『壹』 微生物計數方法有哪些
測定微生物細胞數目的方法有很多，介紹幾種
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數，並求出每個小格所含細菌的平均數，再以此為依據，估算總菌數。
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。
②對壓在小方格界線上的細菌，應當取平均值計數。
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落，來源於樣品稀釋液中的一個活菌。
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，原因是當兩個活多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
④此法若不培養成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上，經固定染色後在顯微鏡下計數，這樣又稱塗片計數法。染色可用台盼藍，台盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數死細胞和活細胞。
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數。
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數。例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸桿菌的數目。
此法也是統計樣品中活菌的數目。
4.比濁法
原理是在一定范圍內，菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可藉助與分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內，否則不準確。
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外，顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法。」這里說的顯微鏡直接計數，我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數。再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況。
另外，微生物計數法發展迅速，多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目。
『貳』 高中常用的細胞計數法有哪幾種分別適用於哪種情況
細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板(血球計數板)進行。即可用於分離(散)細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,也可用於對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。 1、 制備細胞懸液 對於懸液培養的細胞,可直接進行下面的步驟2(計數與計算過程)。如果計數對象為貼壁生長的細胞,首先需將培養物制備成細胞懸液。 (1) 終止培養,將培養液吸出,用PBS洗培養物一次。 (2) 給培養瓶內加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,於37℃消化3～5min 。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時,棄消化液。 (3) 加入一定量的培養液(如果這些培養細胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細胞脫壁而製成細胞懸液。 2、計數與計算過程 ( 1) 在細胞計數板中央放置計數專用的蓋玻片。 (2) 用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹糟處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿為止。 (3) 置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對於壓線的細胞只計數在上線和左線者,對於細胞團按單個細胞計數。 (4) 按下式計數細胞懸液的密度：細胞密度＝(4個大格細胞總數/4)×104個/ml 注意事項： (1) 務必使分散成單個細胞,取樣計數前,充分混勻細胞懸液。 (2) 顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數<200個/10mm2或>500個/10 mm2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。
『叄』 血細胞怎麼做計數實驗
實驗
目的原理 了解血細胞計數的原理並掌握紅細胞、白細胞、血小板計數的方法，紅細胞計數結果結合血紅蛋白值還可以計算出紅細胞平均血紅蛋白量(MCH)可作為生理機能檢查和臨床診斷的指標。用相應的稀釋液將血液稀釋若干倍(另有抗凝、固定、著色作用)，置於計數室中，在顯微鏡下計數一定容積內的血細胞數。 稀釋血液有血細胞吸管法和試管法，本實驗採用後者。
實驗對象與用品 雞或家兔。血細胞計數板、專用蓋玻片、吸血管、顯微鏡、手撳計數機、血細胞稀釋液、拭鏡紙、毛筆。
方法步驟
(一)熟悉計數室
血細胞計數板系一長方形厚玻片，常用的改良牛氏(Improved-Neubauer) 計數板在中央橫溝的兩邊各有一計數室，兩計數室結構完全相同。計數室較兩邊的蓋玻片支柱低0.1毫米。因此，放上蓋玻片時，計數板與其間距即計數室空間的高為0.1毫米(圖8-1)。在低倍顯微鏡下可見計數室被雙線劃分成９個邊長為１毫米的大方格。四角的大方格又各分為１６個中方格，這是用來計數白細胞的。中央大方格被劃分為２５個中方格，每一中方格又劃分成１６個小方格(圖8－2稱２５×１６，也有的計數板為１６×２５的，小方格面積一致)。中央大方格的四角及中心５個中方格(１６×２５者則為四角上的中方格)為紅細胞或血小板計數范圍。
(二)紅細胞計數
先用試管稀釋法制備禽類血細胞懸液：將禽類紅細胞稀釋液Ⅰ、Ⅱ分別置水浴鍋中預熱到４１～４２℃，取Ⅰ液１mL於試管中，用吸血管加入新鮮雞血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混勻，置該水浴鍋中保溫５０s左右，置室溫，即為待檢的血細胞懸液。可用於充液計數。取干潔的計數板，置於水平的顯微鏡載物台上，蓋上蓋玻片，使兩側各空出少許。搖勻血細胞懸液，用滴管吸取，將滴管尖輕輕置於蓋玻片邊緣外，讓滴出的血細胞懸液憑毛細管作用吸入計數室內，剛好充滿計數室為宜(圖8－3)。靜置２min後計數，先用低倍鏡觀察，不均勻則拋棄。計數時用虹彩、集光器、反光鏡等調節入射光角度和強度，認清 計數室位置。採用「由上至下，由左至右，順序如弓」的順序，對壓邊線細胞採取「數上不數下，數左不數右」的原則(圖8～4)。依次計數並記錄５個中方格中分別有多少個紅細胞。
(三)血小板計數
採取血液並立即與抗凝劑混合(由於血小板具有趨向於凝集和粘附於異物表面的特性)。以血小板稀釋液(１０％EDTANa2 １０mL與０.８％NaCl９０mL組成)將血液稀釋２００倍，混勻後滴入血細胞計數室內，靜置１５min，待血小板下沉後。於高倍鏡下計數(同紅細胞 計數)。在高倍鏡下血小板呈橢圓形、圓形或不規則的折光小體分布於紅細胞間，注意與雜質相區別。也可用復方尿素稀釋液稀釋血液，應靜置２０min以上，待紅細胞充分溶解後再充液計數。
(四)計算
按計數室構造及血液稀釋倍數,將血細胞計數結果換算成每立方毫米中血細胞的個數。以每１００mL血液中的血紅蛋白量（g）乘以１０再除以紅細胞數（106/mm3）得紅細胞平均血紅蛋白量（MCN，單位μμg）。
(五)儀器洗滌
計數板、蓋玻片和測定管用清水沖洗，再用綢布或細布沾干。
要求與思考題
１.計算結果，報告中簡要說明計算過程。求出本組同學測定的均值並評價之。
２.了解各類稀釋液成分，分析各物質的作用。
注意事項
１.充液前應充分混勻血細胞懸液，充液要連續、適量，充液後應待血細胞下沉後再計
數。
２.計數板、蓋玻片、吸血管及測定管等用過後必須立即按要求洗滌干凈。
組織建議 將相同類型的計數板集中在一個組內，便於指導。本實驗屬於基本操作，各位朋友均應獨立操作得出結果。
附註：
1.本法可同時計數禽類白細胞數，計算方法也類似。
2.禽類血細胞稀釋液為：
Ⅰ液
中性紅 25.0mg
NaCl 0.9g
加蒸餾水至100.0mL
Ⅱ液
結晶紫 12.0mg
檸檬酸鈉 3.8g
福爾馬林 0.8mL
加蒸餾水至100.0mL
3.哺乳類紅細胞稀釋液可用生理鹽水或阿揚(Hayem)氏液(NaCl 1g，Na2SO4·10H2O 5g，HgCl2 0.5，加蒸餾水至200mL過濾)。白細胞稀釋液成分為冰醋酸0.1mL，1%龍膽紫1mL加蒸餾水至100mL，或直接用2%醋酸溶液。
4.血小板復方尿素稀釋液配方為：尿素10g，檸檬酸鈉0.5g，甲醛0.1mL，加蒸餾水到100mL，混合，待完全溶解後過濾。置冰箱內可保存1～2周。
『肆』 如何對活細胞進行計數
用台盼藍拒染法計數活細胞:
1. 徹底混合細胞懸液,取100礚樣本至一支試管中.
2. 台盼藍染色有兩種方法.一是首先用細胞培養液稀釋細胞樣本,然後用台盼藍溶液(產品號 #07050) 1/2稀釋樣本（細胞和台盼藍的稀釋比為1:1）.或者直接用台盼藍溶液稀釋樣本.
例如：1/40稀釋樣本
加入50礚 細胞懸液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀釋),混合,然後取100礚稀釋的細胞懸液加入100礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40).或取20礚細胞懸液加入780礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40).
3. 渦懸振盪,混合稀釋的細胞樣本.
4. 血細胞計數器的准備：首先用酒精清潔其小室和蓋玻片,然後用脫脂綿擦乾.
5. 仔細的將蓋玻片覆蓋兩個小室.
6. 用微量移液器或毛細管吸取稀釋的樣本.
7. 用微量移液器或毛細管將樣本充滿兩個小室.不要過滿或不足.
8. 計數4個大方格中細胞核的總數(1x1x0.1mm)或>100個細胞.分別死細胞和活細胞.死細胞染成藍色的死細胞(因為細胞完整性破壞,細胞吸收台盼藍),活細胞透明有折光（未染色）.
9. 活細胞計數按以下方法計算：
每個方格中活細胞總數平均值x稀釋倍數x104= 活細胞數/mL
『伍』 普通實驗室最常用的細胞計數的方法是什麼
細胞計數就是從需要計數的細胞懸液中取一定量細胞進行計數,並通過計數得知原始細胞懸液中的細胞密度以及細胞總和數.在細胞計數時,若細胞濃度太高,可進行必要的稀釋.常用的細胞計數有細胞電子記數儀計數法和細胞板計數法,但電子計數儀記數法在許多實驗室尚未完全推廣, 細胞板計數法仍是實驗室目前常用的方法.
1. 制備雞紅細胞懸液:取50ml小燒杯一隻,以一份雞血加十份0.17mol/L氯
化鈉溶液稀釋,形成一種不透明的紅色液體,此為雞紅血細胞懸液.懸液制備後應輕輕反復吹打, 使細胞充分分散.
2. 准備記數板:用酒精清潔雞血細胞懸液及專用蓋玻片,再用綢布擦凈.
3. 加樣: 細胞記數板蓋上專用蓋玻片,用無菌細口吸管吸取一滴雞血細胞懸
液,從記數板上蓋玻片的邊緣一側緩緩滴入,使之充滿記數板和蓋玻片之間的的空隙中,注意:加樣量不要過多溢出蓋玻片,也不要過少或帶有氣泡.不理想時要重新加樣,否則會影響細胞計數結果.
4. 計數:稍候片刻,將計數板放在低倍鏡下觀察計數.計算出計數板的四角大方格(每個大方格又分16個小方格)內的細胞數.計數時,只計數完整的細胞,若聚成一團的細胞 則按一個細胞計數.在一個大方格中,如果有細胞位於線上,一般計上限細胞不計下限細胞,計左線細胞不計右線細胞.
5. 計算:計完數後,需換算出每mol懸液中的細胞數.由於計數板中每一方格的面積為0.1cm2 ,高為0.01cm,這樣它的體積為0.0001cm3 即0.1mm 3 .由於1ml=1000 mm 3 ,所以每一大方格內細胞數×104=細胞數/ ml,故可按下式計算:
細胞懸液細胞數/ ml=4個大方格總數/4×104. 如計算前已稀釋,可再乘稀釋倍數.
『陸』 到底怎樣計數細胞呢稀釋倍數怎麼算
一般來說，細胞的計數方法是：細胞數/mL=4個大格細胞總數/4×10000×稀釋倍
數
操作步驟：
1.取10ul細胞懸液與10ul台盼蘭混合均勻於1.5ml離心管中。
2.蓋上蓋玻片，取10ul混合液自血球計數盤上方加入，於10倍生物顯微鏡下觀察，活細胞不染色，死細胞被染成藍色。
3.分別計數四個大方格，得到細胞總數，再除以4，乘以稀釋倍數（本實驗為2），最後乘以104，即為每ml細胞懸液中細胞數。若細胞位於線上，只計上線與左線（計上不計下，計左不計右）。
註：
1.細胞數/ml＝4大格細胞總數×稀釋倍數×104/4；每一大格的體積為＝0.1cm×0.1cm×0.01cm＝10-4ml
2.計數板計數時，最適細胞濃度為5～10×105個/ml，此范圍外計數誤差偏大。
3.高濃度細胞懸液，可取出部分作稀釋或連續稀釋後計數。
例
活細胞數/方格：55，62，49，59；死細胞數/方格：5，3，4，6；細胞總數＝243
平均細胞數/方格＝60.75；稀釋倍數＝2；
細胞數/ml：60.75×104×2＝1.22×106；
細胞數/flask（10ml）：1.22×106×10ml＝12.2×106
存活率：225/243﹦92.6%