配製瓊脂糖的步驟方法

Ⅰ 如何配製2%瓊脂糖溶液

0.29g NaCl + 50mL TAE + 5uL GelRed 搖床上30min，之後將其倒入裝有1g瓊脂糖（矮胖杯的）的錐形瓶中，加蓋保鮮膜，扎多些孔跑氣，微波爐中加熱至沸（以10s為單位，大約6次）後，取出搖動1分鍾，再進入加熱至沸騰，冷卻至60℃倒膠，梳子在倒膠前插好。

c（NaCl）≈ （0.2925 / 58.5）/ 0.050 = 0.1mol / L
TAE原液為50×，取1體積50×TAE + 49體積的ddH2O配製1×TAE

Ⅱ RNA的瓊脂糖凝膠電泳實驗原理和步驟

一、實驗目的

掌握植物總RNA非變性膠電泳的原理和方法。

二、實驗原理

RNA電泳可以在變性及非變性兩種條件下進行。非變性電泳使用1.0%--1.4%的凝膠，不同的RNA條帶也能分開，但無法判斷其分子量。只有在完全變性的條件下，RNA的泳動率才與分子量的對數呈線性關系。因此要測定RNA分子量時，一定要用變性凝膠。在需快速檢測所提總RNA樣品完整性時，配製普通的1% 瓊脂 糖凝膠即可。

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三、實驗材料、器具及葯品

蘑菇的總RNA溶液。 電泳儀，電泳槽，電子 天平 ， 移液器 ，槍頭，微波爐，紫外透射檢測儀等。 瓊脂糖，1XTAE電泳緩沖液，0.5μg/ml溴化乙錠（EB）10X載樣緩沖液。

四、實驗步驟

（1）用1×TAE電泳緩沖液製作瓊脂糖凝膠，加1×TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。

（2）在超凈工作台上，用移液器吸取總RNA樣品4μl於封口膜上。在 實驗台 上再加入5μl 1×TAE電泳緩沖液及1μl 的10X載樣緩沖液，混勻後，小心加入點樣孔。

（3）打開電源開關，調節電壓至100V，使RNA由負極向正極電泳，約30min後將凝膠放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射檢測儀上觀察RNA電泳結果。

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RNA的變性瓊脂糖凝膠檢測

試劑 ：

（1）MOPS緩沖液（10*）:0.4mol/L 嗎啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA 。

（2）上樣染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚藍，0.4%二甲苯藍。

（3）甲醛。

（4）去離子甲醯胺。v電泳槽清洗：去污劑洗干凈（一般浸泡過夜）——水沖洗——乙醇 乾燥 ——3%H2O2灌滿——室溫放置10分鍾——0.1%DEPC水沖洗。

操作：

（1） 將制膠用具用70%乙醇沖冼一遍，晾乾備用。

（2） 配製瓊脂糖凝膠。

①稱取0.5g瓊脂糖，置干凈的100ml 錐形瓶中，加入40ml蒸餾水，微波爐內 加熱 使瓊脂糖徹底溶化均勻。

②待膠涼至60--70 ℃，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS緩沖液和0.5ul 溴化乙錠，混合均勻。

③灌制瓊脂糖凝膠。

（3） 樣品准備：

① 取 DEPC處理過的500ul小離心管，依次加入如下試劑： 10x MOPS緩沖液2ul，甲醛3.5ul,甲醯胺（去離子）10ul，RNA 樣品 4.5ul,混勻。

② 將離心管置於60℃水浴中保10分鍾，再置冰上2分鍾。

③ 向管中加入3ul 上樣染料，混勻。

（4）上樣。

（5）電泳：電泳槽內加入1XMOPS緩沖液，於7.5V/ml 的電壓下電泳。

（6）電泳結束後，在紫外燈下檢查結果。

Ⅲ 瓊脂糖凝膠的配製

稱量、溶膠、倒膠、拔梳。
配置步驟如下：
1、稱量，小膠板0.8%的膠需要瓊脂粉0.104gTBE13mL。
2、熔膠，將所稱量的瓊脂粉與TBE在錐形瓶中混合，在微波爐內反復加熱2到3次至瓊脂粉溶解並無氣泡。
3、倒膠，干凈的膠槽內擺好梳子，往膠內滴加1uL左右核酸染料，混勻，待冷卻至不燙手，輕輕倒入膠板內。
4、拔梳待大約2分鍾即可。

Ⅳ 瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟是什麼需要注意什麼事項

一、操作步驟：

1、電泳方法

一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要解析度高的電泳，特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯醯胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應該使用脈沖凝膠電泳。

2、凝膠濃度

對於瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來進行大片段核酸的電泳，高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎，小心操作和使用質量好的瓊脂糖是解決辦法。

3、緩沖液

常用的緩沖液有TAE和TBE，而TBE比TAE有著更好的緩沖能力。電泳時使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果。

4、電壓和溫度

電泳時電場強度不應該超過20V/cm，電泳溫度應該低於30℃，對於巨大的DNA電泳，溫度應該低於15℃。

5、DNA樣品的純度和狀態

注意樣品中含鹽量太高和含雜質蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。乙醇沉澱可以去除多餘的鹽，用酚可以去除蛋白。

6、DNA的上樣

正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。注意太多的DNA上樣量可能導致DNA帶型模糊，而太小的DNA上樣量則導致帶信號弱甚至缺失。

7、Marker的選擇

DNA電泳一定要使用DNA Marker或已知大小的正對照DNA來估計DNA片段大小。Marker應該選擇在目標片段大小附近ladder較密的，這樣對目標片段大小的估計才比較准確。

8、凝膠的染色和觀察

實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙錠（EB），染色效果好，操作方便，但是穩定性差，具有毒性。注意觀察凝膠時應根據染料不同使用合適的光源和激發波長，如果激發波長不對，條帶則不易觀察，出現條帶模糊的現象。

二、注意事項：

1、巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。

2、高濃度的膠可能使分子大小相近的DNA帶不易分辨，造成條帶缺失現象。

3、電泳緩沖液多次使用後，離子強度降低，pH值上升，緩沖性能下降，可能使DNA電泳產生條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。

4、如果電泳時電壓和溫度過高，可能導致出現條帶模糊和不規則的DNA帶遷移的現象。特別是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現缺帶現象。

5、變性的DNA樣品可能導致條帶模糊和缺失，也可能出現不規則的DNA條帶遷移。在上樣前不要對DNA樣品加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止DNA變性。

6、太多的DNA上樣量可能導致DNA帶型模糊，而太小的DNA上樣量則導致帶信號弱甚至缺失。

(4)配製瓊脂糖的步驟方法擴展閱讀

瓊脂糖凝膠具有網路結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決於凈電荷的性質和數量，而且還取決於分子大小，這就大大提高了分辨能力。

但由於其孔徑相比於蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用於核酸的研究中。

蛋白質和核酸會根據pH不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據這個原理可將其分開。電泳緩沖液的pH在6~9之間，離子強度0.02~0.05為最適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支持物。

瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的DNA片段，其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低，但它制備容易，分離范圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb，利用脈沖電泳，可分離高達10^7bp的DNA片段。

DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高於等電點的pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。

Ⅳ 低熔點瓊脂糖凝膠怎麼配製

瓊脂糖凝膠的配製
⑴瓊脂糖凝膠的制備：稱取0.3g瓊脂糖，置於三角瓶中，加入30ml TBE或TAE緩液，置於三角瓶中，加入30ml TBE或TAE緩液，置於三角瓶中，加入30ml TBE或TAE緩液，將該三角瓶置於微波爐加熱至瓊脂糖溶解。將冷卻至65℃左右的瓊脂糖凝膠液，加入溴化乙錠，充分混勻。

⑵膠板的制備：

①取有機玻璃內槽，洗凈、晾乾；

②將有機玻璃內槽置於一水平位置模具上，安好擋板，放好梳子。吸取少量瓊脂糖溶液封固膠膜邊緣，任其凝固，在距離底板0.5～1.0mm的位置上放置梳子，以便加入瓊脂糖後可以形成完好的加樣孔。如果梳子距離玻璃板再近，則拔出梳子時孔底將有破裂的危險，破裂後將使樣品在凝膠與玻璃板之間滲漏。

③將剩餘的溫熱瓊脂糖溶液倒入膠膜中，使膠液緩慢地展開，直到在整個有機玻璃板表面形成均勻的膠層。凝膠的厚度在3～5mm之間，檢查一下梳子的齒下或齒間是否有氣泡。

④室溫下靜置30min左右，待凝固完全後，輕輕拔出梳子，在膠板上即形成相互隔開的上樣孔。制好膠後將鋪膠的有機玻璃內槽放在含有0.5～1×TAE（Tris-乙酸） 或TBE（Tris-硼酸）工作液的電泳槽中使用，沒過膠面1mm以上。

（註：溴化乙錠是一種強烈的誘變劑並有中度毒性。使用含有該染料的溶液時必須戴手套。使用完後應該進行凈化處理。通常用水配製成10mg／ml的貯存液在室溫下避光儲存，使用終濃度為0.5μg／ml。）

Ⅵ 如何配製1%瓊脂

取1g的瓊脂糖溶解在100ml的TBE(0.5%)中煮沸兩次,然後等涼一會再倒平板就好啦

Ⅶ 怎麼配置1%瓊脂糖膠

1、制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml):稱取0.7 g(0.5 g)瓊脂糖置於錐形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小燒杯.微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻,即成1.0%瓊脂糖凝膠液。

2、膠板制備:取電泳槽內的有機玻璃內槽(制膠槽)洗干凈,晾乾,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內槽兩端邊緣封好,形成模子.將內槽置於水平位置,並在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內槽玻璃板上,使膠液緩慢展開,直到整個玻璃板表面形成均勻膠層。

3、室溫下靜置直至凝膠完全凝固,垂直輕拔梳子,取下膠帶,將凝膠及內槽放入電泳槽中。添加1×TAE電泳緩沖液至沒過膠板為止。

(7)配製瓊脂糖的步驟方法擴展閱讀：

儲藏溫度:常溫

商品名很多，常見的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美國Bio-Rad）等。瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網狀結構，網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下，它的結構是穩定的，可以在許多條件下使用（如水，pH4-9范圍內的鹽溶液）。

瓊脂糖凝膠在40℃以上開始融化，也不能高壓消毒，可用化學滅菌活處理。

瓊脂糖 Agarose，縮寫為AG，是瓊脂中不帶電荷的中性組成成份，也譯為瓊膠素或瓊膠糖。瓊膠糖化學結構由β-D-吡喃半乳糖(1-4)連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基單位構成.

把瓊脂糖，即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂，溶於熱水，冷卻製成的凝膠。製成的小顆粒用於凝膠過濾。適於用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細胞顆粒、病毒等。

利用其吸附性小的特點，有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內沉降反應的支持物。

Ⅷ 瓊脂糖凝膠怎麼配製

把瓊脂糖，即幾乎不含硫酸根的主要成分為多糖的瓊脂，溶於熱水，倒入玻璃杯中，冷卻製成的凝膠。融化後在37°C下可維持液態數小時，30°C時凝固成膠。即完成瓊脂糖凝膠的配置。

製成的小顆粒用於凝膠過濾，適於用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點，有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內沉降反應的支持物。

(8)配製瓊脂糖的步驟方法擴展閱讀：

瓊脂糖分為一般瓊脂糖和經化學修飾後熔點降低的低熔點瓊脂糖，瓊脂糖的熔點在62〜65°C之間，多用於對染色體DNA在凝膠內進行原位酶切及DNA片段回收。瓊脂糖凝膠由於孔徑大常用於大分子蛋白質、DNA的分離。

瓊脂由瓊脂糖和瓊脂果膠兩部分組成：

作為膠凝劑的瓊脂糖是不含硫酸酯的非離子型多糖，是形成凝膠的組分，其大分子鏈鏈節著1，3苷鍵交替相連的β-D-半乳糖殘基和3,6-內醚-L-半乳糖殘基 。而瓊脂果膠是非凝膠部分，是帶有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的復雜多糖，也是商業提取中力圖去掉的部分。

商品瓊脂一般帶有2%～7%的硫酸酯，0%～3%的丙酮酸醛及1%～3%的甲乙基。在工業上的瓊脂 色澤由白到微黃，具有膠質感，無氣味或有輕微的特徵性氣味，瓊脂不溶於冷水，易溶於沸水。

瓊脂系選用優質天然石花菜、江蘺菜、紫菜等海藻為原料，採用科學方法精煉提純的天然高分子多糖物質。

瓊脂為親水性膠體，分有條狀和粉末狀，不溶於冷水，易溶於熱水。瓊脂在工業上具有獨特的重要性，瓊脂的濃度即使低至1%仍能形成相當穩定的凝膠，是食品工業、化學工業、醫學科研所必需之原料。

Ⅸ 如何配製2%瓊脂糖溶液

秤一克瓊脂糖，加100毫升蒸餾水。
但是，一般跑電泳的時候，需要加tae緩沖液，50×tae加2毫升，再加98毫升蒸餾水。
配瓊脂糖，差一兩毫升沒什麼影響的，我們實驗室用的是百分之二的。

Ⅹ 1.2%瓊脂糖怎麼配

瓊脂糖凝膠的配製是分子實驗室比較基本的操作，因此正確地操作對整個實驗來講很有必要，大體流程如下：稱量、熔膠、倒膠、拔梳。
要進行一個稱量進行配置。
1.稱量 我們通常所說的0.8%、1%的膠都是指的質量體積分數，即所稱取的瓊脂糖粉的質量（g）比所加的TBE緩沖液的體積（mL）即膠的濃度。緩沖液的體積根據膠板的大小而定。如小膠板0.8%的膠需要瓊脂粉0.104g，TBE13mL。