hplc的方法哪裡可以查到

Ⅰ 四乙醯植物鞘氨醇(TAPS),你查一查這個HPLC如何檢測

摘要 HPLC的靈敏度可定義為：一、定量的物質，通過HPLC的檢測器時，儀器所給出的信號大小就叫做該HPLC的靈敏度，有時也稱為響應值。對使用者來講，總是希望HPLC儀器有較高的靈敏度，因為靈敏度高，就意味著對等量的同一樣品進行檢測時，儀器有較大的輸出信號。但是，靈敏度的高低，並不能表示HPLC儀器的檢測能力。只有檢出限，才能表示儀器的最大檢測能力。

Ⅱ 如何建立HPLC法測定有關物質的方法

一、開始之前必須明白：
1、有關物質來源的兩種途徑：
1）合成過程中的中間體和副產物；
2）儲存過程中產生的降解產物；
2、分析你的樣品結構，熟悉樣品的基本性質；
3、樣品中可能含有的中間體；
4、樣品的基本穩定性和可能產生的降解產物；

二、准備工作
1、查閱文獻，看看是否同行已經做過類似的工作，有的話就簡單了，直接奔主題了。
2、沒有文獻（苦！），那就很是麻煩了。
1）分析結構，看看有無紫外吸收，有就比較簡單，選用紫外檢測器就行了，沒有的話那就麻煩，可以選用蒸發光散射檢測器等；
2）分析結構，看看選用何種色譜方式進行分離（正相或者反相色譜）；
3）分析結構，看看流動相該如何選擇，要不要選用一些離子對試劑。
4）分析結構。。。。。。
5）與同類產品進行比較；

三、開工（以紫外檢測為例）
1、流動相的選擇（採用粗品進行選擇）
1）、有文獻，按文獻進行優化。不過我得提醒一下，文獻的方法參考是可以的，要想完全按照他的條件做出來是很難的。
2）、沒有文獻。。。。。。
a、紫外掃描一下，看看哪裡有最大吸收。將能得到的中間體、副產物、分解產物、樣品配成相同濃度，在紫外掃描分光光度計上掃描一下，選擇所有物質具有相同的最大吸收處的波長作為測定波長。要是有pda檢測器就不需要這一步了。
b、還是得找一些資料，看看類似的樣品的流動相，以它為起始流動相進行選擇，如果沒有，那就找專業書吧，看看它是怎麼教你選擇流動相的。
2、最低檢測限
3、系統適應性試驗
重復進樣5次，記錄色譜圖，給出系統評價報告
4、考察中間體及副產物和樣品的分離度。同時定出中間體在色譜圖中的出峰位置，為定質量標准提供依據。
5、考察降解產物和樣品的分離情況。
這個一般是通過破壞性試驗來考察。常用的一般是高溫、強光、氧化、強酸、強鹼五個因素進行考察，通過考察，應該可以知道色譜圖中那些峰是由於什麼因素產生，這個也可為定質量標准提供依據。
6、根據上面的試驗，應該可以知道樣品的一些大概情況了，樣品中有哪些雜質應該比較明確了。現在對三批樣品進行測定，通過歸一化來觀察，應該可以知道雜質的大概情況，根據這個可以定出相應採用自身對照法測定的雜質限量。一般情況下還應定出最大的單一雜質限量。如果樣品中的雜質可以很好得到純品，那麼你就可以採用外標法來准確定量。
7、雜質的限量必須根據你的樣品本身性質來定。

Ⅲ 請問HPLC是做什麼的原理操作方法

HPLC是高效液相色譜，英文全稱是High Performance Liquid Chromatography。該方法在化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中被用來做重要的分離分析技術。

用途：高效液相色譜更適宜於分離、分析高沸點、熱穩定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質，因而廣泛應用於核酸、肽類、內酯、稠環芳烴、高聚物、葯物、人體代謝產物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除莠劑的分析等物質的分析。

原理：高效液相色譜以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析和分離。

操作方法：如下圖所示，溶劑貯器中的流動相被泵吸入，經梯度控制器按一定的梯度進行混合然後輸出，經測其壓力和流量，導入進樣閥（器）經保護柱、分離柱後到檢測器檢測，由數據處理設備處理數據或記錄儀記錄色譜圖，餾分收集器收集餾分，廢液瓶收集廢液。

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液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上，於60年代後期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。

HPLC根據固定相和流動相的成分分為正相色譜和反向色譜。

正相色譜法

採用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用於分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。

反相色譜法

一般用非極性固定相（如C18、C8)；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用於分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個HPLC應用的80%左右。

參考資料：網路-高效液相色譜

Ⅳ 高效液相色譜的使用方法

高效液相色譜儀操作步驟如下：
1)．
過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜.
2)．
對抽濾後的流動相進行超聲脫氣10-20分鍾。
3)．
打開hplc工作站（包括計算機軟體和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統。
4)．
進入hplc控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。
5)．
有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。
6)．
調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。
7)．
設計走樣方法。
8)．
進樣和進樣後操作。
9)．
關機時，先關計算機，再關液相色譜。
10)．
填寫登記本，由負責人簽字。
11)．
流動相均需色譜純度，水用20m的去離子水。
12)．
柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。
13)．
所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。
14)．
壓力不能太大，最好不要超過2000
psi。
高效液相色譜法（HPLC）又稱「高壓液相色譜」、「高速液相色譜」、「高分離度液相色譜」、「近代柱色譜」等。它是在生化和分析化學中常用的柱層析儀。
高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。
該方法有效方便快捷地解決化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中得出想要的數據，成為重要的分離分析技術。

Ⅳ HPLC原理及基本操作是什麼

原理

高效液相色譜法儀根據各種各樣的相互作用力來分離混合物。這種相互作用力通常是分析物及分析管柱之間的一種非共價性質。

使用高效液相色譜時，液體待檢測物在不同的時間被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由於被測物中不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，每個峰頂都代表一個另外化合物的種類，最後通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。

以液體為流動相而設計的色譜分析儀器稱為液相色譜儀。採用高壓輸液泵，高效固定相和高壓靈敏檢測器等裝置的液相色譜儀成為高效液相色譜儀。高效液相色譜儀種類繁多，但不論何種類型的高效液相色譜儀，基本上都分為4個部分：高壓輸液裝置，進樣系統，分離系統和檢測系統。

操作

將要分離和分析的樣品混合物以不連續的小體積（通常為微升）引入滲透通過色譜柱的流動相流中。樣品的組分以不同的速度通過色譜柱，這是與吸附劑（也稱為固定相）的特定物理相互作用的函數。每個組分的速度取決於其化學性質，固定相（柱）的性質以及流動相的組成。

特定分析物洗脫（從色譜柱中出現）的時間稱為其保留時間。在特定條件下測得的保留時間是給定分析物的識別特徵。

可以使用許多不同類型的色譜柱，其中填充了粒徑，孔隙率和表面化學性質各異的吸附劑。使用較小的顆粒尺寸的包裝材料需要使用較高的操作壓力（「背壓」）的和通常改善的色譜解析度（連續的分析物從柱中出現的峰之間的分離度）。吸收劑顆粒本質上可以是疏水的或極性的。

常用的流動相包括水與各種有機溶劑的任何混溶性組合（最常見的是乙腈和甲醇）。一些HPLC技術使用無水流動相（請參見下面的正相色譜法）。

流動相的水性成分可能包含酸（例如甲酸，磷酸或三氟乙酸）或鹽以幫助分離樣品成分。在色譜分析過程中，流動相的組成可以保持恆定（「等度洗脫模式」）或變化（「梯度洗脫模式」）。等度洗脫通常在分離與固定相親和力非常不同的樣品成分時非常有效。

在梯度洗脫中，流動相的組成通常從低到高洗脫強度變化。流動相的洗脫強度由分析物的保留時間反映，高洗脫強度可產生快速洗脫（=較短的保留時間）。

反相色譜中的典型梯度曲線可能始於5％的乙腈（在水或水性緩沖液中），然後在5–25分鍾內線性增長至95％的乙腈。恆定流動相組成的周期可以是任何梯度曲線的一部分。例如，流動相的組成可以在5％的乙腈中保持1-3分鍾，然後線性變化直至95％的乙腈。

流動相的選定組成取決於各種樣品組分（「分析物」）和固定相之間的相互作用強度（例如，反相HPLC中的疏水相互作用）。根據它們對固定相和流動相的親和力，在色譜柱中進行分離過程中，分析物會在兩者之間分配。

此分配過程類似於液-液萃取過程中發生的分配過程，但該過程是連續的，而不是逐步進行的。在此示例中，使用水/乙腈梯度洗脫，一旦流動相在乙腈中的濃度更高（即，在洗脫強度更高的流動相中），則更多的疏水性組分將較晚洗脫（從色譜柱中洗脫）。

流動相組分，添加劑（例如鹽或酸）和梯度條件的選擇取決於色譜柱和樣品組分的性質。通常對樣品進行一系列的試驗，以便找到可以充分分離的HPLC方法。

用途

高效液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應用於化學和生化分析中，常用於醫葯品、化學、環保、生命科學、與食品工業的研究上。

高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，它的特點是採用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，可將液體混合物中的成分分離、成分定性及定量分析。適於分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。例如：可檢測分析食品中的三聚氰胺的含量。

Ⅵ 誰能告訴我，HPLC的中葯對照品的價格，去哪裡查啊比如蘆丁啊之類的！

告訴你准確地址：中國生物製品鑒定所，是法定的出售中葯對照品和對照葯材的機構。

Ⅶ HPLC方法確認做哪些內容

對於方法學來說，應該叫驗證（Validation）。具體的內容建議你參照ICH的Q1R（也許是Q2R，記不太清了），對於含量測定、雜質檢查、鑒別等各有不同的詳細規定（在網上可以查到）。
對於HPLC儀器來說，應該叫確認（Qualification）。項目可多可少，比如：流量准確性，梯度准確性，控溫精度，進樣精密度，進樣器線性，進樣器殘留，紫外檢測器的波長准確度，吸收度准確度，檢測器線性范圍，基線噪音，漂移等等。

Ⅷ HPLC法中定量分析方法大致有哪幾種

氣相色譜定量檢測一般就兩種，一個是外標法，一個是標法，對於沒有標准物質的，就只能靠容面積歸一法粗略定量。

通過對人類和環境有影響的各種物質的含量、排放量的檢測，跟蹤環境質量的變化，確定環境質量水平，為環境管理、污染治理等工作提供基礎和保證。簡單地說，了解環境水平，進行環境監測，是開展一切環境工作的前提。

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HPLC根據固定相和流動相的成分分為正相色譜和反向色譜。

正相色譜法

採用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用於分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。