使萬民作主門徒聚體方法和步驟

⑴ 簡述RT-qPCR的原理,簡要說明其操作步驟及在臨床科研中的應用

摘要 提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，採用0ligo (dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR 使測的靈敏性提高了幾個數量級，使- - 些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用於:分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。

⑵ DNA粗提取實驗步驟

一 教學目的
1.初步掌握DNA的粗提取和鑒定的方法。
2.觀察提取出來的DNA物質。
二 教學建議
在本實驗的教學中，教師應注意以下幾點。
1.實驗材料必須准備充足。本實驗所用的實驗材料是雞血細胞液,由活雞的鮮血經沉澱後獲得。每組(2個學生)需用5 mL 雞血細胞液,則每班(50人)至少需要130 mL,而雞血細胞液與雞血的體積比為1:3,這樣每班至少需要390 mL 雞血細胞液。宰殺1隻中等大小的活雞,一般可得120 mL 左右的鮮血,因此,1個班實驗需要買4隻活雞。如果不具備購買活雞的條件,也可以到市場售活雞處去索取雞血,但所帶燒杯中必須提前放入抗凝劑。
2.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。雞血細胞破碎以後釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由於細胞內DNA的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就會更少。因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中DNA的損失。
3.獲取較純凈的DNA的關鍵步驟。
(1)充分攪拌雞血細胞液DNA存在於雞血細胞的細胞核中。將雞血細胞液與蒸餾水混合以後,必須用玻璃棒沿一個方向快速攪拌,使雞血細胞加速破裂,並釋放出DNA。
(2)沉澱DNA時必須用冷酒精實驗前必須准備好大量的體積分數為95%的酒精,並在冰箱(至少5S以下)中至少存放24 h。
(3)正確攪拌含有懸浮物的溶液實驗步驟3、5、7,都需要用玻璃棒攪拌。教師應提醒學生注意,在進行步驟3、5時,玻璃棒不要直插燒杯底部,而且攪拌要輕緩,以便獲得較完整的DNA分子。進行步驟7時,要將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間,用手緩慢轉動510 min。
三 參考資料
實驗原理的補充介紹
1.DNA的釋放 DNA位於雞血細胞的細胞核中,正常情況下不會釋放出來。為了使DNA從細胞核中釋放出來,實驗中採用了向雞血細胞液中加入蒸餾水並且攪拌的方法。蒸餾水對於雞血細胞來說,是一種低滲液體,水分可以大量進入血細胞內,使血細胞破裂。同時,再加上攪拌的機械作用,就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂),於是釋放出DNA,當然也有RNA。但是,釋放出來的大量DNA和RNA往往與蛋白質結合在一起。
2.將DNA與蛋白質分離 根據二者的特性,即在濃度較高的氯化鈉溶液(物質的量濃度為2 moL/L )中,核蛋白容易解聚,游離出DNA。而DNA在濃度較高的氯化鈉溶液中的溶解度很高,Na+與帶負電的DNA結合成DNA鈉鹽。這時DNA在溶液中呈溶解狀態。
3.DNA的析出與獲取 利用DNA在濃度較低的氯化鈉溶液中溶解度小的原理,向含有DNA的濃度較高的氯化鈉溶液中加入大量(300 mL )蒸餾水,稀釋氯化鈉溶液,使DNA的溶解度下降,而蛋白質的溶解度增高(這就是蛋白質的鹽溶現象),從而使二者分離。這時,加上不停地攪拌,溶解度下降的DNA逐漸呈絲狀物。再通過過濾,濾去蛋白質,就可以獲取DNA的黏稠物了。如果採用離心法則更好,用4 000 r/min 的旋轉頻率,離心15 min ,除去上清液(含有蛋白質),留下的沉澱物中含DNA。
4.DNA的再溶解 再用較高濃度的氯化鈉溶液去溶解DNA黏稠物。
5.DNA的沉澱和濃縮 除去了蛋白質的核酸溶液,必須再進一步沉澱和濃縮。最常用的方法是酒精沉澱法。就是將含有Na+的DNA溶液,加入到相當於其兩倍體積的體積分數為95%冷酒精溶液中,混勻以後可以使DNA沉澱、濃縮,形成含雜質較少的DNA絲狀物,懸浮於溶液中。如果出現的絲狀物較少,可以將此混合液再放入冰箱中冷卻幾分。濃縮後的DNA絲狀物,可以用緩緩旋轉玻璃棒的方法捲起(因為玻璃棒有吸附DNA的作用)。
6.DNA的鑒定 本實驗中鑒定DNA的方法為二苯胺法(配方見下述的「葯品配製」)。二苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脫氧核糖遇酸生成ω-羥基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而顯現藍色(溶液呈淺藍色)。
鑒定時溶液藍色的深淺,與溶液中DNA含量的多少有關。
二苯胺試劑的配製
A液： 15 g二苯胺溶於100 mL 冰醋酸中,再加15 mL濃硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈結晶狀態,則需加溫後待其熔化,再使用。
B液： 乙醛的體積分數為0.2%的溶液。
配製： 將0.1 mL B液加入到10 mL A液中,現配現用。
DNA粗提取與鑒定的另一種方法
1.材料用具
新鮮菜花(或蒜黃、菠菜)。
塑料燒杯,量筒,玻璃棒,尼龍紗布,陶瓷研缽,試管,試管架,試管夾,漏斗,酒精燈,石棉網,三角架,火柴,刀片,天平。
研磨液,體積分數為95%的酒精溶液,二苯胺試劑,蒸餾水。
2.方法步驟
(1)DNA的粗提取
①准備材料 將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24 h。
②取材 稱取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 將碎菜花放入研缽中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1 000r/min的旋轉頻率,離心25 min,取上清液放入燒杯中)。在4 ℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。
⑤加冷酒精 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35 min後,可見白色的DNA絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。
(2)DNA的鑒定
①配製二苯胺試劑 取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混勻。
②鑒定 取4 mL DNA提取液放入試管中,加入4 mL 二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100 ℃)加熱10 min 。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
研磨液的配製方法
Tris：10.1 g(相對分子質量為121.14),先加50 mL 蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2 moL/L 的鹽酸調至pH8.0,再加下述葯品。
NaCl：8.76 g(相對分子質量58.44)
EDTA：37.2 g(相對分子質量372.24)
SDS：20 g(相對分子質量288.3)
待上述葯品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1 000 mL。
若在室溫低於20 ℃時配製葯液,SDS呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將SDS溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。
研磨液中幾種葯品的作用
SDS(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與DNA分離。
EDTA(乙二胺四乙酸二鈉):為DNA酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後DNA酶降解DNA。
物質的量濃度為0.15 moL/L的氯化鈉溶液：能很好地溶解DNA。
Tris/HCl：提供緩沖體系,DNA在這個緩沖體系中呈穩定狀態。(Tris為三羥甲基氨基甲烷)
鑒定DNA的其他方法 用紫外燈照射法鑒定DNA效果很好。具體鑒定方法如下。
1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(EB)溶液。
2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴EB溶液染色。
3.將蠟紙放在紫外燈(260 nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm處)。

⑶ 健美操編排的方法與步驟

一、先定音樂，後編動作

音樂是健身健美操的靈魂，它直接影響健身健美操的風格、結構、速度、節奏。音樂選配得好不僅容易激發創編者的創作靈感，還能激發學生的鍛煉熱情。

二、編排動作的全面性

全面發展身體是健身健美操的鍛煉宗旨。為了達到這個目的，在創編健身健美操時，一方面考慮健美操的動作設計講究對稱。

三、編排動作的觀賞性

根據不同年齡的人群，一套健身健美操的難易度是不一樣的。高中女生的協調性較好，接受能力較強。

四、編排動作的合理性

根據人體運動的生理規律，成套健美操的動作順序一般分為三個部分：第一部分預備動作、第二部分主體動作、第三部分整理動作。

五、編排動作的藝術性

健美操具有較強的藝術魅力，因此整套操的動作風格包括音樂的選擇要符合高中生的身心特點。

(3)使萬民作主門徒聚體方法和步驟擴展閱讀：

單人動作的編排方法，在編排單個動作時應注意：

1、不同形式的做法。 如果編制行進操，可用1步、1 拍、1拍1動來做，還可走4步4拍，站立做4拍動作。編制定位操一般採用站立做，還可採用蹲、撐、坐和前後左右小移動來做。

2、身體各部分合理配合。每節健美操單個動作都要有主要部分，如髖部動作，髖部動作是主要的動作，應由它為主，上肢和下肢為配合部分，配合部分的動作應吸取於主要的動作的完成。

3、採用不同的做法。用一個動作採用不同做法如臂繞環動作，左右臂依次繞環，同時繞環。

4、選擇不同方向的組合。兩臂繞環動作，可採用不同方向的繞環，如臂下垂開始向內繞環；向外繞環；向內和向外繞環相結合；向前繞環；向後繞環；向前和向後繞環相結合等。

5、選擇不同重復次數的組合。體側屈動作可採用不同重復次數，如4拍1節動作中，體側屈1次、2次或3次等，根據對象，運動負荷大小不同，所起的效果也不大一樣。

6、選擇不同類動作的組合。一節操，某一類動作組合或兩類以上的組合，如下肢運動全用踢腿；或全用壓腿；或壓腿和踢腿相結合。

⑷ 特性要因圖它的做成步驟和作用

一、製作步驟

方法一：

第一步，簡明扼要的確定結果，即確定需要解決的質量間題。

自左向右畫一粗橫線代表主骨，並將評價特性寫在箭頭右邊。以「兩插保護門難插」為例。

二、作用

1、有利於找到問題的原因所在，然後對症下葯，解決問題。

2、可以由項目小組或者和那些實際上關心項日流程的人.員一起完成。

3、使我們問自己:問題為什麼會發生……使項日小組聚焦於問題的原因，而不是問題的症狀。

4、能夠集中於問題的實質內容，而不是問題的歷史或不同的個人觀點。

5、使組員了解項日小組在圍繞某個問題時產生的集體智慧和意.見，有助於找到有效的解決方案。

(4)使萬民作主門徒聚體方法和步驟擴展閱讀：

特性就是長度，進度，不良率等代表製品、品質特性的簡稱。此外它也是代表管製品的性能及運轉能力，製品是我們的結果，特性則是表示工作的結果，因此品質管理把特性當作結果。

要因就是重要的原因，表示製品品質的特性會因許多原因而變化。不過在所有原因中被認為會影響特性者則視為要因，並記入特性要因圖中。

特性要因圖因其形狀很像魚骨，故亦稱為魚骨圖，他是在推行全公司QC活動時，所有參與人員均非常熟悉的手法。

特性要因圖是品管權威石川馨先生所創始的手法，所以國外亦有稱石川圖，已成為全世界均在活用的手法。

⑸ 小學語文閱讀理解答題步驟、方法和技巧，你認為有哪些

小學語文閱讀理解答題步驟、方法和技巧，你認為有哪些？

引言：小學生的語文閱讀理解一般是比較簡單的，都會有一些固定的模式，那麼今天我們來講一下對於小學語文閱讀理解的答題步驟，以及它的方法技巧，都有哪些？今天小編帶大家來了解一下。

三、多讀文章內容

無論是別的題目還是語文的閱讀理解，首先我們一定要通讀文章內容，如果不去讀文章內容的話，那麼做題的的時候，就無法根據文章意思來作答。只有通讀了文章大意，才可以快速的做出答案。如果對於文章的內容第1遍讀不懂，那麼一定要多加讀幾遍。在解答閱讀理解的題目時，一定不要慌張不要急躁，要完全用心去感受文章內容，才能更能理解作者在文章中要表達的內容，解題的方面上也會有所提升。

⑹ 電腦版美篇的製作方法和步驟

美篇是南京藍鯨人網路科技有限公司於2015年7月推出的一款圖文編輯工具。美篇支持插入圖片、背景音樂和視頻，可任意排版，為用戶創造流暢的創作體驗。
那美篇該怎麼製作？下面和大家分享一下。
開啟分步閱讀模式
操作方法
01
打開美篇APP，創建「圖文」美篇：在下方功能欄里點擊【+】，選擇【圖文】進入創建界面。
點擊【圖片】後會自動打開本地相冊，選擇你喜歡的照片後點擊【確定】。

02
注意：你選擇照片的順序也將會是你編輯內容的順序。
但如果你對順序不滿意，也可以長按段落並拖曳可調整順序。

03
圖片添加成功後，可以在圖片後面點擊添加文字。輸入你想添加的文字，然後點擊完成即可。（文字的大小、粗細、顏色都可以進行調整）

04
點擊【設置文章標題】，輸入你想設置的標題後點擊完成

05
標題設置成功後可以點擊【預覽】查看效果，效果欄頁還可以進行音樂的添加。
點擊【音樂】可以直接選擇推薦的音樂，然後點完成 。也可以點擊【我的】，自動打開存儲的音樂，然後點擊完成 。也可以搜索在線音樂，輸入你想要搜索的歌曲名或者歌手的姓名，然後選擇後點擊完成。

06
點擊「完成」發布美篇。發布成功後，可對封面進行更換。
一般默認首張圖片為封面，如果你不喜歡，可以點擊【更換封面】，然後重新選擇封面圖片。要是當前照片都沒有滿意的，可以點擊右下角【上傳封面】重新在相冊中選擇照片，選好後點擊【確定】，再點擊【完成】即可。

07
如果需要發送到朋友圈可以選擇【分享】，並點擊【朋友圈】進行分享。
美篇怎麼製作一圖多圖

太平洋電腦網
聊聊硬體，聊聊互聯網
現在製作相冊的手機軟體有許多，製作多圖的相冊也相當的方便，下面就以美篇為例給大家介紹一下美篇怎麼製作一圖多圖。

美篇怎麼製作一圖多圖

步驟1、手機瀏覽器輸入【美篇下載】，點擊【立即下載】，點擊【安裝】；

步驟2、打開美篇，點擊美篇首頁下部中間的圈圈加號+，如下圖；

步驟3、進去從手機相冊里選取要製作美篇的圖片，點要選的圖片使圖片右上角的對號√變色即是選中，將所需的照片都選好，點右上角的【完成】如下圖；

步驟4、點左上角【點激設置標題】如下圖；

步驟5、輸入作的美篇標題文字，如：曲阜師范大學，點右上角【完成】如下圖；

步驟6、點添加音樂從已有的音樂或點下部搜索網上音樂，選取陪加音樂，點【完成】如下圖；

步驟7、點下部的【模版】，滑動下部的模版式樣，選取滿意的版式，點模版條上的【完成】；

步驟8、點下部的【下一步】，按照要求設置，點【完成】，如果還要添加文字或圖片，就點右上角的【操作】，點第一個【編輯】，進去添加文字圖片頁面，按前面操作步驟；

步驟9、如果滿意完成，要發給朋友，點右下角的【分享】；

以上就是美篇怎麼製作一圖多圖的步驟，希望對大家有所幫助。

⑺ 相貫線的作圖步驟是什麼求作兩回轉體表面的相貫線常用哪兩種方法

如下：

1、相貫線的作圖步驟：

（1）求特殊點；

（2）求一般位置點；

（3）連線。

2、兩回轉體表面的相貫線常用方法：表面取點法、輔助平面法。

用圓柱面的積聚性法作相貫線

兩回轉體相交，如果其中有一個是軸線垂直於投影面的圓柱，則相貫線在該投影面上的投影，就積聚在圓柱面得有積聚性的投影上，於是求圓柱和另一回轉體的相貫線投影，可以看作是已知另一回轉體表面上的線的一個投影，求作其他投影的問題。

這樣，就可以在相貫線上取一些點，按已知回轉體表面山的點的一個投影求其他投影的方法，作出這些點，順次連接這些點的同面投影，即可作出相貫線的投影。