ttc測定種子活力測定方法出自哪裡

A. TTC原理是怎樣的

氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride，TTC），也稱紅四氮唑（Red tetrazoline，RT）。可用來測定種子活力，被種子中的還原性物質（脫氫酶）還原為紅色的TTF，從而使活種子胚著上紅色而胚乳不被染色。而死種子完全不被染色。1.浸泡 將待測種子在 30 ～ 35 ℃溫水中浸種（大麥、小麥 6 小時，玉米 5 小時左右），以增強種胚的呼吸作用。 2. 顯色 取吸脹的種子 200 粒，用刀片沿種子胚的中心線縱切為兩半，將其中的一半置於 2 只培養皿中，每皿 100 個半粒，加入適量的 0.5% TTC 溶液，以覆蓋種子為度。然後置於 30 ℃恆溫箱中 1 h 。觀察結果，凡胚被染為紅色的是活種子。 將另一半在沸水中煮 5 min 殺死胚，作同樣染色處理，作為對照觀察。 3. 計算活種子的百分率
在活細胞計數法測菌落數時可使用其防止菌落蔓延。

B. 紅墨水染色法的實驗原理是什麼

實驗七 種子 生活力的快速測定 種子生活力（ seed viability ）是指種子能夠萌發的潛在能力或種胚具有的生命力。測定種子生活力常採用萌發實驗，即在適宜的條件下，讓種子吸水萌發，在規定的時間內統計發芽種子的百分數。但是，採用發芽實驗測定種子的生活力所需時間較長，有時在生產上或種子貿易過程中，需要較快地知道種子的生活力，採用萌發實驗就無法滿足這些要求。另外，處在休眠狀態下的種子雖然不能萌發，但仍然具有生活力，顯然，採用萌發實驗是無法測定休眠種子的生活力的。而採用以下的化學方法，可以較快地測定種子的生活力。一、 TTC 法【實驗原理】 德國的 G. Lakon 發明的 TTC 法，簡單實用，其原理是：有生活力的種子能夠進行呼吸代謝，在呼吸代謝途徑中由脫氫酶催化所脫下來的氫可以將無色的 2 ， 3 ， 5 - 三苯基氯化四唑（ 2 ， 3 ， 5 - triphenyl tetrazolium chloride 簡稱為 TTC ）還原為紅色、 不溶性 的甲月替，而且種子的生活力越強，代謝活動越旺盛，被染成紅色的程度越深。死亡的種子由於沒有呼吸作用，因而不會將 TTC 還原為紅色。 種胚生活力衰退或部分喪失生活力，則染色較淺或局部被染色。 因此，可以根據種胚染色的部位以及染色的深淺程度來判定種子的生活力。 【實驗材料】 綠豆、水稻、小麥、玉米 、油菜 或其它植物種子。 【儀器設備】 恆溫箱、小白瓷碗、鑷子、刀片、小燒杯 。 【試劑葯品】 0.5% TTC 溶液：稱取 0.5 g TTC 放入小燒杯中，先加少許乙醇溶解後，再用蒸餾水稀釋定容至 100 mL 。 TTC 溶液最好隨用隨配，不宜久藏。溶液應遮光貯藏。若已變為紅色，則不能繼續使用。 【實驗步驟】 �6�1 浸種：將待測種子用溫水（ 30 ℃ ~35 ℃）浸泡 2 － 6 h ，使種子充分吸脹。 �6�1 顯色：隨機取吸漲種子 100 粒，小心剝去種皮或外殼，務必不要傷害種胚。然後將處理好的種子置於 小白瓷碗中，加入 0.5% TTC 溶液，以浸沒種子為度，於恆溫箱（ 30 ℃ ~35 ℃）中保溫 0.5~1 h 。另取 100 粒吸漲種子，於沸水中煮 5 min 後，再加入 0.5%TTC 溶液染色。 �6�1 統計：染色結束後要立即進行鑒定，因放置太久會褪色。倒出 TT C 溶液，再用清水將種子沖洗 l~2 次，觀察種胚被染色的情況。凡種胚全部或大部分被染成紅色的即為具有生活力的種子，種胚不被染色的為死種子。如果種胚中非關鍵性部位（如子葉的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都屬於不能正常發芽的種子。根據上述標准鑒定煮沸和未煮沸種子的生活力。二、染料染色法【實驗原理】 生活細胞的原生質膜具有半透性（選擇透性），能選擇性地吸收外界（有用）物質，而死亡的細胞則喪失了這一能力。一般染料不是細胞生活所需要的物質，因而不能進入生活細胞內。根據這一原理，人們可以利用染料染色法來鑒定種子的生活力：有生活力的種子，胚部細胞不讓染料進入，因而不被染色；而喪失生活力的種子，其胚部細胞原生質膜喪失了選擇透性，染料可自由進入細胞內，從而使胚部染色。因此，可根據種胚是否被染色來判斷種子的生活力。 【實驗材料】 水稻、玉米、大豆、棉花、小麥或一些樹木種子。 【儀器設備】 小燒杯，刀片，鑷子。 【試劑葯品】 0.02 ％ ~ 0.2 ％ 靛紅溶液或 5 ％紅墨水（酸性大紅 G ）。 【實驗步驟】 同 TTC 法。 【注意事項】 �6�1 染料的濃度要適當，染色時間也不能太長（如用紅墨水染色，只需 5~10 min 即可），否則不易區別染色與否。 �6�1 染料染色法測定種子生活力，以靛紅染色法應用較廣，它適用於禾穀類、豆類、麻類、瓜類、十字花科、棉花、果樹、喬灌木種子生活力的測定。三、碘化鉀反應法【實驗原理】 某些種子（松屬、雲杉屬和落葉松屬）在發芽過程中，胚內會形成和積累澱粉。澱粉在碘試劑作用下產生藍色反應，從而可根據胚中產生藍色反應的程度來判斷種子的生活力。 【實驗材料】 雲杉、松和落葉松的種子。 【儀器設備】 玻璃板 ，培養皿，濾紙，其餘用品同 TTC 法。 【試劑葯品】 碘一碘化鉀溶液：把 1.3g 碘化鉀溶解在水中，再加入 0.3g 結晶碘，然後定容至 100 mL 。 【實驗步驟】 �6�1 將種子在水中浸泡 18 h 。 �6�1 取出放在墊有濕濾紙的培養皿內，將培養皿置於 30 ℃恆溫箱中。松和雲杉種子放 48 h ，落葉松放 72 h 。 �6�1 用刀片把胚部切下，然後浸入碘一碘化鉀溶液中 20 － 30 min 後，取出胚用水沖洗 12 min ，然後在墊有白紙的玻璃板上進行觀察。 �6�1 鑒別種子生活力的標準是：有生活力種子的胚部全部染成不同程度的黑色至灰色，或者胚根部呈褐色，子葉為黃色。無生活力種子的胚部全部染成黃色，或子葉呈灰色或黑色，胚根呈黃色，或胚根末端呈黑色或灰色，而其他部分呈黃色。 �6�1 此法適於松屬、雲杉屬和落葉松屬種子生活力的測定。 四、熒光法【實驗原理】 植物種子中常含有一些能夠在紫外線照射下產生熒光的物質，如某些黃酮類、香豆素類、酚類物質等。在種子衰老過程中，這些熒光物質的結構和成分往往發生變化，因而熒光的顏色也相應地有所改變； 有些 種子在衰老死亡過程中，內含熒光物質的結構和成分雖然沒有改變，但由於生活力衰退，細胞的原生質透性增加，當浸泡種子時，細胞內的熒光物質很容易外滲。因此，可以根據前一種情況直接觀察種胚熒光的顏色，或根據後一種情況觀察熒光物質滲出的多少來鑒定種子的生活力。 【實驗材料】 待測的植物種子， 【儀器設備】 紫外光燈，白紙（不產生熒光的），刀片，鑷子，培養皿，燒杯。 【實驗步驟】 �6�1 直接觀察法 該法適用於禾穀類、松柏類及某些薔薇科果樹種子生活力的鑒定，但種間的差異較大。 用刀片沿種子的中心線將種子切為兩半，使其切面向上放在無熒光的白紙上，置於紫外光燈下照射並進行觀察、記載。有生活力的種子在紫外光的照射下將產生明亮的藍色、藍紫色或藍綠色的熒光；喪失生活力的死種子在紫外光照射下多呈黃色、褐色以至暗淡無光，並帶有多種斑點。 隨機選取 20 粒待測種子，按上述方法進行觀察並記載有生活力及喪失生活力的種子的數目，然後計算有生活力種子所佔百分數。與此同時也作一平行的常規發芽試驗，計算其發芽率作為對照。 �6�1 紙上熒光 隨機選取 50 粒完整無損的種子，置燒杯內加蒸餾水浸泡 10 ~ 15 min 令種子吸脹，然後將種子瀝干，再按 0.5 cm 的距離擺放在濕濾紙上（濾紙上水分不宜過多，防止熒光物質疏散），以培養皿覆蓋靜置數小時後將濾紙（或連同上面擺放的種子）風干（或用電吹風吹乾）。置紫外光燈下照射，可以看到擺過死種子的周圍有一圈明亮的熒光團，而具有生活力的種子周圍則無此現象。根據濾紙上顯現的熒光團的數目就可以測出喪失生活力的種子的數量，並由此計算出有生活力種子所佔的百分率。此外，可與此同時作一平行的常規種子萌發試驗，計算其發芽率作為對照。 這個方法應用於白菜、蘿卜等十字花科植物種子生活力的鑒定效果很好。但對於一些在衰老、死亡後減弱或失去熒光的種子便不適用此法，因此，對它們只宜採用直接觀察法。 【思考題】 TTC 法、染料染色法、碘化鉀反應法和熒光法快速測定種子生活力的理論依據是什麼？各種方法在實驗操作中應注意些什麼？

C. 紅墨水法和TTC法測定種子活力有什麼不同

TTC染的是活細胞，紅墨水染的是死細胞。

TTC法：凡有生命活力的種子胚部，在呼吸作用過程中都有氧化還原反應，而無生命活力的種胚則無此反應。當TTC滲入種胚的活細胞內並被還原時，便由無色的TTC變為紅色的TTF。

紅墨水法：凡生活細胞的原生質膜具有選擇性吸收物質的能力，而死的種胚細胞原生質膜喪失這種能力，於是染料便能進入死細胞而染色。

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TTC法的原里：

凡有生活力的種子胚部在呼吸作用過程中都有氧化還原反應，而無生活力的種胚則無此反應。

當TTC溶液滲入種胚的活細胞內，並作為氫受體被脫氫輔酶（NADH或NADPH）還原時，可產生紅色的三苯基甲（TTF），胚便染成紅色。

當種胚生活力下降時，呼吸作用明顯減弱，脫氫酶的活性亦大大下降，胚的顏色變化不明顯，故可由染色的程度推知種子的生活力強弱。TTC還原反應如下：TTC（無色），TTF（紅色）。

D. 紅四氮唑法是怎樣測定種子生活力的

紅四氮唑法：又名TTC法，為目前國際上公認的較好的測定種子生活力的方法，其原理為氧化態的無色的氯化三苯基四氮唑接受了活種子呼吸過程中脫氫酶產生的氫，而變成紅色的還原態物質。有生活力的種子其脫氫酶的活性往往高，四唑接受氫離子還原為紅色，而死組織不著色，故根據染色部位及染色深淺可以判斷種子的生活力。

紅四氮唑為白色或淡黃色的有毒粉末，宜放在暗處低溫下保存。用蒸餾水配成0.1%～1%濃度的溶液，用稀鹼調pH至中性（如用0.05～0.1摩爾/升，pH7.5的磷酸緩沖液配製，調pH至6.8～7.2，效果更好）。用棕色瓶放冰箱中保存備用。

供試種子先浸泡16～24小時，然後沿種脊小心地將種子切成兩瓣，放燒杯或培養皿內，切面朝下，滴入四唑溶液浸沒剖面，放25～30C溫箱內經8～24小時後取出沖洗凈，觀察染色反應，溫度越高，染色越快。如放在室溫下需遮光，因四唑溶液對光敏感。有生活力的種子胚染成紅色，無生活力種子則不染色或僅有淺紅斑點。

E. ttc法快速測定種子生命力的理論依據是什麼

氯化三苯四氮唑法。
凡有生命活力的種子胚部，在呼吸作用過程中都有氧化還原反應，而無生命活力的種胚則無此反應。
TTC的氧化態是無色的，可被氫還原成不溶性的紅色三苯甲月替（TTF）。

F. 種子檢驗的原理

1.剝胚或切割種子的快速發芽法

凡具有生活力的種胚（包括休眠種子）一旦解除束縛（指種皮或果皮）後，消除透水、氣體交換或機械障礙，在合適的溫度與濕度及光暗條件下短期內迅速萌發。方法是剝取胚體置吸水紙上催芽，或切割子葉或胚乳後進行胚體培育。

2.依據酶活性測定生活力

以各種指示劑的變色來標志種子中酶活性和呼吸代謝。以TTC法最常用，此外尚有中性紅、甲基藍及麝香溴酚藍等方法。

TTC法已列入國際種子檢驗協會（ISTA）的規程中，此法系利用2，3，5-三苯基氯化四唑（又稱四唑，2，3，5-triphenyltetrazoliumchloride簡稱TTC）的顏色變化原理來准確鑒定種子的生活力。四唑為無色或淡黃色水溶性結晶，它被還原時變成紅色的不溶性的三苯甲（左：月右：朁）種子的生活力不同，胚被染成紅色的程度也不同，著色的部位及顏色的深淺表示種子生活力高低的程度，死種子一般染不上色。

3.依據種子化學成分變化測定生活力

簡便實用的是直接熒光法，把種子切成兩半，取其中一半放在紫外線熒光燈照射下不產生熒光的白紙上面進行觀察，一般凡具有發芽力的種子，在紫外線下產生明亮的藍色、藍紫色、紫色或藍綠色的熒光，而死的種子多半是黃色、褐色以至暗淡無光，並帶有各種斑點。

4.根據細胞膜的透性來測定生活力

種子細胞膜的完整性與其活力、生活力的關系十分密切，具體應用到生活力的速測上主要有以下幾種方法：

（1）紙上熒光團法紙上熒光團法主要用於十字花科或其它小粒的種子上，是根據死種子細胞膜透性增大，在吸脹時具有熒光特性的有機物從細胞排出，在種子周圍的紙上產生明顯的熒光團的原理來檢測種子生活力的。

（2）軟X射線輻射照相法此法主要用於種子的飽滿度、空殼率、潛伏害蟲以及生活力的快速測定上，其最大優點在於：一是經過造影的種子，仍可保存或供播種用；二是可以同時檢測幾個項目，如蟲害、空殼率、胚成熟度及生活力等；三是不受種子休眠期的影響。

此法的原理是基於老化劣變種子的細胞膜失去半透性，用重金屬鹽類如BaCl2、BaSO4等作為照相襯比劑處理後，受損傷的細胞能吸收襯比劑，在軟X射線下照相可顯示出不同程度深淺陰影，以便鑒別出種子劣變或損傷的程度。

（3）紅墨水染色法此法經濟而簡便，是國內首創的一種染色法，其原理如上述。凡胚部深紅或粉紅或有密集的散狀紅斑者都是喪失發芽力的種子；胚部不著色者為高活力種子；而帶有不同程度的淺斑塊者分屬低活力或中活力種子。

為了精確地了解種子的播種品質，種子活力的測定是很有必要的，除上述的生活力速測法基本上適應於活力測定外，還有下列一些已列入ISTA和AOSA（美國官方種子協會）《活力測定手冊》的9種方法：抗冷測定法、加速老化法、四唑圖形法、電導法、幼苗分級法、Hiltner磚礫法、幼苗生長勢測定法、冷發芽法、幼根生長斜板法等，在此不作具體介紹。

G. 檢測種子活力常用的方法

常用方法是TTC染色法。

TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復合物，1894年首次合成用來檢測種子的生存能力。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結構酶系統的質子受體，與正常組織中的琥珀酸脫氫酶反應而呈紅色，而活力低的組織內琥珀酸脫氫酶活性下降，不能反應，故不會產生變化呈蒼白。

檢測方法也非常簡單，只需把種子剖開，用常規濃度為2％的TTC溶液染色15～30min，若呈紅色證明種子活力良好，如果有部位沒有變紅證明已經死亡。