明德核酸提取儀的主要步驟及方法

Ⅰ RT-PCR檢測方法的具體步驟

RT-PCR檢測方法的具體步驟如下：

（一）RNA提取
1、根據標本數量分裝RLT液：從Kit中取出RLT液，用1.5mL離心管分裝，每管500μL（在體系配製區操作）。
2、在生物安全櫃內將采樣液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培養物（雞胚尿囊液或細胞培養液）取100μL加入RLT液管中，充分混勻。 3、每管分別加入5μL β-巰基乙醇，混勻後依次加入600μL 70%的乙醇，充分混勻。
4、從Kit中取出帶濾柱的2mL收集管，打開包裝將其做好標記。取步驟（3）中的混合液600μL加入濾柱中，12000rpm，離心15s，棄收集管中的離心液。
5、濾柱仍放回收集管上，將步驟（3）剩餘的混合液全部吸入濾柱中，12000rpm，離心15s，棄離心液。
6、於濾柱中加入700μL Wash Buffer RW1液，12000rpm，離心15s。
7、從QIAGEN RNeasy Mini Kit中取一支幹凈的2mL收集管，將離心後的濾柱移到新的收集管上，於濾柱中加入500μL Wash Buffer RPE液，12000rpm，離心15s。
8、棄收集管中的離心液，再於濾柱中加入500μL Wash Buffer RPE液，13000~14000rpm，離心2min。
9、將濾柱移到一個干凈的1.5mL eppendorf管上，向濾柱中加入30~50μL的Rnase-free Water，室溫靜置1~3min。
10、12000rpm，離心1min，收集離心液即為提取的病毒RNA，立即做實驗或-20℃以下保存。
注意：Buffer RPE使用之間加44mL無水乙醇。
（二）反應體系配製
1、實驗設計： 檢測標本RNA
陰性對照：無菌水（標本RNA提取時，跟標本同時提取無菌水。） 陽性對照：已知病毒RNA

2、PCR反應體系配製（在體系配製區配反應液） 1）按下表加入試劑： PCR反應體系
對每一個建立的反應確定反應數（n=擬進行的PCR管數，包括陰性，陽性對）。考慮到陰性無模板對照，陽性對照，誤差，制備過量的反應混合物是必要的。具體如下：
（1）如果包括對照，樣品的數量（n）為1到14，那麼N=n+1；
（2）如果包括對照，樣品的數量（n）大於15，那麼N=n+2。
2）將上述反應液混勻，分裝到0.2mL PCR小管中，每管20μL，分別做好標記。

3）加RNA模板（在核酸提取區）
將上述分裝好的PCR小管分別加入模板。首先加入陰性對照管（5μL無菌水），然後分別加標本RNA（每管5μL），最後加入陽性對照RNA（每管5μL）。
3、RT-PCR反應
將上述加好模板的反應管混勻，短暫離心後放入PCR儀進行RT-PCR 擴增。

4、RT-PCR產物檢測
1）2.0％瓊脂糖凝膠制備：稱取2.0g Agarose，倒入耐熱玻璃瓶內，再加入電泳液（1×TBE）100mL，輕輕混勻後加熱，使Agarose完全熔化。待Agarose膠溫度降至50～60℃左右，加入核酸染料，輕輕混勻（不要產生氣泡）。待膠溫度降至50℃左右時，將其倒入制膠板，插好電泳梳子。待膠完全凝固（約30～60min）之後，將梳子拔出。
2）將制備好的電泳膠放入電泳槽（帶梳子孔的一端在陰極），倒入電泳液（1×TBE）浸過膠面即可。
3）PCR產物各取10μL，加入2μL上樣緩沖液（6×Loading Buffer），混勻後加入電泳膠孔內（先加Marker（DL－2000）5μL，然後依次加標本PCR產物，再加陰性對照，最後加陽性對照產物）。 4）電泳電壓100V，約30～40min後看結果。 5）將電泳膠放入凝膠成像系統觀察結果並照相。
5、結果判斷。

Ⅱ 核酸提取或純化技術主要有哪幾類

核酸提取或純化技術主要有三類：

1、傳統方法（操作復雜，耗時長）

2、離心柱法（試劑盒）

3、磁珠法（可單獨采購磁珠或買成品試劑盒）

其中，磁珠法可實現自動化操作，是目前比較主流的方法。

核酸提取應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫學鑒定、環境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業和分子生物學研究等多種領域。

(2)明德核酸提取儀的主要步驟及方法擴展閱讀：

核酸提取的注意事項：

1、儀器的安裝環境：正常的大氣壓(海拔高度應該低於3000m)、溫度20-35℃、典型使用溫度25℃、相對濕度10%-80%、暢通流入的空氣為35℃或以下。

2、避免將儀器放置在靠近熱源的地方，如電暖爐；同時為防止電子元件的短路，應避免水或者其他液體濺入其中。

3、進風口和排風口均位於儀器背面，同時避免灰塵或纖維在進風口聚集，保持風道的暢通。

4、核酸提取儀離其他豎直面至少10cm。

5、儀器接地：為了避免觸電事故，儀器的輸入電源線必須接地。

6、遠離帶電電路：操作人員不得擅自拆解儀器，更換元件或進行機內調節必須有持證的專業維修人員完成，不要在接通電源的情況下更換元件。

Ⅲ DNA提取的步驟及原理

酚-氯仿法提取人外周血基因組DNA的基本原理是什麼？
答：蛋白質對DNA製品的污染常常影響到以後的DNA操作過程，因此需要把蛋白質除去。一般採用苯酚/氯仿抽提的方法。苯酚、氯仿對蛋白質有極強的變性作用，而對DNA無影響。經苯酚/氯仿抽提後，蛋白質變性而被離心沉降到酚相與水相的界面，DNA則留在水相。
取ACD抗凝血2~3ml，置於15ml的離心管內----加滅菌生理鹽水至10ml，顛倒混勻，3000rpm，離心10min-----棄上清，重復步驟2兩至三次，直至上清呈無色或微紅色----加壓積紅細胞5.5倍的溶血試劑，混勻，放置-20℃冷溶10min後移至4℃，30min，直至溶液由紅色懸液變成紅棕色清亮溶液-----3000rpm，離心15min，倒扣離心管於濾紙，使管壁液體流盡-----依次加入STE 450 ml，用槍頭吹打混勻後，加入蛋白酶K至終濃度100mg/ml，然後加入10% SDS 25 ml，混勻後移至1.5ml EP管，放置於37℃水浴過夜或56℃，3h----加入等體積飽和酚（約500ml），漩渦振盪器上混勻至溶液呈乳滴狀，13000rpm，離心5min。------取上清，加入500μl酚/氯仿（等體積配製混合液），漩渦振盪混勻，13000rpm，離心10min。---------取上清，加入500μl氯仿/異戊醇（24：1混合），漩渦振盪混勻，13000rpm，離心10min。-------取上清，加入50μl物NaAc（1/10體積），混勻後再加入1ml 冰凍的無水乙醇，顛倒輕搖，即可見絮狀的DNA沉澱，13000rpm，離心10~20秒，得到DNA沉澱。------------DNA沉澱用70%乙醇洗2~3遍。--------待乙醇揮發後，DNA沉澱用100μl TE緩沖液溶解，核酸蛋白測定儀分析DNA濃度和純度，-20℃保存備用。

Ⅳ 全自動核酸提取儀介紹.

全自動核酸提取儀介紹：全自動核酸提取儀是應用配套的核酸提取試劑來自動完成樣本核酸提取工作的儀器。廣泛應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫學鑒定、蘆纖環境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業和分子生物學研究等多種領域。

上海旦鼎國際貿易有限公司是實驗室配套儀器和生命科學儀器的專業提供商。公司NP968全自動核酸提取儀是使用通用磁珠法提取核酸的高科技產品，具有自動化程度高，提取速度快，結果穩定，操作簡便的優點。利用一般生化專用的96孔陪宏仿反應盤，可同時操作1-32個樣品，可廣泛應用於常規科研、基因組學、疾控系統、食品安全、法醫等領域。使用本儀器只需加入樣品與以磁珠為載體的全自動核酸提取試劑於96孔專用反應盤中，選擇或編輯適當程序後執行即可。搭配不同種類的磁珠核酸試劑組，可以快速提取動植物組織、血液、體液、刑事檢體等樣品中的絕嘩DNA和RNA。

Ⅳ 核酸提取儀原理

1. 根據儀器型號大小不同劃分 [1] 
1) 自動液體工作站
自動液體工作站是功能非常強大的設備，液體分液、吸液等自動完成，甚至能通過整合擴增、檢測等功能，實現標本提取、擴增、檢測全自動化。提取核酸只是其功能的一個應用，不太適合常規實驗室提取核酸，一般都應用在單一類標本並且一次提取標本量非常大(至少96個，一般幾百個)的實驗需求上。自動工作站的平台建立及平台的運作，需要比較大的資金。
2) 小型自動核酸提取儀
小型的自動化儀器是通過運行結構的特殊性來達到自動提取核酸的目的，可以在任何實驗室得到應用。
2. 根據提取原理不同劃分
1) 採用離心柱法的儀器
離心柱法核酸提取儀主要採用離心機和自動移液裝置相結合的方法，通量一般在1-12個樣本，操作時間和手工提取差不多，並不能提高實際工作效率，且價格昂貴，不同型號儀器的耗材也不能通用，僅適合經費充足的大型實驗室使用。
2) 採用磁珠法的儀器
以磁珠為載體，利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸，在低鹽高PH值下與核酸分離的原理，再通過移動磁珠或轉移液體來實現核酸的整個提取純化過程。由於其原理的獨特性，所以可設計成很多種通量，既可以單管提取，也可以提取8-96個樣本，且其操作簡單快捷，提取96個樣本僅需30-45min，大大提高了實驗效率，且成本低廉，因而可以在不同實驗室使用，是目前市場上的主流儀器。

磁珠法核酸提取儀的基本原理
磁珠法核酸提取儀一般分為抽吸法和磁棒法兩種 [2]  ：
1. 抽吸法，也叫移液法，是通過固定磁珠、轉移液體來實現核酸的提取，一般通過操作系統控制機械臂來實現轉移。提取過程如下:
1) 裂解：在樣品中加入裂解液，通過機械運動及加熱實現反應液的混勻及充分反應，細胞裂解，釋放核酸。
2) 吸附：在樣品裂解液中加入磁珠，充分混勻，利用磁珠在高鹽低PH值下對核酸具有很強親和力的特點，吸附核酸，在外加磁場作用下，磁珠與溶液分離，利用吸頭將液體移出棄至廢液槽，吸頭棄掉。
3) 洗滌：撤去外加磁場，換用新吸頭加入洗滌緩沖液，充分混勻，去除雜質，在外加磁場作用下，將液體移出。
4) 洗脫：撤去外加磁場，換用新吸頭加入洗脫緩沖液，充分混勻，結合的核酸即與磁珠分離，從而得到純化的核酸。

Ⅵ 磁珠法核酸提取的磁珠法核酸提取過程

磁珠法核酸提取過程：

1、裂解

取抗凝全血到1.5mLEP管中，加入BufferA、BufferB，混合均勻。然後把EP管置於恆溫水箱中溫育15～20min。

2、結合
將EP管從溫育設備中取出，離心後取上清，加入振盪混勻的磁珠結合液，顛倒混勻。將EP管置於磁力架上進行磁分離，棄廢液（吸凈管蓋及管底殘液）。

3、洗滌
⑴加入洗滌液Ⅰ，點含行振數次（若有團狀或絲狀物可增加點振次數及力度），然後磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液；
⑵加入洗滌液Ⅱ，點振數次（若有團狀或絲狀物可增加點振次數及力度），然後磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液；
⑶譽老納重復步驟⑵一次；
⑷室溫下開蓋乾燥。

4、洗脫
加入洗脫液，放置水浴鍋中溫育後磁分離，小心吸取上慶沒清液至新的EP管中，進行下游實驗。

Ⅶ 磁珠法通用核酸提取的操作步驟有哪些

產品特點

◎操作簡便快速，可在30分鍾內獲得理想的核酸，適用於較多樣本的批量提取；

◎提取核酸純度高，無抑制劑，A260/A280為1.8-2.0；

◎採用自主研發的改性硅基磁珠，同樣的樣本量提取的核酸更多。

產品介紹

BIOG Routine NA Mag-B Kit是常州百代生物科技股份有限公司研製的專門用於提取口腔拭子、泌尿生殖道拭子、細胞懸液、組織懸液、唾液、尿液和水樣等樣本核酸的試劑盒。BIOG Swab NA採用獨特的裂解液配方，細胞裂解快速徹底，核酸提取效率高。試劑盒採用了我們自己研發的改性硅基磁珠，核酸吸附能力強，提取核酸純度高。試劑盒操作簡便快速，特別適用於一次試驗較多樣本的批量提取。與同類產品相比，提取得到的核酸純度更高，產量更大，最大限度地去除了蛋白、色素、脂類、雜質污染，可以直接應用於各種PCR檢測和常規分子生物學實驗。

操作步驟

1. 請自行准備：無水乙醇、異丙醇、1.5mL離心管。

2. 取出洗滌液，按以下操作：

a) 洗滌液A：按終濃度30%的比例加入無水乙醇，如21mL加入9mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇，混勻。

b) 洗滌液B：按終濃度70%的比例加入無水乙醇，如9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇，混勻。

c) 請按需配製洗滌液，盡量不要多配。配製後的洗滌液如一次使用不完，可嚴格密封後放於室溫陰涼處保存，1周內使用完畢。

3. 取1.5mL離心管，加入0.2mL 裂解液、20μL 消化液，再加入0.2mL樣本，振盪混勻，65℃溫育10 分鍾。

4. 冷卻到室溫，加入0.2mL異丙醇，充分混勻。再加入20μL磁珠復合液（每次使用前須充分混勻），振盪混勻3min（注意不要顛倒混勻，以防磁珠粘附於管蓋內壁）。

5. 將離心管置於磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附，開蓋，徹底吸棄上清液（注團穗意槍頭不要接觸磁珠）。.

6. 加入0.5mL配製後的洗滌液A，將離心管從磁力架上取下，中速振盪2min，確保磁珠完全分散。再將離心管置於磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附，開蓋，徹底吸棄上清液（注意槍頭不要接觸磁珠）。

7. 加入0.5mL配製後的洗滌液B，將離心管從磁力架上取下，中速振盪2min，確保磁珠完全分散。再將離心管置於磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附，開蓋，徹底吸棄上清液（注意槍頭不要接觸磁珠）。

8. 將離心管從磁力架上取下，開蓋，乾燥約3-5min，至無明顯乙醇氣味 (注意乙醇要揮發干凈)。

9. 加入40 μL洗脫液，振盪至磁珠充分散開，60℃溫育2min，振盪混勻30 sec。

10. 將離心管置於磁力架上，待磁珠完全吸附後，小心吸取上清液至一新的1.5mL離心管中，提取的核酸可直接用於下游實驗，或-70℃保存

備用。

注意事項：

1、本試劑盒與1.5mL離心管磁力架配套使用，可選前卜用BIOG 多功能通用磁力架。

2、本試劑可用於DNA提取，也可用於RNA提取，試劑盒內液體已經去RNA酶處理，但如用於RNA提取，實驗所用器具也應除去RNA

酶，實驗中最好戴一次性潔凈手套、口罩，提取的RNA溶液可適當加入RNA保護因子（貨號：慧或穗51090，一般50μLRNA溶液加入3μL。）

3. 裂解液含有刺激性化學物質，操作過程請做好防護措施，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻，洗滌液在使用前應加入乙醇後充分混勻。

Ⅷ 核酸檢測具體步驟

1、核酸提取使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。

2、逆轉錄合成cDNA。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。

3、PCR擴增反應PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。

4、擴增產物定性分析；擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的戚粗分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。

5、結果判定和完成報告單：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。

(8)明德核酸提取儀的主要步驟及方法擴展閱讀：

檢測新型冠狀病毒特異序列的方法最常見的是熒光定量PCR。因PCR反應模板僅為DNA，因此在進行PCR反應前，應將新型冠狀病毒核酸逆轉錄為DNA。在PCR反應體系中，

包含一對特異性引物以及一個Taqman探針，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標記了報告熒光基團和淬滅檔仔態熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信行源號被淬滅基團吸收；

如反應體系存在靶序列，PCR反應時探針與模板結合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發出熒光。

每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產生。熒光定量PCR儀能夠監測出熒光到達預先設定閾值的循環數與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。不同生產企業的產品會依據自身產品的性能確定本產品的陽性判斷值。

Ⅸ 核酸pcr步驟

一、個人三級防護穿戴

帶一次性帽子、佩戴醫用N95、一次性防護服、一次性鞋套、一次性防水靴套、一層乳膠手套、外層一次性隔離衣、防護目鏡、第二層乳膠手套、穿戴完畢後應盡快通過專用緩沖間或者走廊，進入核酸提取區（專業核酸提取實驗室）。


二、樣本滅活處理

核酸檢測須有兩名工作人員快速通過進入實驗室，進行滅活實驗操作。生物安全櫃內需配備吸水棉與消毒酒精、有條件可配備吸水檯布，對樣本溢灑時進行緊急處理；打開二級容器，用75%酒精消毒物體表面，檢測樣本管密閉性後進行滅活處理，滅活條件（56℃，30min，恆溫樣本滅菌儀等多種方式），取出酒精滅活管用酒精擦拭外表，將樣本放入到生物安全櫃內。

三、手工核酸提取

操作人員進入試劑配置區或者單獨的潔凈實驗室。

一、試劑區准備

根據說明說要求，在AW1中加入無水乙醇130mL，在AW2中加入無水乙醇160mL，計入無水乙醇後及時做好標記，在310μg的Carrier RNA中加入310μL AVE，並顛倒混勻使Carrier RNA充分溶解，就此完成洗液AW1、洗液AW2和Carrier RNA配置，而後通過傳遞窗傳送到樣本處理區，或者由專人送到核酸提取實驗室中。

二、樣本的裂解

用1.5ml的無菌EP管，移液器移取560μl AVL裂解液，加入5.6μl Carrier RNA，加入140μl的已滅活的待提取核酸的待測樣本，渦旋振盪15s，室溫靜止10min。將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。裂解完成後，加入560μl無水乙醇，振盪混勻15s，將上述EP管放入離心機內瞬時離心以去除可能殘留在EP管蓋上的裂解產物，防止污染。

向離心柱加入裂解產物630μl，8000轉離心1min，若離心機在生物安全櫃之外，每次使用都需進行外表面消毒。更換新廢液收集管，要從離心機中小心取出離心柱，將上層離心柱轉移到新收集管中，繼續將剩餘裂解產物630μl加入離心柱中，若樣本體積大於140μl時需重復此步驟，直到全部裂解產物都過柱離心，8000轉離心1min，小心將離心柱轉移到新的收集管中。

取500μl AW1加入離心柱中（注意，此處加樣操作時務必將移液器吸頭接觸離心柱內壁緩慢加樣），8000轉離心1min。小心取出離心柱，更換新的收集管。

取500μl AW2加入離心柱中，14000轉離心3min，小心取出離心柱，更換新的離心柱上端收集管，置於離心機中使用最大轉速離心1min，以確保將AW2中的殘液完全離心干凈。

取無菌1.5mlEP管收集核酸，將離心柱上端小心放入1.5mlEP管中，取40-60μl的洗脫液AVE加入到離心柱中（注意：洗脫液應盡量全部覆蓋住離心柱膜），用EP管管蓋蓋住離心柱，使用無菌剪刀剪去原離心柱管蓋。

室溫靜止1min，將其放入離心機中8000轉離心1min，回收核酸。丟棄離心柱，EP管中即為獲取的提取核酸，做好標記與登記。

四、用儀器提取核酸

首先按照說明說准備核酸提取試劑，將200μl滅活樣本添加到核酸提取試劑中，根據核酸提取儀的設置程序上機提取核酸，等儀器操作結束，提取核酸完成，回收核酸。

五、PCR體系配置

根據檢測樣本數量配製體系，將配製好的PCR體系充分混勻並離心後，將其通過傳遞窗送至樣本處理核酸加樣區，或單獨的樣本加樣實驗室。按照每孔分裝20μL反應體系，進行分裝，在各孔分別加入5μL待測樣本核酸或陰陽對照物（請注意每次檢測器包含1個陽性對照和3個陰性對照且陰性對照需隨機分布），密封PCR管，有條件時模板加樣盡量在單獨的生物安全櫃進行。

工作人員將配好的PCR管通過傳送窗口送至PCR擴增區，或由專人送至PCR擴增實驗室，上機檢測。

六、上機檢測及結果分析

工作人員進入基因擴增分析實驗室，從傳遞窗取出PCR反應管，上機前需混勻並離心反應體系，按試劑盒說明說設置擴增參數並分析判讀結果。分析結果時，嚴格閱讀說明說充分了解試劑盒靈敏度、方法學局限性等綜合判讀實驗結果。

為防止擴增污染，反應結束後的PCR擴增管嚴禁開蓋並裝入密封帶中裝入指定的垃圾桶中。

七、檢測後的消毒處理

樣本處理完成後，工作人員應用75%的酒精消毒處理外層手套並脫下外層手套，放入生物安全櫃中的生物垃圾桶中。檢測完成後，生物安全櫃檯面和地面應用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇進行擦拭。將安全櫃內產生的醫療垃圾用三層垃圾袋密封，並將其放入指定垃圾桶中，垃圾袋上需標記醫療垃圾信息。實驗結束後，生物安全櫃以及實驗室均要進行紫外燈照射消毒，時間至少30min。

實驗操作人員，應有他人用0.5-1%的有效氯消毒劑或75%乙醇對一次性隔離衣均勻噴霧消毒處理，而後脫去隔離衣將檢測醫用垃圾放入制定垃圾桶中，工作人員在離開二級實驗室後，應在緩沖區或走廊按順序摘脫個人三級防護用品，首先應帶新的外層手套，摘掉護目鏡並置於75%乙醇中消毒，自上而下、自內向外翻轉脫掉一次性防護服，脫去外層手套，摘除、一次性帽子、脫一次性鞋套。脫掉手套，病毒防護服均需進行高壓滅菌處理。高壓前後醫療垃圾嚴格區分。

病毒相關垃圾需在120度，30min條件進行濕熱高壓處理，以高壓試紙條變色為有效，而後作為普通醫療垃圾處理。

Ⅹ 核酸檢測孵育箱的使用方法

主要分為采樣，留樣，保存，純昌塌滅活，檢測五步。
操作步驟為：
1、用咽拭子擦拭咽後壁及雙側咽扁桃體處各5-10次，且不斷旋轉拭子。
2、需要醫務人員進行留樣，將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後文即旋緊管蓋。
3、保存，將樣本管放入密封袋中及時送檢，而送檢過程中需做圓要嚴格的運輸環境，2-8攝氏度保存。
4、對樣品進行滅活處理。
5、將樣品放入孵育箱進行檢測。
檢測前，還需要對病毒迅舉進行滅活，這樣的作用會使病毒蛋白的結構受到破壞，蛋白不再有生理活性，所以失去感染、致病和繁殖能力，但是常規的滅活不影響病毒蛋白的一級結構，意思就是病毒蛋白的序列沒有變化。四步操作核酸提取，將滅活病毒後的樣本進行核酸提取，用於後續檢測，可以採用自動化的設備，如核酸提取儀等。五步熒光PCR核酸檢測，也就是上機器檢測，將提取物進行熒光PCR擴曾反應，需要70-80分鍾。