平板劃線方法和步驟

㈠ 平板劃線法步驟圖示

在每次劃線前後都要對接種環進行滅菌，因此按照圖中劃線順序（1→2→3→4→5），整個劃線過程中需要對接種環進行灼燒的次數為6次．
故選：D．

㈡ 培養基倒平板培養後怎樣劃線分離

平板劃線法分離菌種實驗步驟

1、融化培養基

將裝有伊紅美藍瓊脂培養基的三角瓶放入熱水浴中加熱至沸，直至充分融化。

2、倒平板

待培養基冷卻至50℃左右後，按無菌操作法倒平板(每皿約倒15ml)，平置，待凝。

操作方法：右手持盛培養基的三角瓶置火焰旁邊，用右手手掌和小指將瓶塞輕輕地撥出，瓶口保持對著火焰；然後左手拿培養皿並將皿蓋在火焰附近打開一條稍大於瓶口的縫隙，迅速倒入培養基約15ml，加蓋後輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布在培養皿底部，然後平置於桌面上，待凝後即為平板。

3、作分區標志（操作熟練後此步驟可省略） 在皿底用記號劃分成4個不同面積的區域，使A<B<C<D，且各區的夾角應為120°左右，以便使D區與A區所劃出的線條相平行、美觀。

4、劃線操作

1)挑取菌樣：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量含菌試樣。

2)先劃A區：將平板倒置於酒精燈火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直於桌面，並讓平板面向火焰。右手持含菌的接種環，先在A區輕巧地劃3~4條連續的平行線當作初步稀釋的菌源。燒去接種環上的殘余菌樣。

3)劃其餘區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉至劃線位置，把接種環通過A區(菌源區)而移至B區，隨即在B區輕巧地劃上6~7條緻密的平行線，接著再以同樣的操作在C區和D區劃上更多的平行線，並使D區的線條與A區平行(但不能與A區或B區的線條接觸！)，最後，將左手所持皿底放回皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。

5、恆溫培養

將劃線後的平板至37℃倒置培養2~3天。

6、挑單菌落

良好的結果應在C區出現部分單菌落，而在D區出現較多獨立分布的單菌落。然後從典型的單菌落中挑取少量菌體至試管斜面，經培養後即為初步分離的純種。

7、清洗培養皿

將廢棄的帶菌平板作煮沸殺菌後進行清洗、晾乾。

㈢ 平板劃線的操作步驟

用接種環在平板培養基表面通過分區劃線而達到純化分離微生物的一種方法。是將微生物樣品在固體培養基表面多次作「由點到線」稀釋而達到分離的目的。用於目的微生物的分離。 記得先要滅菌處理，在無菌環境下接種。每次接種完後要灼燒接種環以去處菌種，再在上一次劃線的末端繼續劃線。

㈣ ]常見的平板劃線法有

常見的平板劃線法有如下。
1、連續劃線分離法：此法主要用於雜菌不多的標本。用接種環取標本少許，於平板1/5處密集塗布，然後來回作曲線連續劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。
2、分區劃線分離法：本法適用於雜菌量較多的標本。先將標本均勻塗布於平板表面邊緣一小區(第一區)內，約占平板1/5面積，再在二、三、……區依次連續劃線。每劃完一個區，均將接種環滅菌一次。

㈤ 一般工件的劃線方法、步驟

(一)劃線准備工作

劃線的質量將直接影響工件的加工質量。要保證劃線質量,就必須做好劃線前有關准備工作。

1)清理工件,對鑄、鍛毛坯件,應將型砂、毛刺、氧化皮除掉,並用鋼絲刷刷凈,對已生銹的半成品將浮銹刷掉。

2)分析圖樣,了解工件的加工部位和要求,選擇好劃線基準。

3)在工件劃線部位,按工件不同材料塗上合適的塗料。

4)擦乾凈劃線平板,准備好劃線工具。

(二)常用的基本劃線步驟

1)仔細分析圖紙,明確工件及其劃線各有關部分在機械中的作用和要求,了解加工工藝。

2)選擇劃線基準。

3)清理並檢查工件,去除毛刺、飛邊、泥沙、油污等。

4)工件塗色。

5)劃線。

6)仔細檢查劃線是否正確,有無漏劃。

7)在線條上輕輕沖眼。

㈥ 生物中接種方法→平板劃線法要注意什麼

（1）要注意全程無菌操作；

（2）滑動時用力要均勻，切勿將接種環嵌入培養基內；

（3）平板應較硬、較厚、表面乾燥；

（4）需要分區的時候，劃完一個區後必須燒去接種環上的殘菌，待冷卻後再劃另一個區；

（5）劃線的線條宜平行、密集、整齊。

接種是食用菌生產中的關鍵環節之一，如果接種技術不過關，即會造成雜菌污染，成活率低而前功盡棄。無論是菌種分離、傳代還是擴繁，都要在無菌條件下嚴格按照無菌操作規程進行。

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常用的接種方法

1、三點接種

在研究黴菌形態時常用此法。此法是把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落後，來觀察、研究它們的形態。除三點外，也有一點或多點進行接種的。

2、穿刺接種

在保藏厭氧菌種或研究微生物的動力時常採用此法。做穿刺接種時，用的接種工具是接種針，用的培養基一般是半固體培養基。用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠生長。

3、澆混接種

將待接的微生物和45℃左右的固體培養基進行混合，這樣菌液就達到稀釋的目的，待平板凝固之後，置合適溫度下培養，就可長出單個的微生物菌落。

4、塗布接種

將菌液倒入凝固的平板上面，用塗布棒在表面作來回左右的塗布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落

5、注射接種

用注射的方法將待接的微生物轉接至活的生物體內，如人或其它動物中，常見的疫苗預防接種，就是用注射接種，接入人體，來預防某些疾病。

6、活體接種

活體接種是專門用於培養病毒或其它病原微生物的一種方法，因為病毒必須接種於活的生物體內才能生長繁殖。所用的活體可以是整個動物；也可以是某個離體活組織，例如猴腎等；也可以是發育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養。

㈦ 劃線的要求、基準、步驟是什麼

1、以兩個相互垂直的平面（或直線）為基準；

2、以兩條相互垂直的中心線為基準；

3、以一個平面和一條中心線為基準。

零部件劃線下料要求如下：

（1）劃線時應做到線條清晰、均勻、數字准確，各種劃線、符號，應完整准確，各線條樣沖眼的偏差<0.5mm。

（2）劃線偏差要求受壓元件圓筒形部分的同一截面上最大直徑與最小直徑之差不應大於其公稱內徑的0.5%；鍋殼每米長度內的直線度不應大於1.5mm，全長直線度不應大於7mm；鍋殼總長度偏差范圍為±15mm。根據以上要求確定，根據筒節直徑算出的展開料的兩對角線劃線偏差、周長劃線偏差。

型鋼下料(包括管、板材的下料)

（1）內外彎曲的角鋼、槽鋼，按展開公式加裝夾、加工餘量。

（2）拼接或對接後，必須進行平面校正，達到圖紙、工藝要求。

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劃線工具使用方法

1、平台。一般由鑄鐵製成。工作表面經過精刨或刮削，也可採用精磨加工而成。較大的劃線平板由多塊組成，適用於大型工件劃線。它的工作表面應保持水平並具有較好的平面度，是劃線或檢測的基準。

2、方箱。一般由鑄鐵製成，各表面均經刨削及精刮加工，六面成直角，工件夾到方箱的V形槽中，能迅速地劃出三個方向的垂線。

3、劃規。劃規由工具鋼或不銹鋼製成，兩腳尖端淬硬，或在兩腳尖端焊上一段硬質合金，使之耐磨。可以量取的尺寸定角度、劃分線段、劃圓、劃圓弧線、測量兩點間距離等。

4、劃針。一般由4～6mm彈簧鋼絲或高速鋼製成，尖端淬硬，或在尖端焊接上硬質合金。劃針是用來在被劃線的工件表面沿著鋼板尺、直尺、角尺或樣板進行劃線的工具，有直劃針和彎頭劃針之分

5、樣沖。用於在已劃好的線上沖眼，以保證劃線標記、尺寸界限及確定中心。樣沖一般由工具鋼製成，尖梢部位淬硬，也可以由較小直徑的報廢鉸刀、多刃銑刀改制而成。

㈧ 連續劃線法操作步驟

連續劃線法步驟：從平板邊緣一點開始，連續作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環上的菌。接種環於酒精燈外焰燒至紅透，接種棒也要充分灼燒，最後再集中燒接種環至紅。

1、輕輕搖勻待接種試管，左手手心托待接種試管底側部，右手執接種環，右手小指拔下試管塞，於酒精燈附近將接種環伸進試管，稍候，再插入待接接種液中，蘸一下，取滿一環，抽出、燒塞、蓋蓋、放回試管架。

或將接種環通過稍打開皿蓋的縫隙伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環冷卻，然後以無菌操作接種環直接取平板上待分離純化的菌落。

2、靠近酒精燈處打開平皿蓋約30°，右手將環伸進平皿，將菌種點種在平板邊緣一處，輕輕塗布於瓊脂培養基邊緣，抽出接種環，蓋上平皿蓋，然後將接種環上多餘的培養液在火焰中灼燒，打開平皿蓋約30°伸入接種環。

3、待接種環冷卻後，再與接種液處輕輕接觸，開始在平板表面輕巧滑動劃線，接種環不要嵌入培養基內劃破培養基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前後兩條線重疊，劃線完畢，關上皿蓋。灼燒接種環，待冷卻後放置接種架上。

培養皿倒置於適溫的恆溫箱內培養（以免培養過程皿蓋冷凝水滴下，沖散已分離的菌落）。培養後在劃線平板上觀察沿劃線處長出的菌落形態，鏡檢後再接種斜面。

劃線分離主要有分區劃線法和連續劃線法兩種。

分區劃線法分離時平板分四個區，故又稱四分區劃線法。劃線時每次將平板轉動60~70°劃線，每換一次角度，應將接種環上的菌燒死後，再通過上次劃線處劃線。

其中第4區是單菌落的主要分布區，故其劃線面積應最大。為防止第4區內劃線與1、2、3區線條相接觸，應使4區線條與1區線條相平行，這樣區與區間線條夾角最好保持120°左右。

1、先將接種環沾取少量菌在平板1區劃3~5條平行線，取出接種環，左手關上皿蓋，將平板轉動60~70°，右手把接種環上多餘菌體燒死，將燒紅的接種環在平板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線的菌體為菌源，由1區向2區作第2次平行劃線。

2、第2次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60~70°，同樣依次在3、4區劃線。劃線完畢，灼燒接種環，關上皿蓋，同上法培養，在劃線區觀察單菌落。

㈨ 土壤中自身固氮菌的分離與培養怎樣劃線

土壤中自身固氮菌的分離與培養劃線方法如下：平板劃線分離法，是用接種環在平板培養基表面通過分區劃線而達到分離微生物的一種方法。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次做「由點到線」的稀釋而達到分離的目的。方法如下:步驟一，倒平板，熔化已經配製好並滅過菌的瓊脂培養基，冷卻至45℃左右倒平板。水平靜置待冷卻凝固。
步驟二，將待劃線分離的平板倒置於煤氣燈的左側，貼上標簽（或做記號），若劃線時分區沒把握，可在皿底上預先分為四個區。
步驟三，接種環燒紅滅菌，並伸入菌種試管內冷卻，挑取少量斜面菌苔。
步驟四，左手拿培養皿底，此時皿底盡量與桌面垂直，然後將接種環上的菌種先在平板的A區劃3～5條平行線，再燒掉環上剩餘的菌種。
步驟五，將燒紅的接種環在平板培養基的邊緣冷卻。然後將平板轉動一定角度（約60°），用接種環通過A區向B區做來回平行劃線；同樣，由B區向C區劃線。最後由C區向D區劃線。區與區的線條間的夾角最好成120°，這樣可使D區的線條與A區線條相平行，並可避免此兩區線條接觸。最後將平板倒放在培養皿蓋中。