾，以加速它的新陳代謝，使血流明顯。

10. 動物細胞培養的基本過程

一、准備工作

准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，准備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

二、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。

取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養

將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態棚拍。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養進入培養後有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。

細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。

四、凍存及復甦

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞橘和罩碸或甘油）的培養基，圓鬧以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。

在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

(10)魚細胞培養方法步驟擴展閱讀：

進入細胞間開始細胞培養時，注意事項：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。