真菌鏡檢查直接塗片方法與步驟

『壹』 真菌性腸炎的檢查

病原學檢查：
1.直接鏡檢標本
以10%氫氧化鉀或生理鹽水製片，高倍鏡下發現大量菌絲和孢子有診斷意義。對於雙相型真菌，僅查到孢子可能是正常帶菌。真菌性腸炎的6種常見病原多數情況下直接鏡檢即可鑒定，但孢子、菌絲和其他背景物質有時相互混淆，不易辨認。
2.染色
鏡檢常用的染色方法：①革蘭染色 適用於念珠菌，孢子、菌絲染成藍色，但著色不均。②過碘酸錫夫染色（PA5） 真菌孢子、菌絲均染成紅色。③丫啶橙染色 熒光顯微鏡下真菌孢子呈亮綠色。④吉姆薩染色和瑞特染色 適用於莢膜組織胞漿菌，染色前用甲醇固定，油鏡下菌體染成紅色，較小一端有出芽，菌體周圍有一圈莢膜樣結構，為此菌的細胞壁。通常菌體位於巨噬細胞或單核細胞內，少數位於細胞外。⑤乳酸酚棉藍染色 適用於各種真菌培養塗片，菌體染成藍色。
3.真菌培養
糞標本直接鏡檢通常不容易確定菌種，需參考糞培養結果，觀察菌落形態，再挑取菌落染色後鏡檢。常用沙保培養基和血瓊脂培養基。對於雙相型真菌還需在不同溫度下（25℃或37℃）分別培養，以便觀察其形態改變。

『貳』 試述真菌的概念及其常用的檢驗方法。

有細胞核，不含葉綠素，胞漿內有完整的細胞器，能進行有性和無性繁殖，以寄生或腐生方式生存的真核細胞型微生物稱為真菌。
目前大多數真菌的檢驗，依靠形態學鑒定，即直接塗片法檢驗。
在臨床檢驗中常見的是酵母樣菌的感染，其中以念珠菌屬、隱球菌屬、毛孢子菌屬、酵母菌屬等為多見。
酵母樣菌的檢驗方法包括直接塗片、分離培養及鑒定、動物接種和血清學試驗。如新型隱球菌和白色念珠菌的基本檢驗為尿素酶和芽管形成試驗，尿素酶陽性為新型隱球菌，有芽管形成者為白色念珠菌。

『叄』 鏡檢的直接塗片

采樣後，經過塗片、染色進行顯微鏡檢查。本法簡便、報告迅速、無須特殊葯品和器材等。一般採用最常用的革蘭（Gram）氏染色法，可報告革蘭氏陽、陰性球菌或桿菌，如能密切結合臨床資料，仍有一定診斷參考價值。
（1）咽壁塗片 疑有咽白喉時，如塗片檢出白喉棒狀桿菌對診斷意義很大。咽、喉結核有時塗片（用抗酸染色法）或可發現結核分枝桿菌。在發生壞疽性口炎時，塗片檢到梭形桿菌亦有助於診斷。
（2）鼻分泌物塗片 鼻白喉或疑為瘤型麻風伴有鼻粘膜損害時，從鼻粘膜取粘液塗片，前者可找到白喉棒狀桿菌，而後者或可發現麻風桿菌。
（3）膿液塗片 以膿液作塗片或培養，找到致病菌，有助於分析細菌的致病作用和選擇抗菌葯物。常見的化膿性細菌有葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌等。
（4）皮膚採得組織液塗片 疑似流行性腦脊髓膜炎者，在皮膚淤斑劃痕，取滲出組織液塗片，找腦膜炎奈瑟菌。高度疑似麻風病人，可選擇最活動的皮膚損害，用刀劃到真皮，刮取組織液塗片，如能查到麻風桿菌則有助診斷。
（5）胸腔、心包腔、腹腔和關節囊液塗片 在病理情況下，常可檢到致病菌，最常見的如革蘭氏陽性球菌和陰性桿菌。疑為結核性胸膜炎時，取胸水塗片或可找到結核分枝桿菌。
（6）痰塗片 如遇咯血病人，弄不清是患支氣管擴張還是肺結核時，作一痰液塗片，查找結核分枝桿菌，有鑒別診斷意義。
（7）尿沉渣塗片 可留中段尿標本，置於無菌容器內，及時檢查。在膀胱炎、腎盂腎炎等疾患時，取沉渣塗片常可見革蘭氏陽性球菌或陰性桿菌。疑是結核分枝桿菌感染對，可留24小時尿標本，取其沉渣塗片或可找到結核分枝桿菌。（8）腦脊液塗片 取腦脊液塗片鏡檢發現致病菌，對臨床診斷價值較大。常見的致病菌有腦膜炎奈瑟菌、結核分枝桿菌，革蘭氏陽性球菌或陰性桿菌以及新型隱球菌等。
（9）糞便塗片 在偽膜腸炎時，作糞便塗片，染色檢查，如發現大量革蘭氏陽性球菌，而革蘭氏陰性桿菌明顯減少或消失，可作早期診斷的參考。在腸道真菌感染時，以白色念珠菌感染最為多見，糞便塗片鏡檢可找到酵母樣芽生孢子和假菌絲。
（10）陰道分泌物塗片 若有黴菌性陰道炎時，刮取分泌物少許，塗片、染色、鏡檢找黴菌菌絲、孢子，最可靠方法是進行念珠菌培養。疑是淋病奈瑟菌所致白帶增多，應取宮頸或前庭大腺分泌物塗片、染色、鏡檢，如找到細胞內革蘭氏陰性雙球菌，很有診斷意義。

『肆』 微生物室常用的病原真菌檢查方法有哪些

您好！

1、真菌鏡檢
是最簡單也是很有價值的實驗室診斷方法。其優點在於簡便、快速，無菌部位的陽性結果可直接確定真菌感染。但是由於陽性率較低，陰性結果亦不能排除診斷。直 接鏡檢對於淺表和皮下真菌感染最有幫助。在皮膚刮屑、毛發或甲標本中發現皮膚癬菌、念珠菌和馬拉色菌的成分可提供對相應真菌病的可靠診斷。如在無菌體液的 直接鏡檢中發現真菌成分常可確立深部真菌病的診斷，例如在腦脊液中檢測到帶莢膜的新生隱球菌酵母細胞，或外周血塗片中檢測到莢膜組織胞漿菌細胞。但一般在 有菌部位則只有發現大量真菌菌絲方才有意義，通過直接鏡檢一般可以區分念珠菌、隱球菌、暗色真菌、毛霉（接合菌）等菌的感染，進一步明確鑒定菌種需要通過 培養鑒定來完成。

2、真菌培養
真菌培養是實驗室檢查中的重要環節，培養出致病真菌是進一步鑒定菌種的前提條件。真菌培養第一步是從臨床標本中培養真菌的初代培養，初代培養後進一步進行 分離純化培養和鑒定培養。不同致病真菌每一步所採用的培養基，培養時間和培養溫度存在一定的差異。常規的真菌培養需要在28-30°C溫度下培養3-4 周，一般初代培養選用沙氏培養基（SDA）或者馬鈴薯瓊脂培養基（PDA），採用試管培養，一般同時培養兩管，其中一管可添加抗生素（氯黴素或慶大黴素均 可）。在培養1周內，應該每天觀察有無真菌生長。一般培養4周後，如果無真菌生長可報陰性。發現培養出真菌，直接挑取少量菌體或者小培養後，用乳酸酚棉蘭 製成塗片顯微鏡下觀察，結合菌落大體形態，典型菌種可直接報告種屬。不典型菌種根據基本表現，採用適當的標准鑒定培養基，標准培養條件培養，必要時要結合 生理學和分子生物學方法進行鑒定。

3、真菌鑒定
對常見致病真菌要掌握的鑒定原則是首先區分酵母菌和黴菌。
如果初代培養基上培養出酵母樣菌落，在鑒定前應進行分離純化。在去除細菌和其他真菌污染，區分混合感染後，對純菌落進行鑒定。酵母菌鑒定主要根據形態學特 征和生理生化特點，按照一定的流程進行。首先根據菌落顏色進行分類。臨床最為常見的是白色或奶白色菌落，這類菌進一步做芽管試驗，若芽管試驗是陽性則為白 念珠菌，若陰性則通過Vitek YBC或API20C及玉米吐溫瓊脂上培養的形態特徵來鑒定。另外，還可以應用念珠菌顯色瓊脂、尿素酶試驗等試驗來輔助鑒定。
檢驗地帶網

黴菌的鑒定非常復雜，有許多標准包括形態學特徵、溫度耐受性，放線菌酮抗性、雙相性、營養需求、蛋白分解活動以及水解尿素能力等。現代分類學鑒定方法主要 依據分生孢子的個體發生過程結合其他特徵來進行鑒定。初代培養後根據形態學特徵一般可鑒定到屬的水平，再依據不同真菌的鑒定要求，採用標准培養基和培養條 件進一步完成菌種鑒定。例如：麴黴屬鑒定時需要採用標准培養基，即察氏培養基和麥芽瓊脂，25℃培養7天後與麴黴形態鑒定檢索表對應得到正確的結果。

『伍』 植物內生真菌的鑒定方法步驟有哪些

來源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定及理化鑒定等方法。
（一）來源鑒定法
又稱基原鑒定法，是應用植（動、礦）物分類學的知識，對中葯的來源進行鑒定，確定其正確的學名，以保證應用品種准確無誤。
1．來源鑒定的內容：包括原植（動）物的科名、植（動）物名、拉丁學名、葯用部位，礦物葯的類、族、礦石名或岩石名。
2．原植物鑒定的步驟：①觀察植物形態；②核對文獻；③核對標本。
中葯的原植物鑒定，除經典分類學方法外，還可使用化學分類學、細胞分類學、數值分類學、DNA分類學方法和技術。
（二）性狀鑒定法
就是用眼看、手摸、鼻聞、口嘗、水試、火試等十分簡便的方法來鑒別葯材的外觀性狀，這些方法積累了豐富的傳統鑒別經驗，具有簡單、易行、迅速的特點。 性狀鑒定的內容包括形狀、大小、色澤、表面特徵、質地、折斷面的特徵、氣、味、水試、火試等。
1． 葯材 ：
⑴ 形狀 ：葯材的形狀與葯用部位有關，每種葯材的形狀一般比較固定。
⑵ 大小 ：指葯材的長短、粗細（直徑）和厚度。
⑶ 色澤 ：葯材的顏色與成分有關，顏色是否符合要求，是衡量葯材質量好壞的重要因素之一。一般應在自然光下觀察葯材的顏色，如用兩種色調復合描述色澤時，應以後一種色調為主色。
⑷ 表面特徵 ：指葯材表面是光滑還是粗糙，有無皺紋、皮孔、鱗片、毛茸或其它附屬物等。
⑸ 質地 ：指葯材的輕重、軟硬、堅韌、疏鬆（或泡松）、緻密、黏性、粉性、油潤、角質、綿性、柴性等特徵。
⑹ 斷面特徵：包括自然折斷面和橫切面。
⑺ 氣 ：「氣」是由於葯材含有揮發性物質的緣故，也是葯材的重要鑒定特徵之一。
⑻ 味：葯材的味感是由其所含的化學成分決定的，每種葯材的味感是比較固定的。味感也是衡量葯材品質的標准之一。
⑼ 水試 ：有些葯材放入水中，能產生特殊的現象，如沉浮、溶解情況、顏色、透明度、有無黏性、膨脹度、旋轉與否及有無熒光等。
⑽ 火試 ：有些葯材用火燒之，能產生特殊的香氣或臭氣，會有顏色、煙霧、閃光或響聲等現象出現，可據此鑒別其真偽甚至優劣。
三）顯微鑒定法
是利用顯微鏡來觀察葯材的組織構造、細胞形狀以及內含物的特徵，礦物的光學特性，以及利用顯微化學方法，確定細胞壁及細胞內含物的性質或某些品種有效成分在組織中的分布，用以鑒定葯材的真偽和純度甚至品質，以及對中成葯是否按處方規定投料進行鑒定。
1．顯微製片方法
包括有橫切片或縱切片、表面製片、粉末製片、解離組織片、花粉粒與孢子製片、磨片製片、含粉末葯材的制劑顯微製片等。
2．植物細胞壁和內含物的鑒別
3．顯微測量
目鏡測微尺先用鏡台測微尺標化，然後在顯微鏡下測量細胞及細胞內含物的大小。通常是在高倍物鏡下進行測量，但欲測量較長的纖維、非腺毛等的長度時，則在低倍物鏡下測量，記錄最大值與最小值。
4．顯微常數測定
常見的顯微常數主要有用於葉類鑒別的氣孔數、氣孔指數、柵表比、脈島數和脈端數等。這些顯微常數常因植物種類不同而異，而同種植物則較為恆定，對於葉類、某些帶葉的全草類和花類葯材的品種鑒定有重要意義。
5．常用封藏試液
⑴ 蒸餾水、稀甘油：適用於觀察澱粉粒、油滴、樹脂等細胞內含物及細胞壁的顏色。
⑵ 甘油醋酸試液：使澱粉粒不膨脹，特別適宜澱粉粒的觀察與顯微測量。
⑶ 水合氯醛試液：可使皺縮的細胞膨脹；可溶解多種色素，如葉綠素及樹脂、澱粉粒、蛋白質、菊糖、揮發油，而各種晶體不溶解；有清凈、透明作用，使細胞、組織透明，便於觀察細胞形狀和組織構造及細胞內含的各種結晶體。
6．掃描電子顯微鏡和偏光顯微鏡的應用
⑴ 掃描電子顯微鏡：解析度高，可達3nm，放大倍數一般可達幾十萬倍，圖像富有立體感。
⑵ 偏光顯微鏡：主要用於觀察和分析礦物類中葯的光學性質，也可用於研究動物和植物類中葯的組織及細胞內含物，如澱粉粒、草酸鈣簇晶等。對於透明礦物，一般使用透射光源的偏光顯微鏡；對於不透明礦物則使用放射光源的偏光顯微鏡。
（四）理化鑒定法
1．物理常數的測定
包括相對密度、旋光度、折光率、硬度、黏稠度、沸點、凝固點、熔點等的測定。這對揮發油類、油脂類、樹脂類、液體類葯（如蜂蜜等）和加工品類（如阿膠等）葯材的真實性和純度的鑒定，具有特別重要的意義。
2．一般理化鑒別
⑴ 化學定性分析：利用葯材中的化學成分能與某些試劑產生特殊的氣味、顏色、沉澱或結晶等反應來鑒別中葯的真偽。
⑵ 微量升華：利用中葯中所含的某些成分，在一定溫度下能升華的性質獲得升華物，在顯微鏡下觀察其結晶性狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應。
⑶ 熒光分析：利用中葯中所含的某些化學成分在紫外光或常光下能產生一定顏色的熒光的性質進行鑒別。紫外光燈的波長為365nm，如用短波（254～265nm）時應加以說明。
⑷ 顯微化學分析：將葯材的切片、粉末或浸出物等置於載玻片上，加某些化學試劑後產生沉澱或結晶，在顯微鏡下觀察其形狀和顏色進行鑒別。利用顯微和化學方法確定中葯有效成分在中葯組織構造中的部位，稱為顯微化學定位試驗。
⑸ 泡沫指數和溶血指數：利用皂苷的水溶液振搖後能產生持久性的泡沫和溶解紅血球的性質，可測定含皂苷類成分葯材的泡沫指數或溶血指數作為質量指標。
3．檢查
⑴ 水分測定法：2005年版《中國葯典》水分測定法有四種，即烘乾法、甲苯法、減壓乾燥法和氣相色譜法。
⑵ 灰分測定法：2005年版《中國葯典》灰分測定法包括總灰分測定法和酸不溶性灰分測定法。
⑶ 膨脹度的測定：膨脹度是葯品膨脹性質的指標，系指按乾燥品計算，每1g葯品在水或其它規定的溶劑中，在一定的時間與溫度條件下膨脹後所佔有的體積（ml）。主要用於含黏液質、膠質和半纖維素類的天然葯品。
⑷ 酸敗度：是指油脂或含油脂的種子類葯材，在貯藏過程中發生復雜的化學變化，產生游離脂肪酸、過氧化物和低分子醛、酮類分解產物，因而出現臭味，影響葯材的感觀性質和內在質量。
⑸ 色度檢查：利用比色鑒別法檢查葯材在貯藏過程中有色雜質的限量，如白術。
⑹ 有害物質的檢查：中葯中的有害物質主要有內源性的有害物質和外源性的有害物質。
①內源性的有害物質：
②外源性有害物質：
4．色譜法
⑴ 薄層色譜法：是用於定性鑒別最多的色譜法之一。
⑵ 高效液相色譜法
⑶ 氣相色譜法：適用於含揮發油及其它揮發性組分的中葯及中成葯的分析。
⑷ 蛋白電泳色譜法：用於動物葯、果實種子類及根莖類等含蛋白質及氨基酸的葯材的真偽鑒別。
⑸ 高效毛細管電泳
5．分光光度法
包括紫外－可見分光光度法、紅外分光光度法和原子吸收分光光度法。常用波長范圍為：200～400nm的紫外光區；400～760nm的可見光區；2.5～25um（按波數計為4000～400cm－1）的紅外光區。
6．色譜－光譜聯用儀分析法
7．浸出物測定
對某些中葯的有效成分尚未清楚或尚無精確定量方法的中葯，一般可根據已知成分的溶解性質選用溶劑進行浸出物的測定。通常選用水、一定濃度的乙醇（或甲醇）、乙醚作浸出物測定。有冷浸法和熱浸法。測定前供試品需粉碎，使能過二號篩。
8．含量測定
⑴ 含量測定方法：既有經典分析方法（容量法、重量法等）又有現代儀器分析法（如紫外－可見分光光度法、氣相色譜法、薄層掃描法、高效液相法等）。
⑵ 揮發油含量測定方法有兩種：①甲法適用於測定相對密度在1.0以下的揮發油；②乙法適用於測定相對密度在1.0以上的揮發油。
（五）新技術和新方法簡介
1．DNA分子遺傳標記技術
2．中葯指紋圖譜鑒定技術

『陸』 臨床微生物檢驗之病原性真菌檢驗知識

臨床微生物檢驗之病原性真菌檢驗知識

真菌是一大類不含葉綠素，無根、莖、葉，由單細胞或多細胞組成的真核細胞型微生物。大部分真菌對人類有益，能引起人類疾病的病原性真菌主要包括淺部真菌和深部真菌。下面是我為大家帶來的病原性真菌檢驗的知識，歡迎閱讀。

一、常見單細胞真菌的形態觀察

1、新型隱球菌墨汁負染色片：可見菌體呈球形，大小不一，有很厚的莢膜，包圍在菌體周圍，透明發亮，並可見發芽的菌體。

2、白色念珠菌菌體形態：用患者的棉拭子標本常法塗片，革蘭氏染色，鏡檢。顯微鏡下可見菌體呈卵圓形，較葡萄球菌大2-5倍，細胞出芽伸長而成假菌絲，在假菌絲生長點上有芽生孢子及沿假菌絲頂端生長的`大而圓的厚膜孢子。

二、皮膚絲狀菌的檢查

材料：

病人的甲屑、皮屑或毛發、10%KOH溶液、載玻片、蓋玻片、小鑷子、普通光學顯微鏡等。

方法：

1、采標本：用鈍刀在手、足、體癬損害部位邊緣輕輕刮取皮屑，甲癬可用小刀刮取病損指(趾)甲深層碎屑。

2、製片：用小鑷子取少許皮(甲)屑標本置於載玻片中央，滴1-2滴10%KOH溶液，覆加一蓋玻片，在火焰上緩慢加熱，以加速角質溶解，使標本透明，然後輕輕加壓使成薄片，驅走氣泡並吸去周圍溢液。

3、鏡檢：先用低倍鏡觀察有無真菌菌絲或孢子，再用高倍鏡觀察菌絲、孢子的特徵。鏡檢時光線應稍弱，使視野稍暗。陽性標本常可查見分支菌絲或孢子。

三、真菌的培養

材料：

菌種、沙保氏培養基、平皿、載玻片、蓋玻片。

方法：

1、一般培養：分別將新型隱球菌、白色念珠菌、絮狀表皮癬菌接種於沙保氏培養基，於22℃-28℃下培養(深部真菌可培養於37℃環境)，一周後觀察菌落特徵。真菌菌落在形態上可分為三大類：

酵母型菌落：與細菌菌落相似，圓形、白色、邊緣整齊、表面光滑濕潤。

類酵母型菌落：同酵母型菌落，圓形、較大、白色，但菌落根部有假菌絲長入培養基內。

絲狀菌落：是多細胞真菌的菌落形式。有許多疏鬆的菌絲體構成，菌落呈棉絮狀、絨毛狀或粉末狀，菌落中央有皺折，外圍有放射狀溝。其正面和背景又可顯示各種不同顏色。

2、小培養(玻片法)：在無菌平皿中先傾注10-15ml沙保葡萄糖瓊脂，待凝固後，無菌操作將瓊脂切成約0.5cm的方塊，再將瓊脂塊移放在滅菌的載玻片上，然後在小塊培養基四邊接種已分純的真菌菌種，蓋上無菌蓋玻片，移入有一定濕度的無菌平皿內，置22℃-28℃孵育。動態觀察生長過程，根據菌絲和孢子的特點鑒定真菌類別。

『柒』 陰道鏡檢查的檢查方法

陰道鏡檢查的步驟：
1、檢查前應有陰道細胞塗片檢查結果，除外陰道毛滴蟲、念珠菌、淋菌等炎症。檢查前24小時避免陰道沖洗、雙合診和性生活。
2、患者取膀胱截石位，用陰道窺器充分暴露宮頸陰道部，用棉球輕輕擦凈宮頸分泌物。為避免出血，不可用力塗擦。
3、打開照明開頭，將物鏡調至與被檢部位同一水平，調整好焦距（一般物鏡距被檢物約為20㎝），調至物像清晰為止。先在白光下用10倍低倍鏡粗略觀察被檢部位。以宮頸為例，可粗略觀察宮頸外形、顏色及血管等。
4、用3%醋酸棉球塗擦宮頸陰道部，使上皮凈化並腫脹，對病變的境界及其表面形態觀察更清楚，需長時間觀察時，每3—5分鍾應重復塗擦3%醋酸一次。精密觀察血管時應加綠色濾光鏡片，並放大20倍。最後塗以復方碘液（碘30g，碘化鉀0.6g，加蒸鎦水100ml），在碘試驗陰性區或可疑病變部位，取活檢送病理檢查。
5.必要時用綠色濾光鏡片並放大20倍觀察，可使血管圖像更清晰。
6.碘化驗 成熟鱗狀上皮細胞富含糖原，塗復方碘液（碘30克、碘化鉀0.6克，加蒸餾水至100ml），糖原與碘結合呈深棕色，稱為碘實驗陽性；柱狀上皮、未成熟化生上皮、角化上皮及不典型增生上皮不含糖原，塗碘後均不著色，稱為碘實驗陰性。觀察不著色區域的分布，在異常圖像部位或可疑病變部位取多點活檢送病理檢查。

『捌』 真菌顯微鏡觀察一般是第幾天

培養兩天左右，一般十到二十分鍾即可出結果。
1、真菌檢查，簡單來說，就是通過直接鏡檢的方法，找到菌絲和孢子，以供初步診斷一種檢查方法。常見的鏡檢方式而真菌鏡檢是指通過取樣直接鏡檢的方法，找到菌絲和孢子，以結果判斷是否有菌。常用來檢測皮膚、指甲、須發等部位的淺部真菌問題[1]。直接鏡檢，陽性表示真菌的存在，但一般不能確定菌種。陰性不能完全排除。
2、是常用來分辨皮膚是否感染真菌/細菌最快最有效的方法[2]。真菌鏡檢還可細分為2類，染色和不染色。目前染色方法中乳酸酚棉蘭染色，熒光劑染色，因操作較簡單，檢測速度較快而被廣泛使用。而不染色的則是生理鹽水，koh濕片法。
3、在醫學定義里被定義為真菌塗片檢查。這種檢測方式不僅准確率高，而且效率也高，一般十到二十分鍾即可出結果！詳細分為兩種：淺表真菌檢查和深部真菌檢查。淺表真菌檢查主要是刮取懷疑真菌感染的皮損表面的皮屑或者脫落細胞，用氫氧化鉀溶解，然後通過酒精燈加熱固定之後，通過高倍顯微鏡來觀察是否有熒光顯色。[4]這種方法常用來檢測皮膚是否受到淺層真菌感染（臨床表現為腳氣、灰指甲）關於手足淺表性真菌感染的研究可參考上述而深部真菌檢查主要是抽血化驗，可以做真菌培養，通過特殊的培養皿靜置48小時之後，再通過特殊的檢測方式判斷是否有真菌陽性。

『玖』 致病菌感染的微生物學檢查基本程序是怎麼樣的

病原微生物種類繁多，變異迅速，快速鑒定病原微生物的檢驗技術也在不斷發展前進著。目前，應用比較廣泛的病原微生物檢測方法主要有直接塗片鏡檢、分離培養、生化反應、血清學反應、核酸分子雜交、基因晶元、多聚酶鏈反應等，該文對這些檢測技術進展做一綜述。 對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體，有病毒、細菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過敏、腫瘤、痴獃等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年來出現的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強，往往造成世界性大流行，因此對病原體的檢測必須做到快速、准確。常規病原學檢測方法操作繁瑣，檢測周期長，而且對操作人員技術水平要求比較高。隨著醫學微生物學研究技術的不斷發展，病原學診斷已不再局限於病原體水平，深入到分子水平、基因水平的檢測手段不斷出現並被應用於臨床和實驗室 J。核酸分子雜交技術、PCR技術、基因晶元技術等檢測方法，自動化程度高，快速省時、無污染、結果精確，可以准確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統的病原微生物的檢測方法傳統的病原微生物學實驗室檢查以染色、培養、生化鑒定等為主，將標本直接塗片染色鏡檢和接種在培養基上進行分離培養是對細菌或真菌感染性疾病進行病原學診斷的常用方法。1．1 直接塗片鏡檢病原微生物體形體積微小，大多無色半透明狀，將其染色後可藉助顯微鏡觀察其大小、形態、排列等。直接塗片染色鏡檢簡便快速，對那些具有特殊形態的病原微生物感染仍然適用，例如淋球菌感染、結核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接塗片鏡檢不需要特殊的儀器和設備，在基層實驗室里仍然是十分重要的病原微生物檢測手段。1．2 分離培養與生化反應 分離培養主要用於臨床標本(如血液、痰、糞便等)或培養物中有多種細菌時對某一種細菌的分離。細菌的生長繁殖需要一定時間，檢測周期較長，不能同時處理批量樣本。為解決這一問題，各種自動化培養和鑒定系統不斷產生，傳統鑒定方法也在逐步改進，大大加快了檢驗速度。例如Microscan WalLCAway全自動微生物分析儀，可同時做細菌鑒定和葯敏試驗，檢驗500多個菌種。苛養菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對營養要求比較高，常規培養陽性率低。雍剛 等將不要同比例的葡萄糖、玉米澱粉、生長因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養基中製成了新型淋病奈瑟菌培養基，大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養率。蘇盛通等在營養瓊脂中加人了中葯紅棗、赤小豆培養甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌等細菌，生長指數明顯高於血平板。1．3 組織細胞培養 活組織細胞培養適於專營活組織細胞內生存的病原體，包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細胞是不一樣的，將活細胞從病原體敏感的動物組織中取出在體外進行原代培養或用病原體敏感細胞系進行傳代培養，再將病原體接種於相應的組織細胞中後，病原體可在其中繁殖增長，引起特異性的細胞病變效應。也可以將病原體直接接種於敏感動物體內，引起相應組織器官出現特異的病理學改變。往往可以根據這些特異的病變對病原體進行鑒定。2 血清學與免疫學檢測血清學檢測是通過已知的抗體或抗原來檢測病原體的抗原或抗體從而對病原體進行快速鑒定的技術，簡化了鑒定步驟，常用的方法包括血清凝集技術、乳膠凝集實驗、熒光抗體檢測技術、協同凝集試驗、酶聯免疫測試技術等。酶聯免疫技術的應用大大提高了血清學檢測的敏感性和特異性，不僅可檢測樣本中病原體抗原，也可檢測機體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國人群感染率高達50％ ～80％ ，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測唾液中抗HP抗體來診斷HP感染，其結果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國人群中感染率極高，ELISA應用於乙型肝炎病人早期血清學診斷的效果最為明顯。臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何從這些細菌中分離出目標菌是關鍵。免疫磁珠分離技術(IMBS)是近年來發展起來的在微生物檢測領域中一種新技術。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯到磁珠微球上，通過抗原抗體反應形成磁珠一目標病原體復合物或磁珠一一抗一目標病原體復合物，在外部磁場磁力的作用下，將目標病原體分離出來。目前已經開發出了針對各種病原體的免疫磁珠，如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團菌等，廣泛應用到各級科研和實驗室 。經IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測，檢測時間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測技術聯合來檢測病原菌，免疫磁珠分離得到的目標菌可繼續用於分離培養使大腸埃希菌0157最低檢測限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS結合聚合酶鏈反應(IMBS—PCR)可對培養條件比較特殊的細菌如苛養菌、厭氧菌進行快速檢測，肉類中的產毒素型產氣莢膜梭菌經IMBS．PC